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《第三军医大学》 2005年
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新生实验小型猪肝细胞用于生物人工肝的基础实验研究

张世昌  
【摘要】:肝细胞是生物人工肝(Bioartificial liver,BAL)的核心材料,BAL对肝功能衰竭患者的肝支持作用几乎完全依赖于所用肝细胞的生物学功能。由于人肝细胞来源的匮乏、胎肝细胞的伦理问题、肝细胞株的瘤源性等原因,使猪肝细胞成为BAL研究和应用最多的细胞,成功的临床报道愈来愈多,并已进入Ⅱ/Ⅲ期临床研究。但有关BAL系统中肝细胞材料、物质交换以及肝细胞的保存和运输等方面依然存在诸多尚未彻底解决的问题。 本实验观察原代培养乳猪肝细胞的生长增殖特性,检测乳猪肝细胞的合成功能和生物转化功能,以评价乳猪肝细胞是否适用于BAL;使用体外循环细胞悬液的方法,观察循环状态下乳猪肝细胞形态和功能的变化,为解决物质交换而构建双向循环系统提供实验依据;采用亚低温培养乳猪肝细胞,观察复温前后肝细胞形态和功能的变化,评价亚低温和亚低温培养时间对肝细胞的影响,为BAL探索一种方便有效的肝细胞保存和运输方法。 实验方法和结果如下: 1.采用RPMI-1640细胞培养液培养乳猪肝细胞,观察肝细胞形态和数量的变化,检测乳猪肝细胞白蛋白合成、尿素合成、氯化铵清除、7-甲氧基-试卤灵和P-硝基苯酚转化情况,并与胎肝细胞进行对比分析。结果发现体外培养的乳猪肝细胞可增殖7倍以上,其生长曲线有明显的对数生长期和停滞期,未见明显的潜伏期。培养过程中,乳猪肝细胞尿素合成率、氨清除率、细胞色素P450系统(Cytchrome P450,CYP)活性显著高于胎肝细胞,以及较高的尿苷二磷酸葡萄醛酸基转移酶(UDP-glucuronyl transgerases,UGT)活性,提示乳猪肝细胞具有较强的增殖能力和较好的合成功能、生物转化功能。 2.利用Cello培养循环式人工毛细管培养装置构建肝细胞循环系统,以50ml/min的流速循环乳猪肝细胞悬液,分别观察循环状态下肝细胞形态、活力、功能等的变化。结果显示:循环4h后,乳猪肝细胞的活力和贴壁率下降,分别为76.1±1.4%、62.8
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R575

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