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《第三军医大学》 2005年
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脂多糖结合蛋白抑制肽对内毒素诱导的U937细胞和内毒素血症小鼠的作用及机制研究

吴学玲  
【摘要】:内毒素又称脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),是革兰阴性细菌外膜的主要成分。内毒素血症及与其有关的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)、急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory dysfunction syndrome,ARDS)和多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)是病人感染死亡的重要原因。脂多糖结合蛋白(LPS-binding protein,LBP)在炎症中具有双刃剑的作用,一方面,当LBP 的致炎位点与LPS 的类脂A 结合时,表现为信号跨膜转导,核转录因子激活,炎症介质生成,导致过激炎症反应发生;另一方面,当LBP 的抗炎位点与LPS 的类脂A 结合时,LBP将LPS 传递给脂蛋白或靶细胞,使LPS 被中和或者被靶细胞清除,表现为抗炎作用。因为LBP 作用的双重性,应用LBP 或抗LBP 抗体治疗内毒素血症均有一定的局限性,所以若仅阻断LBP 的致炎作用、保留其抗炎作用,则能提高内毒素血症的治疗效果。我们实验室用噬菌体随机12 肽库筛选获得了可与LBP 竞争结合LPS 的噬菌体克隆,其核心序列与LBP 的91~102 位氨基酸(WKVRKSFFKLQG)有明显同源性,推测该位点为LBP 的致炎位点。应用FMOC 固相法合成12 肽WKVRKSFFKLQG-NH2,即为LBP 抑制肽(简称P12)。推测LBP 抑制肽能与LBP 的致炎位点竞争结合LPS,从而起抗炎作用。基于上述假说和以前的研究基础,我们进一步就LBP 抑制肽对内毒素诱导的U937 细胞和内毒素血症小鼠的作用及机制进行探讨。 一、实验方法:本实验包括体内和体外两部分。 1.体外试验:以人单核巨噬细胞株U937 细胞为研究对象。根据实验设计方案,U937 细胞被分为对照组、LPS 组(分为100 ng/ml 的小剂量组和1μg/ml 的大剂量组)及P12 组(分为小、中、大剂量组)。 (1) 夹心ELISA 检测P12 与LPS 的相对亲和力。 (2) 流式细胞检测分析(FACS)异硫氰酸荧光素标记的LPS(FITC-LPS)与U937细胞的结合。 (3) RT-PCR 和Western blotting(WB)检测U937 细胞膜受体CD_(14) 和跨膜受体钟
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R363

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 魏麟;猪LBP和BPI基因多态性及其蛋白质N端功能研究[D];湖南农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 胡莉;ApoA-I对LPS诱导的内毒素血症小鼠的治疗作用的研究[D];南华大学;2010年
【参考文献】
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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3 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
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5 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
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8 马珺;陈云霜;王爱善;李仲逵;;珍稀鸟类东方鹳的性别鉴定[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
9 马勋;陆承平;;猪戊型肝炎病毒新疆分离株全基因序列的分析[A];中国科协2005年学术年会“新疆现代农业论坛”论文专集[C];2005年
10 吴晓娟;冷梅;赵大鹏;崔颖杰;张岩;汪春义;戚凤春;郭新;付学奇;;带有IL-2基因佐剂的乙肝病毒DNA疫苗构建及其免疫效果的观察[A];2006年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 关爽;红景天苷的抗炎作用及其对炎症信号转导通路的调控[D];吉林大学;2011年
2 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
3 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
4 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
5 崔俊;c-fms癌基因异常激活机制及携带AFP增强子反义c-fms与肝癌的研究[D];第一军医大学;2000年
6 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
7 刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
8 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
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10 吴健;肝移植病人乙型肝炎病毒再感染的临床和基础研究[D];浙江大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴春芳;牙周致病菌Pg-LPS对组织特异性单核/巨噬细胞膜表面受体表达影响的研究[D];福建医科大学;2011年
2 杨丽娜;内毒素移位在肠淋巴再灌注加剧SMAO休克大鼠多器官损伤中的作用[D];河北北方学院;2011年
3 刘波;稻蝗及其近缘属部分种RAPD多态性及中华稻蝗种群遗传多态性研究[D];陕西师范大学;2000年
4 郭巍;苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因克隆及表达的研究[D];东北农业大学;2000年
5 刘怀然;鸡传统性法氏囊病抗独特型抗体疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
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7 桑红;新生隐球菌产黑素野生株与白化突变株酚氧化酶结构基因(CNLAC1)的比较研究[D];第二军医大学;2000年
8 杜德伟;乙型肝炎病毒DNA免疫的实验研究[D];第四军医大学;2000年
9 吴振龙;副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的克隆、突变研究[D];第一军医大学;2000年
10 熊绍虎;人骨形态发生蛋白-2在大肠杆菌中的高效表达[D];第一军医大学;2000年
【同被引文献】
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1 房廉洁,吕晓萍,董丽华;Vero细胞培养特性的研究[J];白求恩医科大学学报;2000年03期
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3 刘韧,刘萍,田昆仑,刁有芳;地塞米松对家兔内毒素休克的防治作用及其与TNF的关系[J];第三军医大学学报;2001年02期
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6 郑江,袁建成,周红,周立新,刘晓禄,肖光夏;杀菌性/通透性增加蛋白模拟肽小鼠体内拮抗内毒素作用的研究[J];第三军医大学学报;1998年06期
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8 祁克宗;程玉磊;涂健;;鸡、猪BPI氨基端的基因克隆和鉴定[J];广西农业生物科学;2006年S1期
9 魏麟;姚元枝;刘胜贵;向德标;;黔邵花猪CETP基因多态特征及其与生长性能的相关性[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2007年03期
10 冷伟建;宋勇;于宝军;施毅;;杀菌性/通透性增加蛋白和脂多糖结合蛋白基因多态性与易感性的相关研究[J];医学研究生学报;2006年06期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
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中国硕士学位论文全文数据库 前3条
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3 曹晓华;四个猪种间BPI蛋白基因外显子3和4的SNP分析[D];西南大学;2008年
【二级引证文献】
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1 何俊;仔猪腹泻相关基因GPI1的筛选及其功能研究[D];湖南农业大学;2012年
【二级参考文献】
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1 徐德斌,钱桂生,侯一峰,赵晓莉,陈维中,李淑萍;脂多糖结合蛋白功能位点分析[J];解放军医学杂志;2004年01期
2 方文成,寇治民,张有成;梗阻性黄疸大鼠脂多糖结合蛋白的变化及其意义[J];中国普外基础与临床杂志;2004年04期
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5 何娅妮,朱妙珍,蒋建新,崔莉,刘晓莉,李开龙,张建国;血液透析患者脂多糖结合蛋白/CD14的变化及其临床意义[J];中华肾脏病杂志;1997年05期
6 单于,陆大祥,王华东,戚仁斌,付咏梅,李晓娟,李楚杰;甘氨酸对脂多糖诱导LBP mRNA表达的影响[J];中国病理生理杂志;2003年07期
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8 Lepper P.M.;Schumann C.;Triantafilou K.;孙凯;;脂多糖结合蛋白与男性冠状动脉疾病的相关性[J];世界核心医学期刊文摘(心脏病学分册);2007年10期
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10 李永旺 ,麻莉,张德明,毛宝龄,钱桂生,徐剑铖;抗LBP多抗对LPS诱导的肺组织NF-κB活化的抑制作用[J];解放军医学杂志;2003年02期
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2 姚咏明;李红云;施志国;于燕;董宁;盛志勇;;烫伤后金葡菌脓毒症大鼠组织CD_(14)mRNA表达的改变[A];2000年全国危重病急救医学学术会议论文集[C];2000年
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1 张献怀;我国内毒素血症发病机理研究获突破[N];中国医药报;2001年
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2 陈锐;核糖体展示人源性scFv文库的构建及筛选抗人LBP抗体的局限性分析[D];第三军医大学;2009年
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1 樊强;脂多糖结合蛋白与冠心病的相关性研究[D];第三军医大学;2008年
2 吴丽娜;重组杀菌渗透性增加蛋白21在大鼠内毒素血症中保护机制的研究[D];中国医科大学;2006年
3 徐蓓莉;LBP/sCD14在评价肝硬化伴全身炎症反应综合征预后中的意义[D];复旦大学;2009年
4 胡明;腹部开放伤合并海水浸泡中内毒素的作用及其机制的实验研究[D];第二军医大学;2005年
5 杨丽娜;内毒素移位在肠淋巴再灌注加剧SMAO休克大鼠多器官损伤中的作用[D];河北北方学院;2011年
6 吴琼;脂多糖结合蛋白(LBP)与过氧化物酶-4(Prx4)相互作用的研究[D];湖北大学;2011年
7 罗玉兰;肝硬化自发性腹膜炎腹水中脂多糖结合蛋白的变化及意义[D];重庆医科大学;2011年
8 吴语宁;人结核病患者血清特异性抗体与CD14基因多态性相关性的初步研究[D];吉林农业大学;2013年
9 徐小明;内毒素结合肽突变体(mEBP9)的聚乙二醇定点修饰及其稳定性和拮抗内毒素效应研究[D];第三军医大学;2012年
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