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《第三军医大学》 2005年
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COX-2反义RNA与NSAIDs抑制膀胱癌细胞恶性表型的实验研究

张军卫  
【摘要】:膀胱移行细胞癌是泌尿系统中最常见的肿瘤,特点是极易复发,对放疗及化疗不敏感,而且化疗药物不能阻止膀胱癌的进展。目前肿瘤综合治疗是抗瘤治疗的方向,它可使肿瘤治疗的疗效比单纯外科治疗明显提高,同时探索肿瘤治疗的新途径一直为人们所重视。 环氧合酶(COX)是花生四烯酸转化为前列腺素(PG)和血栓烷(TXA2)的关键限速酶,COX-2是两种亚型之一,是高诱导基因,可被一些细胞因子、生长因子、肿瘤促进因子、癌基因和化学致癌物激活,被认为有导致肿瘤和炎症的作用。大量研究表明,环氧化酶-2在食管癌、胃癌、大肠癌、胰腺癌、肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等中有较高表达,并认为参与了肿瘤的发生发展。 流行病学研究显示规律的服用非甾体抗炎药物(NSAIDs)可降低结肠癌的危险性,其机制可能与抑制COX-2表达有关。塞来昔布(Celecoxib)是COX-2选择性抑制剂,是唯一经过FDA认证的可以用于家族性腺瘤息肉病的治疗,但其防治肿瘤的作用机制仍然没有完全清楚。 本研究旨在探讨人COX-2反义RNA及NSAIDs抑制膀胱癌细胞恶性表型的作用及其机制,以期为临床制定肿瘤的治疗方案提供理论依据。本实验应用基因重组技术、反义核酸技术、基因转染技术、MTT法、流式细胞术、RT-PCR、Western blot、激光共聚焦技术及裸鼠成瘤实验,对体内外膀胱癌细胞增殖与凋亡,及其与COX-2蛋白表达的相关性等进行了研究。为进一步开发和应用NSAIDs打下了实验基础,主要实验内容及结果如下: 1、COX-2反义RNA真核表达载体的构建及转导膀胱癌细胞株 通过PCR方法从含有人COX-2基因的质粒中扩增COX-2 cDNA,并通过限制性内切酶克隆于T载体(pMD18-T)EcoR I和Xba I位点之间,测序正确后,双酶切获得COX-2 cDNA,并将其反向插入pcDNA3.1中完成质粒的重组。重组质粒命名为pcDNA3.1/COX-2 as,并通过核酸测序和限制性内切酶消化证实重组反义COX-2真核
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R737.14

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