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《第三军医大学》 2005年
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EPO预处理在心肌缺氧复氧损伤中的保护作用及其NF-κB信号机制的研究

秦川  
【摘要】:研究背景和目的: EPO是一种造血生长因子,主要作用为促进红系祖细胞分裂、分化为成熟红细胞,从而增加循环红细胞数量,已广泛用于治疗肾衰、肿瘤化疗、AIDS及手术等各种原因造成的贫血。近年的研究发现,EPO具有多种非造血生物作用,其中在多种组织多种损伤因素作用下的保护效已成为目前的研究热点之一。研究发现EPOR表达于心肌细胞,提示EPO可以直接作用于心肌细胞,然而目前有关EPO心肌保护作用的研究还很少。为此,本研究通过建立大鼠缺氧复氧心肌损伤模型及培养新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,观察EPO预处理的心肌保护作用。近年的研究发现NF-κB与心肌缺血预适应及一些药物预处理的保护作用有关,且EPO可以活化NF-κB,已经发现的可能参与EPO组织保护作用的信号分子,如PI3K/Akt,MAPKs及JAK2等均可活化NF-κB,因此,本课题进一步研究了EPO预处理心肌保护作用的NF-κB信号机制。 研究方法: 本研究分为三部分: 在第一部分中,建立大鼠缺氧复氧心肌损伤模型,观察EPO预处理的心肌保护效应,同时以Western blot和免疫组化染色检测成年大鼠心肌EPOR蛋白的表达及分布,以免疫组化染色观察EPO预处理对缺氧复氧前后心肌凋亡相关基因bcl-2、bax及炎症基因TNF-α蛋白表达水平的影响,以EMSA观察对心肌NF-κB活性的影响。 在第二部分中,培养新生大鼠心肌细胞,建立培养心肌细胞缺氧复氧模型。观察EPO预处理对培养心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用,同时观察在EPO预处理过程中加入NF-κB的阻断剂PDTC对其心肌保护作用的影响。 在第三部分中,以EMSA观察EPO预处理及预处理过程中同时加入PDTC对缺氧复氧前后心肌细胞NF-κB活性的影响,Western blot观察对I-κBα蛋白表达水平的影响,Western blot、RT-PCR观察对bcl-2及TNF-α表达的影响,探讨bcl-2、TNF-α表达变化与NF-κB活性、I-κBα蛋白表达水平变化的关系,研究EPO预处理心肌
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R654

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