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《第三军医大学》 2004年
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B7-H1反义RNA修饰的树突状细胞疫苗抗胃癌作用及其机理研究

吴淼  
【摘要】:研究背景和目的:胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,预后较差,如何改善预后、提高生存率是亟待解决的问题。免疫治疗是肿瘤治疗的一种新方法,T细胞的充分活化是肿瘤免疫治疗最重要的环节,DCs可活化静息T细胞诱导出特异性的抗肿瘤效应,在抗瘤免疫反应中发挥十分重要的作用,这在许多动物实验和临床研究中均已证实。但以前相关研究主要集中在如何使DCs更有效的接收和处理外来的活化T细胞的刺激性信号,近年来人们开始留意到一些本身存在于DCs表面,对DCs功能具有调节作用的免疫分子,并试图通过对这些分子的调节,提高DCs疫苗的功能。B7-H1就是近年来发现的存在于多数肿瘤细胞表面的对T细胞功能具有抑制作用的分子,高表达于成熟的DCs,B7-H1的表达是否会影响DCs对T细胞的活化以及DCs疫苗的生物学效应,这方面尚未见相关研究报道。为此,本课题采用反义核酸技术,构建携带反义B7-H1的重组腺病毒载体,体外转染DCs,抑制B7-H1蛋白表达,探讨B7-H1反义RNA修饰的DCs疫苗抗胃癌作用及其可能的机理,以期为DCs疫苗的临床应用提供新的方法和理论依据。 研究方法:第一部分:反义B7-H1重组腺病毒表达载体的构建。采用位置特异性重组方法构建携带人反义B7-H1的腺病毒载体(Ad.ASB7-H1)。通过293细胞扩增、纯化制取高滴度重组腺病毒。第二部分:反义B7-H1转染树突状细胞及其表达。采用常规方法从外周血单个核细胞诱导DCs成功后,以Ad.ASB7-H1转染培养DCs;用RT-PCR检测B7-H1反义RNA的表达,以蛋白质免疫印迹、免疫细胞化学、RT-PCR及流式细胞术等技术检测分析B7-H1反义RNA对B7-H1mRNA、蛋白表达及其细胞表型的影响。第三部分:B7-H1反义RNA修饰的DCs疫苗抗胃癌作用观察。采用~3H-TdR掺入法检测Ad.ASB7-H1转染DCs疫苗诱导的T淋巴细胞增殖能力,ELISA技术检测Ad.ASB7-H1转染DCs疫苗培养上清中IL-12的水平,采用~(51)Cr释放试验检测B7-H1反义RNA修饰的DCs疫苗抗胃癌效应,以流式细胞术分析B7-H1反义RNA修饰的DCs疫苗对胃癌细胞SGC7901细胞周期的影响。第四部分:B7-H1反义RNA修饰的树突状细胞疫苗抗胃癌作用机理探讨。以ELISA法检测B7-H1反义RNA修饰的DCs诱导T细胞分泌IL-10、IFN-γ变化。采用流式细胞术检测:B7-H1反义RNA
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R735.2

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【参考文献】
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