收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

腺病毒介导的凋亡素对胆管癌作用的研究

陈健  
【摘要】:胆管癌是常见的胆道恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年增加趋势。由于胆管特殊的解剖结构使胆管癌细胞容易沿胆管周围血管、淋巴管、神经周围间隙及疏松的结蹄组织生长和转移,呈现跳跃性,所以手术难以根治。加之胆管癌对放疗和化疗不敏感,而肝移植术后复发率又高,所以目前胆管癌的治疗效果难尽人意。 随着分子生物学的长足发展,肿瘤的基因治疗也取得了明显的进展。一些治疗方案已经完成了临床前期的实验,开始了临床的探索。但由于还存在诸如缺乏特效目的基因、基因转移的靶向性差、转导效率还比较低,以及转移基因的体内表达还缺乏有效的调控手段等问题,基因治疗还谈不上替代现行的常规手段。加之恶性肿瘤的发生是多基因协同作用、多因素参与和多阶段综合发展的结果,只靠矫正一到二种内源性基因的突变是很难取得满意疗效的,毒副作用也很难控制。所以人们把目光转向外来物质。最近报道的凋亡素就具有巨大的潜力,它是来源于鸡贫血病毒,是该病毒的功能蛋白,能引起鸡胸腺细胞和骨髓成红细胞的凋亡。人们将之通过基因手段导入人体细胞,发现它能引发肿瘤细胞和转化细胞的凋亡,而对正常的细胞无此作用,并且长期表达于正常细胞没有观察到细胞转化和死亡。所以我们选择凋亡素作为研究对象,通过分子生物学手段将其导入胆管癌细胞中,观察它的效用和可能的机制,并通过体外、体内实验了解它对胆管癌是否具有治疗作用,以期探索胆管癌新的治疗手段。 本实验我们通过PCR获得凋亡素基因,运用T4连接酶将它与PGEM-T Easy质粒连接,通过测序证实为全长凋亡素基因后与带荧光蛋白基因和CMV启动子的质粒连接。然后运用Adeasy-1系统构建含荧光蛋白基因和凋亡素基因的腺病毒DNA,通过在293细胞内大量扩增后,运用氯化铯纯化和浓缩后制成高浓度的腺病毒。再用腺病毒感染胆管癌细胞株,用TUNEL染色了解凋亡素基因是否导致胆管癌细胞株的凋亡,同时观察Bcl-2蛋白的表达情况。最后运用腺病毒治疗裸鼠种植性胆管癌,了解凋亡素是否具有治疗作用及相关副作用。 主要的结果及结论如下: 1、通过酶切和测序证实成功构建含凋亡素基因的PGEM-T Easy-VP3质粒和含荧光蛋白基因及凋亡素基因的Padtrack-CMV-VP3质粒。便于永久保存。然后运用同源


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张克君;李德春;;重组腺病毒mIκBα基因的构建及体外抑制血管生成的作用[J];苏州大学学报(医学版);2006年04期
2 苏春霞;段相国;张艳丽;摆茹;陈溥言;;口蹄疫病毒VP1基因重组腺病毒的构建与鉴定[J];宁夏医科大学学报;2009年05期
3 田长富,李殿俊,申宝忠,刘旭,李天天;hTNF-α重组腺病毒转染人肺腺癌细胞的体外生物学特性及体内抗肿瘤研究[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2002年02期
4 赵军,冯跃,孟荣贵,黄盛东;双自杀基因融合基因重组腺病毒的制备与鉴定[J];第二军医大学学报;2003年01期
5 潘欣,王泳,张珉,赵平,潘卫,戚中田;内皮抑素-血管内皮细胞抑制因子重组腺病毒对新生血管的抑制效应[J];生物技术通讯;2003年05期
6 陈珺,徐少勇,邓长生,王家宁,黄永章;细菌内同源重组高效制备人突变p27基因重组腺病毒[J];第四军医大学学报;2004年05期
7 王文宏,惠国桢,马文雄,包大士,陈桂林,李向东;重组腺病毒载体介导FasL治疗人脑胶质瘤实验研究[J];南京医科大学学报(自然科学版);2004年03期
8 祝联;陈付国;刘伟;崔磊;周广东;刘德莉;曹谊林;;骨髓基质干细胞转染腺病毒BMP7后的成骨改变[J];中华整形外科杂志;2006年01期
9 何芬;范海虹;谢瑶;牛道立;;GM-CSF基因重组腺病毒穿梭载体的构建及XbaⅠ甲基化位点的应用[J];解剖学研究;2006年03期
10 夏冬;徐亮;付华;綦晓龙;权毅;严律南;;重组腺病毒介导基质金属蛋白酶组织抑制因子-1对人肝癌HepG2细胞的影响与作用机制[J];中华肿瘤杂志;2007年11期
11 梁蔚芳;刘志华;骆抗先;;重组腺病毒介导的1.2拷贝HBV DNA在3种肝细胞中的表达[J];南方医科大学学报;2009年04期
12 汪思钧;亓文宝;徐成刚;罗开健;张桂红;叶贺佳;廖明;;表达H3N2亚型猪流感病毒血凝素蛋白的重组腺病毒在猪体内的免疫试验[J];微生物学报;2009年05期
13 李巧;王志刚;冉海涛;钟世根;任建丽;李兴升;凌智瑜;;重组腺病毒Ad-EGFP/HIF-1α转染大鼠内皮祖细胞[J];第四军医大学学报;2009年22期
14 廖丽姿;肖金刚;杨苗苗;孔子任;孙钦策;田卫东;;小鼠增强型绿色荧光蛋白-过氧化物酶体增长因子活化受体γ2融合表达重组腺病毒的构建及表达[J];华西口腔医学杂志;2010年04期
15 樊卫飞;王子盾;王平;刘平;卢春;;HIV-1型病毒蛋白R基因表达载体的构建及其在前列腺癌细胞系PC-3中的表达[J];江苏大学学报(医学版);2010年04期
16 徐雯;重组腺病毒诱导小鼠产生抗HCV结构蛋白抗体[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1997年01期
17 魏旭东!100044,伏爽!100044,武莎莎!100044,王申五!100044,王德炳!100044;含血小板生成素基因的重组腺病毒Ad/Tpo的构建及表达[J];中华血液学杂志;2000年06期
18 陈琳,苟兴华,严律南,韩蕾,李德华,赵永恒,胡海洋;携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒载体的构建[J];四川大学学报(医学版);2003年01期
19 姚家伟,周玲,王琦,左建民,曾毅;EB病毒潜伏膜蛋白2重组腺病毒的构建及其免疫效果的研究[J];中国肿瘤;2003年01期
20 黄蕤,匡安仁,余海放,马超,唐恭顺;携带人NIS基因的重组腺病毒的构建[J];生物医学工程学杂志;2005年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘小云;王华;王立生;;重组腺病毒介导的Spred-2过表达抑制K562细胞增殖[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
2 贾红宇;卢安卫;徐世国;蒋建文;;CTLA-4基因重组腺病毒的构建及其免疫活性的研究[A];2007年浙江省器官移植学术会议论文汇编[C];2007年
3 张守发;贾立军;;表达牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因重组腺病毒的构建及动物免疫[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
4 张雪;邬开朗;乐鑫;朱应;吴建国;;重组腺病毒表达siRNA抑制SARS病毒基因的研究[A];2006年度学术研讨会论文摘要汇编[C];2006年
5 张启瑜;廖毅;虞冠锋;孙运鹏;沈志坚;;小鼠CD40Ig基因重组腺病毒载体系统的构建和鉴定[A];2008年浙江省外科学术年会论文汇编[C];2008年
6 刘耘;赵明;;人钠碘同向转运体的腺病毒重组[A];第四届全国中青年核医学学术会议论文汇编[C];2008年
7 张雪;邬开朗;乐鑫;朱应;吴建国;;重组腺病毒表达siRNA抑制SARS病毒基因的研究[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
8 陈小武;陈志斌;王埮;;人14-3-3 γ基因的腺病毒载体的构建及其在PC12细胞中的表达[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
9 樊娇;李鑫;朱丽塞;王广美;丛彦龙;丁壮;;共表达H1N1与H3N2亚型猪流感病毒血凝素蛋白重组腺病毒的构建及免疫原性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
10 徐琳;高下;陈杰;朱光洁;麻晓峰;丁小琼;陆玲;;Ad-Hath1-DsRed2,Ad-DsRed2重组腺病毒的构建及小鼠耳蜗圆窗径路基因导入的实验研究[A];2010全国耳鼻咽喉头颈外科中青年学术会议论文汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈健;腺病毒介导的凋亡素对胆管癌作用的研究[D];第三军医大学;2004年
2 丁振宇;端粒酶催化亚单位重组腺病毒疫苗的抗肿瘤作用的实验研究[D];四川大学;2004年
3 刘志华;用腺病毒载体介导的基因转移研究HBV/C区热点变异对小鼠免疫应答的影响[D];第一军医大学;2002年
4 侯建梅;巨噬细胞炎症蛋白3β(Mip3β)重组腺病毒疫苗抗肿瘤实验研究[D];四川大学;2005年
5 彭方兴;锌指蛋白A20保护大鼠肝移植急性排斥模型中供肝内皮细胞的实验研究[D];四川大学;2005年
6 夏冬;重组腺病毒介导人TIMP-1基因抑制肝癌侵袭和转移的实验研究[D];四川大学;2006年
7 梁蔚芳;聚乙二醇化干扰素α-2a与干扰素α-2a在体内和体外的抗乙型肝炎病毒活性研究[D];第一军医大学;2007年
8 何向东;膀胱上皮特异性重组腺病毒的构建及其抑制作用[D];兰州大学;2008年
9 张国鹏;两种核素报告基因系统用于监测治疗基因VEGF165表达的基础研究[D];华中科技大学;2010年
10 冯志新;猪圆环病毒2型致病机理和重组腺病毒介导shRNA抑制PCV2在体内外复制的研究[D];南京农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 沈栋林;重组腺病毒心肌营养素-1转染对神经干细胞的作用[D];遵义医学院;2010年
2 孙健;含CDglyES的双功能融合基因的重组腺病毒对放疗增敏作用的实验研究[D];天津医科大学;2003年
3 郭丽;含有HIV-1 vpr基因的重组腺病毒的制备[D];安徽医科大学;2002年
4 刘静;腺病毒介导的人TLR2和TLR4基因联合抗炎作用研究[D];第三军医大学;2010年
5 蔡永君;叉头状转录因子Foxp3重组腺病毒的构建及鉴定[D];浙江大学;2006年
6 陈杰;重组腺病毒介导的IDO高表达DC对同种反应T细胞亚群分化的影响[D];华中科技大学;2009年
7 李玉峰;猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒GP5蛋白重组腺病毒的构建与鉴定[D];南京农业大学;2003年
8 陈建威;重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α治疗兔后肢缺血的安全性初步研究[D];南方医科大学;2010年
9 李菲;含CD和ES融合基因重组腺病毒的构建和体外抑瘤作用的研究[D];天津医科大学;2002年
10 陈降华;猪IL18、GM-CSF、IFNγ与PCV2ORF2重组腺病毒共表达及免疫增效研究[D];湖南农业大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴一福;重组腺病毒核糖核酸酶载体问世[N];中国医药报;2007年
2 吴一福;重组腺病毒核糖核酸酶载体问世[N];中国医药报;2005年
3 记者 应洪舒;我专家发现 Adp53基因对肿瘤治疗有热增效作用[N];中国医药报;2006年
4 李定纲 大红;打破门户之见多兵种作战[N];健康报;2006年
5 余运西 王雪飞;“自杀基因”让癌细胞转移“停步”[N];健康报;2005年
6 王玲 韩霁;科技创新成果惠及亿万人民[N];经济日报;2006年
7 记者 钟文;康弘生物医药产业基地开始建设前期准备[N];成都日报;2008年
8 肖绍文 张珊文;肿瘤基因治疗聚焦p53基因[N];中国医药报;2005年
9 青锋;HSV-2疫苗针对性强[N];医药经济报;2002年
10 习文;华神集团在“大转折”前夜[N];医药经济报;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978