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《第三军医大学》 2005年
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表皮干细胞向角膜上皮细胞转分化的实验研究

杨珂  
【摘要】: 表皮是皮肤重要的组成部分,由内向外分为基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。早期使用3H—TdR标记的方法观察表皮中标志物的分布,发现绝大多数标志保留细胞(label retaining cell,LRC)位于表皮的基底层,约占基底细胞的10%,有慢周期性,同时具有自我更新并不断增殖和分化的能力,在皮肤的再生修复过程中起着重要的作用,故命名此类细胞为表皮干细胞(ESCs)。目前,表皮干细胞的组织定位已得到广泛认同,体外培养技术也取得较大的发展,为其生物学性状的研究及在组织工程方面的应用奠定了基础。本实验中采用IV型胶原对细胞的差速黏附以及低钙无血清的培养体系,获得了纯度较高的具有干细胞性质的细胞,并在培养状态下观察了该类干细胞的生长特性及表达特性,通过检测细胞表面标志物的表达进一步证实了所得到的细胞是表皮干细胞。 角膜是眼球屈光的重要组成部分,容易遭受外界因素的侵袭而被损伤。角膜移植是目前治疗角膜盲的唯一有效方法。从角膜库的建立、人工角膜到组织工程化角膜的发展,为角膜缺损的修复开辟了崭新的治疗前景。尽管大量研究用角膜缘干细胞作为种子细胞,但细胞来源的有限性使其应用和推广受到限制。近年来很多实验证实了成体干细胞具有横向分化能力,表皮干细胞不仅能分化为表皮,在一定的条件下还能分化成不同胚层来源的细胞,分化的方向受该干细胞生长微环境的调控。角膜基质对角膜上皮的分化具有重要的作用,基质细胞分泌的多种因子EGF、NGF、IGF、TGF等形成的网络调控能促进细胞的特定分化。本实验中应用角膜基质为诱导环境,应用transwell培养体系,将角膜基质细胞与表皮干细胞进行共培养,经过诱导分化后,用角膜上皮特异的标志物K12对表皮干细胞进行检测。本实验结果证明表皮干细胞在体外诱导培养下具有向角膜上皮细胞横向分化的能力。主要研究结果如下: 1.表皮干细胞的组织定位与生物学性质 体外成功地培养出表皮干细胞,为下一步实验打下基础。KSFM培养基适宜表皮干细胞的生长,其无血清低钙的环境能较好的维持表皮干细胞处于低分化状态,并保持表皮干细胞较强的增殖能力;利用表皮干细胞对IV型胶原快速黏附的性质对细胞进行筛选,该干细胞在IV型胶原上生长良好。培养的细胞形态均一,呈铺路石状,细胞
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:Q813.1

【参考文献】
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【共引文献】
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