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《第三军医大学》 2006年
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人BAFF免疫抑制分子的构建及功能鉴定

高会广  
【摘要】:TNF家族的B细胞活化因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)是一种重要的肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员,它有膜结合型和可溶性两种形式,二者的生物学活性基本一致,不仅广泛参与调节B细胞发育、分化及抗体的产生,而且还广泛参与T细胞的活化和应答过程。BAFF缺乏可导致免疫功能低下;而BAFF过表达则密切参与了同时涉及B、T淋巴细胞功能亢进的系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿关节炎(RA)及干燥综合征(SS)等多种自身免疫性疾病的发生和发展,而且血清中BAFF的水平与这些疾病的严重程度相关;用抗-BAFF抗体或其可溶性受体抑制BAFF的功能可缓解相关疾病的症状。因此,BAFF被认为是治疗这些自身免疫性疾病的理想靶标。 近年研究发现,经异源性Th表位修饰的细胞因子突变体可构成一种新抗原,由这种新抗原所诱导出的抗体可与天然细胞因子发生交叉结合反应,从而抑制天然细胞因子的功能。为此,我们在克隆了人可溶性BAFF(胞外区134-285位氨基酸,sBAFF)cDNA的基础上,经反向PCR致突变法分别构建了缺失不同区域的sBAFF cDNA突变体(msBAFF),然后将人工合成的Th表位DNA序列分别与编码各msBAFF的DNA重组并克隆于原核表达载体,经原核表达和纯化制备由msBAFF和Th表位组成的重组突变体蛋白,进而检测了相应重组突变体蛋白活化淋巴细胞的情况,最后分别用重组蛋白免疫BALB/c小鼠和人化SCID小鼠,观察重组蛋白交叉诱导抗人sBAFF抗体的情况以及相应抗体抑制人野生型sBAFF活化淋巴细胞的功能。所取得的主要研究结果如下: 1.经RT-PCR成功地克隆了编码人可溶性BAFF的cDNA,经查对,与GenBank上登录的相应序列完全一致。以获得的pUC19-sBAFF为模板,经一步反向PCR致突变法成功构建了缺失不同区域的sBAFF cDNA突变体,并分别与编码鸡卵清溶菌酶(HEL)或卵清蛋白(OVA)Th表位的DNA序列重组,重组质粒命名为oUC19-HELmsBAFF1~5和pUC19-OVAmsBAFF1~5。 2.将测序正确的重组DNA分别连接于原核表达载体pQE80L,成功地构建了重组原核表达质粒pQE80L-HELmsBAFF1~5和pQE80L-OVAmsBAFF1-5。上述质粒分别
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R91

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