Pyk_2在心肌间质纤维化中的作用及机制研究
【摘要】：1．背景与目的：
心肌重塑的特征是正常心腔壁结构重排，它包括心肌肥大、心肌间质纤维化和细胞凋亡、坏死。其中，心肌间质纤维化是一种重要而常见的病理过程，它与风湿性心脏病、高血压病、心功能不全、心律失常和心源性猝死等密切相关。它可降低心室收缩和舒张的顺应性，损伤心肌细胞间的电偶联，减少毛细血管密度、增加心肌细胞的氧弥散距离，最终影响心室的功能。它在心脏功能从代偿到失代偿转变、心肌重塑从可逆到不可逆变化中发挥至关重要的作用。
心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts，CFs)对维持正常和病理状态心脏的细胞外基质的稳定发挥核心作用。损伤刺激因素激活CFs中的多条信号通路，从而产生相应的基因调节。活化的CFs产生细胞外基质蛋白和蛋白酶，以及自分泌和旁分泌因子，进而调节心脏重塑的进程。
由于心肌间质纤维化受钙离子等复杂网络样因素的调控，为了更好地了解心肌重塑的机制，我们需要更好地认识调控CFs活性的信号网络的作用。CFs做为心肌间质纤维化的最终效应细胞，极有可能成为心肌重塑和心力衰竭的新治疗靶标；近年来酪氨酸激酶抑制剂—格列卫在临床肿瘤治疗中的成功应用，提示我们如果能在CFs中找到一个合适的信号网络交汇点为靶点，可能对探索心肌间质纤维化防治措施具有重要意义和应用价值。
钙依赖性酪氨酸激酶(calcium-dependent proline-rich tyrosine kinase-2，Pyk_2)作为粘附斑激酶家族的新成员，在组织内广泛分布。Pyk_2的活化主要与钙离子浓度相关，Pyk_2是众多信号网络的重要交汇点，也是调控大量下游信号通路的“核心”或“开关”，包括离子通道的调节、细胞生长增殖分化迁移、细胞凋亡、炎症调控等。Pyk_2在心血管疾病中的调控作用正逐渐引起关注，有学者将其称为“一种新型的致心肌肥大的钙依赖性信号通路”。扩张性心肌病、高血压病的相关研究表明，Pyk_2参与了这些心肌重塑过程。基于这些依据，我们推测：Pyk_2可能参与了风心病心肌纤维增生应答的调控并在其中发挥重要作用。
但目前有许多问题尚不清楚：(1)风湿性心脏病(风心病)患者心肌间质中Pyk_2的表
【关键词】：钙依赖性酪氨酸激酶 心肌间质纤维化 信号转导 RNA干扰 【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R541
【目录】：
- 英文缩写一览表5-7
- 英文摘要7-11
- 中文摘要11-15
- 论文正文 Pyk_2在心肌间质纤维化中的作用及机制研究15-92
- 前言15-17
- 第一部分 风心病心肌间质纤维化与Pyk_2表达关系的研究17-31
- 实验一 风心病心肌间质纤维化的形态学和血清学检测17-22
- 材料与方法17-20
- 结果20-22
- 实验二 风心病心肌间质中Pyk_2表达与心肌纤维化的相关性分析22-27
- 材料与方法23-25
- 结果25-27
- 讨论27-31
- 第二部分 大鼠心肌成纤维细胞的分离培养和Pyk_2小分子RNA干扰载体的构建31-57
- 实验一 成年大鼠心肌成纤维细胞的原代分离培养和鉴定31-35
- 材料与方法31-34
- 结果34-35
- 实验二 靶向Pyk_2小分子RNA干扰载体的设计与构建35-43
- 材料与方法35-42
- 结果42-43
- 实验三 重组RNA干扰载体沉默大鼠心肌成纤维细胞Pyk_2基因的研究43-54
- 材料与方法44-51
- 结果51-54
- 讨论54-57
- 第三部分 Pyk_2 shRNA对培养大鼠心肌成纤维细胞生物学行为的影响57-82
- 实验一 Pyk_2 shRNA对大鼠心肌成纤维细胞增殖和迁移的影响57-62
- 材料与方法57-59
- 结果59-62
- 实验二 Pyk_2 shRNA对培养大鼠心肌成纤维细胞凋亡的影响62-67
- 材料与方法62-64
- 结果64-67
- 实验三 pyk_2／PI3K／NFκb信号通路对心肌间质纤维化的调控机理初探67-70
- 材料与方法67-69
- 结果69-70
- 实验四 钙通道阻滞剂干预对大鼠心肌成纤维细胞Pyk2表达的影响70-75
- 材料与方法71-73
- 结果73-75
- 讨论75-82
- 全文结论82-83
- 致谢83-85
- 参考文献85-92
- 文献综述一 粘着斑激酶家族新成员Pyk_2的研究进展92-100
- 参考文献98-100
- 文献综述二 心肌纤维化的临床评估和药物治疗进展100-110
- 参考文献106-110
- 研究生在读期间发表的论文110
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