收藏本站
《第三军医大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人AB型血清培养体系体外培养扩增人脐血源基质细胞的实验研究

龚奕  
【摘要】: 造血微环境(Hematopoietic inductive microenvironment,HIM)是造血干细胞产生、增殖和分化发育的场所,基质细胞是造血微环境的重要组成成分,不仅与造血干细胞的自我更新、增殖、分化和归巢现象关系密切,而且对血液系统疾病的发生、进展和预后产生重要影响。人脐血源基质细胞(human stromal cells derived from umbilical cord blood, hUCBDSCs)可促进骨髓造血微环境损伤的修复,具有取材方便、细胞增殖活性高和免疫原性弱等优点。已有研究表明,从人脐血标本中分离的基质细胞通过直接接触促进造血干细胞自我更新、增殖和分化的作用.基质细胞可以分泌多种促进造血的细胞因子如TPO、GM-CSF和SCF等,可增强造血干细胞的骨髓迁移和发育,并可以分泌细胞外基质成分(extracellular matrix ,ECM)参与造血微环境的组成。然而,脐带血来源的基质细胞存在数量有限,且其体外扩增培养必须严格依赖于特定的胎牛血清等缺点,这阻碍了人脐血源基质细胞的临床应用。理想的体外培养体系应避免使用动物血清成分带来临床应用上的风险。本研究尝试以人AB型血清培养体系体外培养人脐血基质细胞,获得了较好的效果,建立了一种稳定的体外培养扩增人脐血基质细胞方法,为人脐血基质细胞的临床应用奠定基础。主要的实验结果如下: 1.人脐血基质细胞生长状态的动态观察:在培养48~96 h后,可见少数细胞已贴壁。贴壁细胞呈不规则形并可见胞浆突起形成,大约1周后贴壁细胞开始出现明显的分裂增殖,并可见CFU-F集落形成,继续培养至CFU-F集落融合形成单层细胞。经HE染色观察,人脐血基质细胞呈梭形、圆形或不规则形,核为圆形或椭圆形,CFU-F集落内细胞排列呈放射状和涡流状。集落间细胞相互连接、交错成片。 2.15%人AB型血清和bFGF细胞因子浓度对人脐血基质细胞CFU-F的影响:15%人AB型血清能有效支持脐血基质细胞在体外的扩增培养。在0~10μg/L范围内bFGF的浓度越高,形成的集落数也越多,但当其浓度大于10μg/L时,对人脐血基质细胞形成集落数的刺激作用无明显增加。 3.脐血基质细胞表面标志的检测:应用免疫组化染色,检测了Vimentin、CD34、TdT、CD45和CK等在脐血基质细胞中的表达。生长状态良好的第1-2次传代细胞用于进行免疫组化检测,结果表明人脐血基质细胞的表型为Vimentin(+)、CD34(+)、TdT(-)、CD45(-)和CK(-)。 主要结论:成功建立一种人AB型血清培养体系体外培养扩增人脐血源基质细胞的方法,为下一步的治疗性研究,如体内促进放、化疗后骨髓造血功能损伤的修复和临床脐血基质细胞治疗技术的开展,提供了前期的条件准备。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R329

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 冯乐平;梁瑜祯;乔伟;;脐带血来源基质细胞培养及造血微环境的建立[J];吉林大学学报(医学版);2008年03期
2 张曦,王苹,陈幸华,刘林,彭贤贵,孔佩艳,刘红;TNF-α对人脐血基质细胞体外扩增作用的观察[J];重庆医学;2003年10期
3 陈幸华;;造血功能障碍的修复与重建[J];重庆医学;2007年17期
4 张曦;陈幸华;司英健;刘耀;高蕾;高力;张诚;彭贤贵;王庆余;;人脐血源基质细胞移植促进裸鼠造血损伤修复的实验研究[J];重庆医学;2007年17期
5 罗成基,陈幸华,邹仲敏,郭朝华,周燕虹;造血基质细胞在造血重建中的作用[J];基础医学与临床;2000年06期
6 罗成基;造血微环境基质细胞的研究概况及前景[J];解放军医学杂志;1999年01期
7 高蕾,陈幸华,张曦,彭贤贵,刘耀,孔佩艳,刘林,刘红,张怡;人脐血基质细胞对脐血CD34~+细胞体外扩增的作用[J];医学研究生学报;2005年06期
8 赵杰,李红燕,郝红樱,姚程,易永林;人骨髓基质细胞体外扩增方法的研究[J];武警医学;1999年03期
9 蔡琼霞;熊华锋;胡葵葵;张继平;李洁;李蜀光;贺文风;;脐血间充质干细胞分离培养的理论研究与应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年28期
10 张曦,王苹,陈幸华,刘林,彭贤贵,孔佩艳,刘红,张怡,王庆余;人脐血贴壁细胞生物学特点的观察[J];中国实验血液学杂志;2005年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄友章,杨平地,沈建良,兰雨,向丹,岑坚,马骢,郭启煜,唐亚辉,刘晓鹏;来源于骨髓和脐带血的基质细胞基本特性的比较[J];北京医学;2002年06期
2 何代英,戴国华,李军,夏堪翼,汪涛;骨髓基质细胞输注对化疗小鼠造血功能恢复的实验研究[J];重庆医学;2005年05期
3 张曦;陈幸华;司英健;刘耀;高蕾;高力;张诚;彭贤贵;王庆余;;人脐血源基质细胞移植促进裸鼠造血损伤修复的实验研究[J];重庆医学;2007年17期
4 张诚;陈幸华;张曦;高蕾;高力;梁雪;孔佩艳;彭贤贵;王庆余;;人脐血源基质细胞对小鼠淋巴细胞增殖作用的研究[J];重庆医学;2008年21期
5 张纯清;关华;张莽;;成人骨松质金属微量元素的检测与比较分析[J];重庆医学;2010年01期
6 曾韫璟;张曦;陈幸华;高力;高蕾;张诚;王庆余;;父供女单倍型相合造血干细胞联合子供母单倍型相合脐血移植治疗妊娠急性白血病1例并文献复习[J];重庆医学;2010年14期
7 杜楠,裴雪涛,罗成基,李梁,邹仲敏,冯凯,白慈贤,孙兵;Egr-1启动子序列调控造血生长因子表达的实验研究[J];第三军医大学学报;2000年04期
8 杨 军,丁振华,何佩,郑莉,罗成基;电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究[J];第一军医大学学报;2002年05期
9 龚奕;陈幸华;张曦;彭贤贵;邹仲敏;;人AB型血清培养体系体外培养扩增人脐血源基质细胞的试验研究[J];国际检验医学杂志;2009年04期
10 史春梦;胚胎造血细胞发育及其调控的研究进展[J];国外医学.输血及血液学分册;2000年01期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 施海涛;补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血患者信号转导MAPK通路及相关细胞因子的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 赵菊花;圣愈汤传统煎剂和配方颗粒对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究[D];成都中医药大学;2011年
3 刘娜;补肾生血法对慢性再生障碍性贫血骨髓造血粘附FAK/PI3K通路及Rho GTP酶的影响[D];黑龙江中医药大学;2011年
4 胡永珍;活髓片治疗再障的临床和实验研究[D];广州中医药大学;2002年
5 张曦;VCAM-1基因修饰人脐血源基质细胞移植重建造血微环境功能[D];第三军医大学;2006年
6 赵秀娟;骨髓间充质干细胞治疗再生障碍性贫血的机制研究[D];山西医科大学;2007年
7 范秀波;脐带血干细胞体外培养条件优化与共培养研究[D];大连理工大学;2008年
8 高蕾;人脐血源基质细胞促进巨核细胞增殖作用及机制探讨[D];第三军医大学;2008年
9 梁雪;人脐血源基质细胞新型微环境对残留白血病细胞的作用及机制探讨[D];第三军医大学;2009年
10 孙浩平;人脐血源间充质干细胞与其基质细胞对体外造血调控作用的比较研究[D];第三军医大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 付颖;补髓生血颗粒治疗慢性再生障碍性贫血及对信号转导相关酶Btk的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 周志刚;人脐带间充质干细胞定向诱导分化成类神经元的实验研究[D];暨南大学;2011年
3 王小东;补髓生血颗粒对慢性再生障碍性贫血的临床及Akt-Thr308磷酸化水平的研究[D];黑龙江中医药大学;2011年
4 肖扬;骨髓间充质干细胞调节树突状细胞治疗再生障碍性贫血的免疫机制研究[D];广州医学院;2010年
5 吴泽霖;急性白血病儿童骨髓间充质干细胞与脐血来源NK细胞的相互作用体内外初步实验研究[D];广州医学院;2010年
6 冯德朋;脐血间充质干细胞移植治疗帕金森大鼠的实验研究[D];泰山医学院;2011年
7 李涛涛;重组EGFP慢病毒载体示踪转染的脐带间充质干细胞联合β-磷酸三钙移植治疗免股骨头缺损性坏死的研究[D];青岛大学;2011年
8 何代英;骨髓基质细胞移植加快化疗小鼠造血与免疫功能恢复的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
9 邓均;K562细胞对BMSCs生长特性及造血负调因子分泌影响的实验研究[D];第三军医大学;2003年
10 张曦;人脐血基质细胞生物学特点及其体外扩增的研究[D];第三军医大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张鸿来,刘及;人骨髓成纤维细胞集落形成培养方法的研究[J];白求恩医科大学学报;1988年03期
2 张曦,陈幸华,刘林,彭贤贵,孔佩艳,刘红,张怡,高蕾,钟永明,王庆余;细胞因子及其组合对脐血基质细胞集落形成作用的比较[J];重庆医学;2003年05期
3 张曦,陈幸华,刘林,彭贤贵,孔佩艳,刘红,张怡,高蕾,钟永明,王庆余;人脐血CD34~+细胞体外DEXTER基质细胞培养的动态观察[J];第三军医大学学报;2003年14期
4 陈幸华;骨髓基质细胞在造血调控中的作用[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2000年01期
5 姜志钢,陈素兰,郝静;碱性成纤维细胞生长因子的生物活性分析[J];基础医学与临床;1993年03期
6 陈幸华,罗成基;骨髓基质细胞异常对造血功能的影响[J];解放军医学杂志;1998年05期
7 陈幸华,罗成基;骨髓基质细胞在造血调控中的作用[J];解放军医学杂志;1999年03期
8 张曦,陈幸华,刘林,彭贤贵,孔佩艳,刘红,张怡,高蕾,钟永明,王庆余;外周血干细胞移植患者骨髓基质细胞粘附功能的变化[J];医学研究生学报;2003年08期
9 冯继锋,朱梁军,胡洁;血管内皮抑素基因转染人脐带血CD34~+造血干细胞的实验研究[J];医学研究生学报;2005年02期
10 罗凯,单根法,钟竑,金誉,张辅贤;脐血间充质干细胞肌源性诱导分化的研究[J];上海第二医科大学学报;2005年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 高蕾;陈幸华;张曦;高力;刘耀;张诚;彭贤贵;司英健;王存邦;;血管细胞粘附分子-1修饰的人脐血基质细胞对造血干细胞或祖细胞扩增作用的实验研究[J];中国实用内科杂志;2007年S1期
2 刘耀,陈幸华,张曦,彭贤贵,孔佩艳,刘林;人脐血基质细胞深低温保存的实验研究[J];重庆医学;2003年10期
3 高蕾;张曦;陈幸华;彭贤贵;刘耀;高力;张诚;司英健;王存邦;;血管细胞粘附分子-1真核表达载体的构建及其在人脐血基质细胞中的表达[J];中国实用内科杂志;2007年S1期
4 张曦;司英健;陈幸华;刘耀;高力;高蕾;彭贤贵;王庆余;;Ad-VCAM-1-GFP重组腺病毒转染人脐血源基质细胞的实验研究[J];中国实用内科杂志;2007年S1期
5 刘耀,张曦,陈幸华,彭贤贵,刘林,孔佩艳,刘红,高蕾,李忠俊;骨髓基质细胞与人脐血基质细胞表达造血生长因子的实验研究[J];重庆医学;2005年09期
6 张曦,王苹,陈幸华,刘林,彭贤贵,孔佩艳,刘红,王庆余;人脐血基质细胞分离培养的实验研究[J];重庆医学;2003年10期
7 高蕾,陈幸华,张曦,彭贤贵,孔佩艳,刘林,刘红,张怡,刘耀;VCAM-1基因的克隆及VCAM-1-pcDNA3.1(+)真核表达载体的构建[J];重庆医学;2005年09期
8 张曦,王苹,陈幸华,刘林,彭贤贵,孔佩艳,刘红;TNF-α对人脐血基质细胞体外扩增作用的观察[J];重庆医学;2003年10期
9 高力;张曦;高蕾;陈幸华;;不同来源基质细胞对骨髓瘤KM3细胞增殖和凋亡的影响[J];第三军医大学学报;2009年10期
10 高蕾;陈幸华;张曦;孔佩艳;彭贤贵;刘林;刘红;刘耀;;VCAM-1修饰人脐血基质细胞对造血干/祖细胞扩增作用的实验研究[J];中国病理生理杂志;2007年10期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 高蕾;VCAM-1修饰人脐血基质细胞对造血干/祖细胞扩增的实验研究[D];第三军医大学;2005年
2 王小博;人类脐带血MSC和骨髓MSC分泌细胞因子的对比研究[D];广州医学院;2011年
中国知网广告投放
相关机构
>第三军医大学
>广州医学院
相关作者
>王小博 >高蕾
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026