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《第三军医大学》 2009年
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下调胶质瘤干细胞CXCR4表达对胶质瘤侵袭和血管生成能力的影响

赵林涛  
【摘要】: 随着干细胞研究领域的飞速发展和实验技术的进步,“肿瘤干细胞”理论再次引起人们的关注,并为越来越多的学者所接受。该理论认为:肿瘤是一个异质性的群体,只有肿瘤干细胞亚群具备自我更新、多向分化以及成瘤能力,而非肿瘤干细胞(包括祖细胞、分化的肿瘤细胞)则缺乏这些能力。研究者先后在白血病、乳腺癌、脑肿瘤、结肠癌、肝癌、前列腺癌等至少20类肿瘤中证实了肿瘤干细胞的存在,并对其多种重要的生物学特性进行了细致的观察,包括治疗抵抗性、促血管生成能力、侵袭特性、免疫源性等。随着研究的深入,越来越多的研究者相信,这群数量稀少、性质特殊的细胞,才是恶性肿瘤发生、进展以及治疗后复发的根源,而探索针对肿瘤干细胞亚群的靶向治疗措施,是今后恶性肿瘤治疗的重要方向之一。 趋化因子受体CXCR4属于7次跨膜的G蛋白偶联受体家族,可被其特异性配体SDF-1激活。CXCR4在多种肿瘤中都具有很强的促侵袭和促血管生成能力。在胶质瘤中,CXCR4的表达与肿瘤的级别呈正相关,其活化后可促进胶质瘤细胞侵袭,并且活化后还可以通过上调胶质瘤细胞VEGF的分泌量来促进肿瘤的血管生成。近期的研究表明,从原代胶质瘤标本中获取的胶质瘤干细胞高表达CXCR4。然而CXCR4在胶质瘤干细胞中的作用尚需进一步研究。 在本研究中,首先,采用间接免疫荧光标记验证U87细胞及其颅内移植瘤标本中胶质瘤干细胞标记物CD133是否和CXCR4共表达。然后,我们采用si-RNA(小干扰RNA)下调U87细胞中CXCR4的表达,并且分别从稳定转染CXCR4小干扰RNA质粒的U87细胞和稳定转染阴性对照质粒的U87细胞中培养出胶质瘤干细胞球,并对其进行鉴定,同时观察两者CXCR4的表达情况。在此基础上我们进一步通过Transwell小室比较两者的侵袭能力;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测两者细胞培养上清内VEGF的含量。我们还采用上述胶质瘤干细胞的裸鼠颅内移植瘤,在体内观察其VEGF的分泌的情况和肿瘤的微血管密度的差别。主要的结果和结论如下: 1. U87细胞中胶质瘤干细胞的CXCR4表达情况 用免疫荧光标记U87细胞及其瘤颅内移植瘤标本,激光共聚焦扫描显微镜观察CXCR4和CD133的表达情况。结果显示,U87细胞及其建立的颅内移植瘤中均可以检测到CD133和CXCR4双阳性的胶质瘤干细胞 2.获取稳定转染CXCR4干扰质粒的U87细胞 获取稳定转染的细胞后,我们对干扰效果进行检测了检测。Western blot结果显示,干扰组1细胞的CXCR4表达水平下降较明显;干扰组2略有下降;而干扰组3则几乎没有效果。我们选用干扰组1进行后续试验,并用RT-PCR对其干扰效果从RNA水平进行了进一步的检验,结果表明干扰组CXCR4水平显著下降。 3.胶质瘤干细胞球的筛选和鉴定 (1)用逐渐添加神经干细胞条件培养基的方法,成功地分别从干扰组与对照组U87细胞中培养出胶质瘤干细胞球。在干细胞培养基中,分化的肿瘤细胞贴壁并且生长受到抑制,而GSCs能够在培养基中呈克隆球样悬浮生长。 (2)两组胶质瘤干细胞球均表达胶质瘤干细胞的标记物CD133和nestin,并且从干扰组U87细胞中获得的胶质瘤干细胞球,其CXCR4的表达较对照组明显降低。 4.下调CXCR4表达对胶质瘤干细胞趋化和侵袭能力的影响 (1)下调胶质瘤干细胞CXCR4表达后,体外趋化结果显示,干扰组的胶质瘤干细胞转移至微孔膜下表面的细胞数明显少于对照组。在每个高倍镜视野下,干扰组仅有60±7.3个细胞穿过微孔转移至膜的下方,对照组却有166±11.2个细胞转移至膜的下方(P0.05)。 (2)体外侵袭试验结果显示,干扰组的胶质瘤干细胞转移至微孔膜下表面的细胞数也少于对照组。干扰组为:17±5.8个/HPF,对照组为:71±8.7个/HPF(P 0.05)。 5.下调CXCR4表达抑制胶质瘤干细胞分泌VEGF (1)分别在24 h、48 h时用ELISA检测各组胶质瘤干细胞培养上清中VEGF的含量。结果显示,下调胶质瘤干细胞CXCR4表达后,其VEGF的分泌量也随之降低。在24 h时干扰组和对照组VEGF的分泌量分别为690±24 pg/ml和850±25 pg/ml(P 0.05),在48 h时干扰组和对照组VEGF的分泌量分别为1504±53 pg/ml和2001±150 pg/ml(P 0.05)。 (2)我们在进一步在体内对其进行验证。结果显示:干扰组胶质瘤干细胞建立的颅内移植瘤的微血管密度和VEGF的分泌量均小于对照组。 综上所述,U87细胞中的胶质瘤干细胞上表达CXCR4,从干扰的U87细胞中可以培养出胶质瘤干细胞,它们也表达胶质瘤干细胞的标记物,而且从干扰组中培养出的胶质瘤干细胞的CXCR4表达水平要低于对照组;此外,干扰组的胶质瘤干细胞的趋化和侵袭能力下降,同时其分泌VEGF的能力也低于对照组,并且干扰组胶质瘤干细胞建立的裸鼠颅内移植瘤模型中微血管密度和VEGF的分泌量也低于对照组。结果提示下调胶质瘤干细胞的CXCR4表达可以抑制胶质瘤干细胞的趋化和侵袭,并且可以下调其促血管生成能力。提示:CXCR4可能是胶质瘤干细胞的一个重要治疗靶点
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R739.4

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1 谢蕊繁;万锋;雷霆;;CD133作为胶质瘤干细胞标志物应用的局限性[J];中国神经肿瘤杂志;2010年02期
2 安江洪;钱莘;敖绪军;赵栋国;孙建国;陈正堂;;CD133在人NSCLC组织和细胞系中表达的初步研究[J];重庆医学;2008年09期
3 王卫生;唐伟;;Oct-4与泌尿系肿瘤的关系研究进展[J];重庆医学;2008年10期
4 陈寅;钟竑;;CD133作为肺癌干细胞标记物的应用及其局限性[J];中国肺癌杂志;2011年10期
5 吴恭瑾;卢建忠;杨宁强;杨发英;岳中瑾;;免疫磁珠法分离纯化人肾癌CD133~+细胞实验研究[J];甘肃医药;2012年08期
6 王凯;陈绪珠;戴建平;;大鼠脑胶质瘤模型的研究进展[J];磁共振成像;2014年01期
7 黄望香;黄竞;罗玲;李蕊;叶春桃;;多参数流式细胞术分析骨髓增生异常综合征患者原始细胞的免疫表型特点[J];武汉大学学报(医学版);2011年04期
8 田军龙;蔡佩玲;夏孝强;李芳华;王德华;陈米娜;;CD133多克隆抗体制备及肿瘤干细胞鉴定[J];四川大学学报(医学版);2011年03期
9 苏星;施炜;倪兰春;陈建;;Western blot法检测人脑胶质瘤中组织型纤溶酶原激活剂及其抑制剂-1的表达[J];交通医学;2011年01期
10 苏星;施炜;黄剑飞;倪兰春;陈建;;PAI-1在人脑胶质瘤中的表达及意义分析[J];昆明医学院学报;2011年02期
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1 颜政;方驰华;高鹏;;人原发肝细胞癌干细胞表面标志的初步研究[J];南方医科大学学报;2006年09期
2 关小芳;文忠;申聪香;牟少凤;张宏征;谢民强;郭梦和;;人鼻咽癌细胞株中类肿瘤干细胞的分离、培养及鉴定[J];解放军医学杂志;2008年12期
3 邵世宏,姚运红;干细胞、肿瘤干细胞与肿瘤的关系[J];现代肿瘤医学;2005年03期
4 胡以平;;关于肿瘤干细胞问题的一些思考[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2008年03期
5 董强刚;姚明;耿沁;周瑾;闫明霞;;人肺腺癌干细胞的分离及鉴定[J];肿瘤;2008年01期
6 周志华;王卫兵;张建东;;全克隆与肿瘤干细胞[J];国际病理科学与临床杂志;2011年05期
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1 林勇,张燕,韩宗超,薛德麟;人跨模型和跨膜稳定型肿瘤坏死因子-α的基因表达产物对体外培养的脑胶质瘤细胞的影响[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2000年04期
2 高宜录,刘梅,刘道坤,顾晓松,杜子威;p16基因和地塞米松对人胶质瘤细胞的影响[J];中华实验外科杂志;2001年06期
3 李永宁,幸兵,任祖渊,苏长保,王任直,马文斌;脂质体介导B7基因在C6胶质瘤细胞中表达的实验研究[J];中国实验动物学杂志;2001年01期
4 黄强;;胶质瘤研究中的若干问题[J];中国神经肿瘤杂志;2003年01期
5 涂兰波;梁军潮;王伟民;;伽玛刀治疗脑胶质瘤进展[J];立体定向和功能性神经外科杂志;2005年06期
6 吴宗平;何理盛;林志雄;;血管内皮细胞生长因子对胶质瘤中水孔蛋白4表达的影响[J];中华实验外科杂志;2005年12期
7 方兴根;徐善水;潘绵顺;王鹏;田宇;;大鼠C6脑胶质瘤瘤体和瘤周水肿增长的磁共振观察[J];皖南医学院学报;2006年01期
8 林志雄;黄强;杨丽娟;林建华;;胶质瘤细胞对血管内皮细胞迁移的影响[J];中华实验外科杂志;2006年04期
9 田复明;窦长武;王晓娟;高乃康;武文元;姜丽丽;蒋宁;尉双玲;;脑胶质瘤/树突状细胞融合瘤苗的制备与鉴定[J];内蒙古医学杂志;2007年10期
10 刘晓智;浦佩玉;康春生;李春晖;黄强;王广秀;;骨髓间充质干细胞对胶质瘤趋向性的研究[J];中华实验外科杂志;2007年09期
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1 潘冬生;;多基因修饰胶质瘤细胞疫苗的抗肿瘤免疫反应[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
2 徐庆生;张小兵;周永庆;;胶质瘤干细胞及其放疗敏感性[A];2011年浙江省神经外科学学术年会论文汇编[C];2011年
3 张泽舜;仇志坤;崔磊;陈芙蓉;韩富;陈忠平;;双氢青蒿素诱导胶质瘤细胞自噬并提高替莫唑胺抗胶质瘤活性[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
4 张涛;王占祥;陈玉英;;MicroRNA与胶质瘤研究进展[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
5 宋杨英;刘英姿;单保恩;;IL-18基因转染对大鼠9L胶质瘤细胞生长特性的影响[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
6 刘喆;胡燕;;胶质瘤细胞特异aptamer的体外筛选及初步鉴定[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年
7 王莹;综述;雷霆;牛洪泉;万峰;审校;;脑胶质瘤干细胞与DC介导的抗胶质瘤免疫治疗[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
8 王颖毅;张军霞;孙关;王协锋;孙利华;浦佩玉;康春生;刘宁;傅震;尤永平;;STAT3介导反义miR-21调控hTERT的表达调节胶质瘤细胞生长[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
9 余敦星;陈盛强;岑宇翔;梁建峰;曾白云;;丹参酮IIA对U251胶质瘤细胞的增殖抑制作用[A];中国(第七届)肿瘤微创治疗学术大会暨世界影像导引下肿瘤微创治疗学会成立筹备大会论文汇编[C];2011年
10 周立霞;杨天祝;;伽玛刀治疗对胶质瘤细胞超微结构影响的实验研究[A];中国(第七届)肿瘤微创治疗学术大会暨世界影像导引下肿瘤微创治疗学会成立筹备大会论文汇编[C];2011年
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1 记者 匡远深;让胶质瘤干细胞不再“繁殖”[N];健康报;2011年
2 衣晓峰 冯宇曦;中药三氧化二砷有望成为治疗胶质瘤新药[N];中国医药报;2011年
3 杨霞;新方法治疗脑胶质瘤[N];保健时报;2003年
4 杨霞;光敏分子激光靶向治疗脑胶质瘤[N];中国医药报;2003年
5 记者 衣晓峰 通讯员 冯宇曦;砒霜对脑胶质瘤有良好疗效[N];健康报;2011年
6 记者 衣晓峰 靳万庆 通讯员 冯宇曦;中药砷剂有望成治脑胶质瘤新药[N];中国中医药报;2011年
7 实习生 吴菲 通讯员 张献怀;李安民:突破“脑禁区”[N];科技日报;2009年
8 ;C6细胞热休克蛋白抗原肽复合物的提纯及其抑瘤作用的研究[N];中国医药报;2003年
9 齐继成 译;新药物:来自动物毒液[N];中国医药报;2002年
10 刘海英;安定类药物可有效杀死癌细胞[N];科技日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 栾世海;MiRNA-126和miRNA-34a在胶质瘤细胞中功能的实验研究[D];复旦大学;2010年
2 李丹;胶质瘤不同病理级别差异miRNA/mRNA动态表达谱构建及其对接研究[D];中南大学;2010年
3 张所军;神经干细胞向胶质瘤干细胞迁移及对其生长特性的影响[D];华中科技大学;2011年
4 苏静;抑制细胞内氯通道对胶质瘤肿瘤生物学特性影响的研究[D];吉林大学;2010年
5 陶帮宝;Stathmin在胶质细胞瘤表达及其化疗药物敏感性研究[D];第二军医大学;2011年
6 于天浩;蛋白酶体抑制剂MG-132治疗胶质瘤的实验研究[D];吉林大学;2008年
7 李巧玉;神经生长因子在人脑胶质瘤中的表达特点及其临床意义[D];江苏大学;2011年
8 王春辉;格尔德霉素治疗脑胶质瘤及其与肝细胞生长因子相关性研究[D];吉林大学;2009年
9 王海峰;抑制蛋白酶体功能对脑胶质瘤作用的实验研究[D];吉林大学;2010年
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1 孟葳;3.0TMRI弥散张量成像在脑肿瘤诊断及胶质瘤分级诊断的价值研究[D];广西医科大学;2010年
2 陈宝敏;胶质瘤干细胞生物学特性比较及放射耐受机制的初步研究[D];苏州大学;2010年
3 杨生军;~(11)C-蛋氨酸PET/CT及整合素β1表达与胶质瘤生物学行为的相关性研究[D];昆明医学院;2011年
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5 张栋梁;LY294002靶向抑制PI3K/AKT信号转导通路干预胶质瘤细胞生长的研究[D];河北大学;2011年
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7 高吉国;候选肿瘤抑制基因ECRG4抑制胶质瘤增殖及侵袭的研究[D];吉林大学;2011年
8 薛进展;Rho/ROCK通路对人U87胶质瘤细胞侵润转移能力调节作用的体外实验研究[D];河南科技大学;2011年
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