收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

NO生成合剂对糖尿病小鼠创面愈合的促进作用

任校峰  
【摘要】: 目的 糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)是多病因引起的慢性代谢性疾病。皮肤病变如溃疡、坏疽、局部感染等是糖尿病患者极为常见的临床表现之一。创伤难愈并发症的出现与糖尿病患者皮肤组织的创伤愈合能力低下有直接关系。如何更快的促进创面修复,局部用药是一种重要的辅助治疗,而目前方法很多,但疗效往往不令人满意。本实验主要是利用NO在创面愈合中的重要作用,同时改变创面的微环境,为创面的愈合提供一种新的局部用药治疗方法:由促一氧化氮生成的L-精氨酸、硝普钠和超氧阴离子生成抑制剂夹竹桃麻素形成合剂,对糖尿病小鼠创面的进行联合应用,明确其方法在创面愈合中的作用。通过建立STZ诱导的I型糖尿病小鼠模型和创伤难愈模型,给予促NO合剂进行干预创面愈合过程,观察外源性药物在创伤愈合过程中对伤口愈合时间、肉芽组织生长及表皮细胞增殖的影响;应用免疫组化方法,揭示创面愈合时TGF-β1因子的表达规律和血管生成情况;通过光镜观察创面不同时间点的成纤维细胞数量及胶原纤维含量;研究NO合剂对创面愈合的影响,并探讨其机制,为临床上在治疗糖尿病难愈创面时提供理论依据。 方法 1.模型建立 1.1建立STZ诱导的I型糖尿病小鼠模型 小鼠标记称重后,连续4d腹腔注射STZ (50mg/ kg),小鼠禁食不禁水10h ,由尾静脉取血,连续8周跟踪检测小鼠的血糖浓度及体重变化。 1.2建立STZ糖尿病小鼠创伤难愈模型 空腹血糖浓度高于11.1 mmol/L,且连续出现多饮、多食、多尿者选为糖尿病模型小鼠。将小鼠以10%水合氯醛(30mg/kg)腹腔注射麻醉后,在背部中线两侧(间距1cm以上),以直径1cm打孔器打孔、止血,单笼喂养。跟踪检测其创口愈合速度直至完全愈合。 2.NO合剂对小鼠创面愈合作用的观察 实验分组:共设5个实验组,即糖尿病小鼠对照组、糖尿病小鼠L-精氨酸(L-Arg)治疗组(A组)、糖尿病小鼠夹竹桃麻素(APO)治疗组、糖尿病小鼠硝普钠(SNP)治疗组、糖尿病小鼠NO合剂治疗组,每组10只小鼠。给药方法:小鼠背部创面建立成功后,按照不同组别,分别以生理盐水、L-arg溶液(150g/L,去离子水配制)、APO溶液(1×10-4 mol/L,去离子水配制)、SNP溶液(0.1mmol/L,去离子水配制)及NO合剂(L-arg、APO、SNP溶液等比混合,临用前配制)在相应组小鼠创面用无菌注射器皮下注射各0.15ml,隔天一次。标本采集:在治疗后的第1、3、5、7、10天,应用数码照相机拍下创面情况,记录愈合的面积。于伤后第3、7、10天分别取创缘组织,10%福尔马林固定,石蜡包埋连续性切片后,常规HE、VG染色,观察创面成纤维细胞、血管新生及胶原沉积等情况,评价创面愈合效果。 2.1计算创面愈合率使用透明方格纸描绘创口,用计算机图像分析软件计算面积,并按以下公式计算创面愈合率:创面愈合率=(创面初始面积-创面形成后第n天的面积)/创面初始面积×100%。 2.2成纤维细胞密度测定400倍光镜下观察HE染色切片,分别在组织中央浅部、中央深部、两侧部各随机选取10个矩形视野(0.0052 mm2/视野),目测计数并计算切片内单位面积成纤维细胞数量。 2.3.胶原纤维面密度测定400倍光镜下观察VG染色组织切片,分别在组织中央浅部、中央深部、两侧部各随机选取5个视野,利用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统计算红染的胶原纤维的面密度。 3. NO合剂对小鼠创面血管生成和转化生长因子的研究 3. 1血管密度的测定以抗血管VIII因子抗体对标本进行免疫组织化学染色,操作步骤按照试剂盒说明书进行。参照weidne的评判标准:呈现棕色的单个内皮细胞或内皮细胞簇均作为1个血管计数,肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径的血管均不计数。400倍光镜下在每张切片的中央区、周边区各随机选取5个血管密集的视野,取其平均数作为该标本的平均血管密度(MVD)。 3. 2转化生长因子测定以TGF-β1抗体对标本进行免疫组织化学染色,操作步骤按照试剂盒说明书进行。观察指标用光学显微镜(10×40倍)观察TGF-β1免疫阳性纤维的分布用Mplas-500多媒体彩色病理图文分析系统,通过显微摄像系统放大400倍,每张切片随机选取5个视野,在该视野中选定TGF-β1(+)标准,以图像分析系统自动测量出结果,单位μm2。 采用SPSS 10.0软件包进行统计学分析,所有计量数据以( X±S)表示,进行t检验,p0.05表示有统计学差异。 结果 1.连续8周跟踪检测小鼠的血糖浓度及体重变化;检测结果表明小鼠血糖浓度显著增高(p0.05),而体重明显下降(p0.05),且体征持续8周以上,与文献报道的STZ糖尿病小鼠模型一致;表明STZ在小鼠体内成功诱导I型糖尿病。 2. STZ糖尿病小鼠创口的整个愈合过程比对照组明显滞后(p0.05),说明手术使STZ糖尿病小鼠出现了创伤难愈现象,也说明糖尿病严重损伤了小鼠皮肤组织的创伤愈合能力。 3.对照组于创伤后16-18天可以基本愈合;NO合剂治疗组肉芽组织生长好,愈合时间较对照组提前3-4天。其他单剂治疗组愈合情况良好,较对照组提前1-2天,创面形成后第3天起,各药物治疗组小鼠创面愈合率较对照组明显上升,以创面形成后7d内变化最为明显。 4.各实验组创伤后3天可见细胞增生、胶原形成,7-10天成纤维细胞增生明显,胶原纤维排列整齐;实验组在创伤后3、7天成纤维细胞数密度(NA)均高于对照组水平,而在创伤后10天均低于对照组;其中,NO合剂治疗组较各药物单剂治疗组差异更为明显,具有统计学意义(P0.05)。各组胶原纤维面密度(AA)均呈持续性增加的趋势,实验组在所有时间点AA均高于对照组(P0.05),单剂各组比较差异不明显 5. TGF-β1阳性细胞比率:NO合剂治疗组用药后3天细胞阳性染色明显,3-7天细胞中的TGF-β1在细胞中的阳性表达增强并达到高峰,创伤后7-14天细胞中的阳性表达逐渐减弱至相对维持稳定水平。实验组在3、7天时间点的阳性表达均高于对照组(P0.01),对照组细胞中的阳性表达峰值明显滞后,且表达量少于其他组;而与其它单剂干预组组间比较差异不明显。 6. NO合剂治疗组在创伤后3-7天内皮细胞增生活跃,较对照组有更多的毛细血管形成(P0.01),与其他单剂干预组比较,血管生成的数量亦有差异(P0.05)。对照组血管生成明显较少,且炎性反应较其他组严重。其中NO合剂治疗组与对照组的差异最为显著(P0.01),L-Arg、APO、SNP治疗组组间差异不明显。 结论 在糖尿病小鼠创面的愈合过程中单独使用L-精氨酸或硝普钠或夹竹桃麻素可以促进创面的愈合,而促NO合剂则对创面的愈合具有更好的修复作用,可以明显缩短糖尿病小鼠创面的愈合时间,较L-Arg、APO、SNP单独使用效果更为显著。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 程瑞杰;方勇;俞为荣;王莹;;粒细胞巨噬细胞集落刺激因子对糖尿病小鼠创面愈合的作用[J];上海交通大学学报(医学版);2007年04期
2 谢绮雯,冯坤贤,陈欣智,郑凤据;烧伤病人血浆NO水平测定的分析及护理[J];国际医药卫生导报;2004年12期
3 陈小芳,杨勤,袁宇宁,徐军发;急性白血病患者血浆Fas和NO的检测及临床意义[J];河南肿瘤学杂志;2003年04期
4 孙丽莎,杨露春,翟辉;急性局灶性鼠脑组织缺血后NO含量的变化及其意义[J];脑与神经疾病杂志;1998年02期
5 周娅,佟书娟,王宁萍,赵建宁,黎雪如;枸杞多糖对小鼠巨噬细胞内酶活性及NO诱生的影响[J];山东中医杂志;2000年06期
6 许中,赵中,朱红胜,许献文;脑梗塞患者血清VEGF、NO和NOS测定及其意义[J];上海免疫学杂志;2000年03期
7 姜杰,唐勇;IL-1与椎间盘退行性病变[J];颈腰痛杂志;2000年04期
8 杨泽洲,耿排力,汪如源,靳国恩,赵秀丽;IL-1β、TNF-α和NO水平变化在某些神经系统疾病中的意义[J];西安医科大学学报;2001年01期
9 张骏,翁福海,李会强,卢奕,姚智;大黄素对内毒素刺激下的大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF_α及NO的影响[J];天津医科大学学报;2001年02期
10 周丽莎,涂乾;子午流注纳支法对大鼠醋酸性胃溃疡愈合影响的实验研究[J];中医药研究;2001年04期
11 余德文 ,薛贵丽,华丕宏,王淑妮,尹玉琴;老年肺部感染与血清一氧化氮改变及其与外周血白细胞关系[J];中国医师杂志;2002年S1期
12 程丰,邵国富,张志霖,霍红梅,包仕尧;脑卒中患者血中NO、ET含量的改变及其临床意义[J];河南实用神经疾病杂志;2002年03期
13 陈雪辉,江京宁,芦春宁;急性脑血管意外患者血浆NO和SOD含量动态变化[J];青海医药杂志;2002年03期
14 张正斌,任春艳,刘春颖,邢磊,刘莲生;对一氧化氮作用的新认识及其检测方法[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2003年03期
15 李鲁明;一氧化氮及合成酶在缺氧缺血性脑病中的探讨[J];医药论坛杂志;2003年15期
16 罗高兴;巨噬细胞产生NO及PGE2的相互关系[J];国外医学.免疫学分册;1997年01期
17 朱梅菊,郭振球,赵复锦;脑动脉硬化症血浆TNF-α、NO与中医辨证分型的相关性研究[J];深圳中西医结合杂志;1999年02期
18 程霞,刘洁,经先振,冯小平;“金纳多”治疗新生儿缺氧缺血性脑病的疗效及血浆内皮素一氧化氮的变化[J];中国微循环;1999年04期
19 史丽滨,刘振桐,刘平,张卓然;E.coli DNA对荷瘤小鼠血清中TNF-α、NO含量的影响[J];大连医科大学学报;2000年03期
20 王永志,陈炜,邢红云,王焱,游碧荣,蒋和平,李斌娟;高血压病与肿瘤坏死因子、一氧化氮及血管活性物质的相关性研究[J];中国慢性病预防与控制;2000年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 高福禄;岳凤鸣;庞晓静;杜心欣;张雷;;db/db自发性糖尿病小鼠睾丸EGFR,c-fos表达研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
2 邬晓婧;张爱珍;;低分子柑桔果胶粉对糖尿病小鼠血糖血脂调节作用研究[A];2005年浙江省内分泌学术会议论文汇编[C];2005年
3 陈建国;来伟旗;江月仙;梅松;刘冬英;傅颖;陈日萍;;茶多糖对糖尿病小鼠调节血糖及其作用机理的探讨[A];生命发展机遇——窗口期营养——达能营养中心第十二届学术年会会议论文集[C];2009年
4 黄啸;谢立平;蔡松良;周利群;那彦群;郭应禄;Firouz Daneshgari;;小鼠糖尿病膀胱功能障碍的自然病程特征及发病机理探讨[A];2008年浙江省泌尿外科学术年会论文汇编[C];2008年
5 方勇;王毅;王莹;徐英华;包士三;;糖尿病小鼠创面愈合中炎症细胞和GMCSF的变化及意义[A];第四届全国烧伤救治专题研讨会烧伤感染救治新进展论文汇编[C];2006年
6 吴贻松;陆红丽;韩燕飞;郭新;黄旭;许文燮;;NPs信号通路在糖尿病小鼠胃动力学障碍中的作用及其机制[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
7 张晓梅;王巍;王小丹;;ICAM-1和VEGF在KK-AY糖尿病小鼠视网膜中的表达[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年
8 唐乙;宋少华;刘芳;沈晓芸;王全兴;;糖尿病小鼠移植sIL-1R1修饰的同种胰岛细胞延长移植物存活期的机制研究[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
9 鲁憬莉;谢胜男;侯文睿;张莎莎;李璐璐;向明;;新生物活性肽胰安肽对糖尿病小鼠的降糖作用[A];第十届全国抗炎免疫药理学学术会议论文集[C];2010年
10 黄啸;谢立平;蔡松良;周利群;那彦群;郭应禄;Firouz Daneshgari;;小鼠糖尿病膀胱功能障碍的自然病程特征及发病机理探讨[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吕琳;黄芪甲苷对高脂加链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的降血糖作用及其作用机制[D];南方医科大学;2010年
2 彭程;小鼠角质细胞生长因子缺失对创面愈合的影响[D];中南大学;2011年
3 于攀;氢气促糖尿病创面愈合的研究[D];第三军医大学;2011年
4 高晓东;骨髓间充质干细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响及作用机制研究[D];复旦大学;2010年
5 唐忠海;桑叶功能成分的分离及其水提物对Ⅰ-糖尿病小鼠治疗作用的研究[D];中南大学;2012年
6 李沁;脉冲射频能量(PRFE)加快糖尿病小鼠伤口愈合的研究[D];华中科技大学;2012年
7 欧阳建;同基因造血干细胞移植治疗1型糖尿病小鼠的疗效及机制研究[D];南京医科大学;2010年
8 庄柯;纳米Mn-Ti-O复合氧化物催化剂结构与NO选择性催化还原性能[D];南京大学;2011年
9 李航;Nrf2-ARE信号通路对Ⅰ型糖尿病小鼠肾脏氧化应激的影响及其作用机制的研究[D];河北医科大学;2010年
10 李夏;高血糖对脉络膜新生血管的影响及其可能的机制[D];第四军医大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 任校峰;NO生成合剂对糖尿病小鼠创面愈合的促进作用[D];第三军医大学;2010年
2 吕伟欣;氮掺杂多壁碳纳米管的合成及NO电氧化研究[D];黑龙江大学;2010年
3 王霆宇;晋南地区盐碱地冬小麦—夏玉米轮作田的NO排放特征[D];山西大学;2010年
4 戴颖;NO在骨关节炎关节软骨中的表达及意义[D];中国医科大学;2005年
5 王文;黄瓜幼苗对苯丙烯酸胁迫的生理响应及外源NO的缓解作用研究[D];西南大学;2010年
6 吴珂昕;黄安伦钢琴作品《中国畅想曲》(NO、2)创作与演奏研究[D];山东师范大学;2010年
7 陈阳辉;小麦应答激发子刺激或叶锈菌侵染诱发的HR过程中NO的功能初探[D];河北农业大学;2011年
8 杨雪;益气养阴,化瘀祛浊中药对糖尿病肾病大鼠NO、HCY的影响[D];辽宁中医药大学;2010年
9 曲茂兴;阿托伐他汀对脓毒症大鼠模型NO与MDA的影响[D];大连医科大学;2010年
10 王玉东;负载Pd催化剂上丙烯选择还原NO的研究[D];上海交通大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈季冰;企业办社会? No![N];华夏酒报;2010年
2 沈会 译;螺内酯可改善2型糖尿病小鼠的认知功能下降[N];中国医药报;2010年
3 记者 徐晶晶;消费者对霸王条款有权说“NO”[N];滨海时报;2010年
4 叶茂中 顾小君;CI is no CI?[N];中国工商报;2000年
5 林非;NO调节剂精氨酸氨基多糖问世[N];中国化工报;2009年
6 徐德昭;欧盟9月起对白炽灯说NO[N];东莞日报;2009年
7 林永锋;石油价格也会对欧佩克说NO[N];中国能源报;2010年
8 钱文;首钢新钢联:对“瘦身”钢筋说“NO”[N];中国建设报;2010年
9 沈燕;让菜价飞?NO![N];扬州日报;2011年
10 本报记者;省教育厅明确表态“NO”[N];山西日报;2009年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978