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《第三军医大学》 2009年
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大豆异黄酮对不同雌马酚代谢表型绝经后妇女骨质疏松症防治效应及机制研究

王建  
【摘要】: 骨质疏松是一种以骨量减少、骨的微观结构退化为特征的中老年常见疾病,主要表现为髋部和/或腰椎骨折,女性尤为严重。在西方人群中,髋部骨折的发生率随着年龄增加呈指数增长。50岁以上的骨折病例中女性与男性比例为3:1。世界范围内,随着老年人口比重的增加,骨质疏松性骨折的发生也显著增加。我国作为发展中国家,人口基数大,老龄人群增加速度快,这就决定了骨质疏松症,尤其是绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporosis, PMOP)已成为我国严重的公众健康问题。因此,深入研究PMOP的防治措施,对提高绝经后妇女的健康及生活质量具有重要的现实意义。 业已证明,绝经后雌激素减少所导致的骨转换增加是PMOP的主要发病原因。激素替代治疗(hormone replacment therapy, HRT)是国际上广泛开展,用以维持体内雌激素水平、改善更年期症状的治疗方案。大量研究证实HRT能预防绝经后妇女的骨质疏松及相应骨折的发生,然而美国妇女健康倡议(Women's Health Initiative,WHI)等大型人群研究发现HRT同时能引起治疗人群罹患乳腺癌、心血管疾病的风险显著增加。美国食品药品监督管理局由此建议不能将HRT用以绝经后妇女骨质疏松预防的一线方案,而应当通过膳食、运动等途径来寻找新的防治方法。 近年来,植物雌激素、尤其是大豆制品来源的大豆异黄酮(soybean isoflavones, SI)备受研究关注,并被期待是HRT的天然替代物。该类化合物具有弱雌激素样作用,同时作为雌激素受体的选择性调节剂能够对雌激素生物效应发挥相应的拮抗或促进效应,从而没有雌激素的副作用。流行病学研究发现,在摄入豆制品较高的亚洲地区绝经后妇女中,其膳食SI摄入水平与骨密度之间呈显著正相关。然而,随后开展的诸多临床研究在评价膳食大豆制品或SI干预对绝经后妇女骨密度的影响效应时,所得结果却不尽相同。目前认为,以往研究之间观察到的SI干预效应的差异主要与不同研究人群间体内SI的代谢水平不同有关。其中,作为SI的代谢终产物之一,雌马酚(equal, Eq)与其它代谢物如苷元金雀异黄素(genistein, GNT)、黄豆黄素(glycitein, GLY)、双氢大豆黄酮苷元(dihydrodaidzein,DHD)等相比具有更强的雌激素受体结合能力和稳定性,但在人群中仅有30%~50%的个体能产生Eq(equol producer, EP+),且不同人种对Eq的代谢能力也不同。以往评价豆制品或SI摄入对骨质疏松防治效果的研究大都在高加索籍妇女中开展,且未考虑不同Eq代谢表型下豆制品摄入对PMOP影响的差异。因此,探讨PMOP发生的危险因素、膳食结构与SI代谢相关因素,深入观察SI干预对不同Eq表型绝经后妇女骨质疏松的防治效应并探讨其相关机制,对于指导女性合理食用大豆及其制品防治PMOP具有重要的现实意义。 基于以上分析,本研究围绕不同Eq代谢表型对大豆制品生物学效应的潜在影响,通过病例-对照研究,按统一标准共纳入PMOP新发病例152名,对照者308名,探讨了绝经后妇女骨质疏松症的危险因素,采用半定量食物频数表调查了各研究人群的膳食结构以及豆制品摄入情况,通过高效液相色谱法检测了各人群尿液中异黄酮的代谢水平并分析Eq代谢表型,使用SPSS13.0软件比较不同人群间膳食豆制品摄入及SI代谢产物水平的差异并分析其与PMOP发生风险的相关性。为了进一步分析Eq代谢表型差异性对大豆异黄酮防治PMOP效应的影响,针对PMOP和非PMOP人群的不同Eq代谢表型又分别设置干预组(20g大豆分离蛋白soy protein isolate, SPI/d,约含50mgSI)和空白对照组(20g乳清分离蛋白/d,不含SI),干预6个月。分别在试验0、3、6个月检测各组人群的SI代谢水平、骨密度(Bone mineral density, BMD)以及血脂、性激素水平,深入观察大豆分离蛋白干预对不同Eq表型绝经后妇女骨质疏松的防治效应,评价Eq代谢表型差异性对SI防治骨质疏松效应的影响,并就其相关机制进行探讨。此外,体外试验用含20%胎牛血清的α-MEM培养新生Wistar大鼠颅骨分离培养的成骨细胞,同时分别给予10-8 mol/L~10-6mol/L的雌马酚和雌二醇(estradiol, E2)以及对应剂量的雌激素受体拮抗剂ICI182780,用Western blot检测细胞蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)的表达,用MTT法检测细胞增殖情况,用对硝基酚磷酸盐法及放免法测定成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatas, ALP)和骨钙素(Boneglaprotein, BGP)的活性,研究雌马酚对体外原代培养成骨细胞增殖和分化作用的影响,旨在从细胞水平探讨雌马酚预防骨质疏松症的作用机制。 主要研究结果: 一、人群研究 1. PMOP常规危险因素调查:髋骨骨折家族史、低身体质量指数和多产次与重庆市绝经后妇女骨质疏松症发生风险呈显著正相关,而经常运动、饮茶以及保持适当的雌激素水平与PMOP发生的风险呈显著负相关。 2.膳食豆制品摄入与PMOP发生的相关性:PMOP组膳食大豆蛋白及总大豆制品的摄入量显著低于非PMOP组(P0.05),进一步Logistic回归分析发现膳食大豆蛋白及大豆类及其制品的摄入水平与PMOP的发生呈显著的负相关。此外,调查结果还提示膳食中高水平的Ca、Vit A、Vit D以及深色蔬菜、奶类与PMOP的发生呈显著负相关,而动物蛋白、烹饪油摄入量与PMOP的发生呈显著正相关。 3. SI代谢水平与PMOP发生的相关性:PMOP组人群的EP+比例为32.2%,显著低于非PMOP人群的40.3% ( P0.05)。同时,PMOP组人群尿液中Eq、GNT、GLY、DHD水平均显著低于非PMOP组(P0.05);进一步Logistic回归分析发现人群尿液中Eq、GNT水平降低与PMOP的发生呈显著的正相关。 4. SPI干预对不同Eq代谢表型绝经后妇女SI代谢水平的影响:对于EP+人群,与对照组相比较,膳食大豆分离蛋白干预均能显著上升PMOP组和非PMOP组的Eq、GLY及GNT水平(P0.05),其中PMOP组的改善效应更显著。对于EP-人群,膳食干预能显著上升PMOP组和非PMOP组的GNT水平(P0.05)。 5. SPI干预对不同Eq代谢表型人群骨密度的影响:对于PMOP人群,与对照组相比较,膳食大豆分离蛋白干预均能显著上升EP+、EP-干预组的BMD及T值水平,其中EP+组的改善效应更显著(P0.01)。对于非PMOP人群,与对照组相比较,膳食干预能显著上升EP+干预组的BMD及T值水平(P0.05),而EP-干预组的骨密度值有所上升,但无显著性差异(P0.05)。 6. SPI干预对各组人群血脂及性激素水平的影响:对于PMOP人群,与对照组相比较,膳食大豆分离蛋白干预均能显著上升EP+、EP-干预组的E2水平,并显著降低LDL-C以及TC水平(P0.05),HDL-C水平略有上升但无显著性意义(P0.05),对TG水平无明显改变(P0.05),其中EP+组的血脂改善效应更显著(P0.01)。对于非PMOP人群,与对照组相比较,膳食干预仅能显著改善EP+干预组的TC、LDL-C及E2水平(P0.05)。 二、细胞实验 1.雌马酚对OB增殖功能的影响:Eq干预可显著增强OB的MTT吸光度,该效应随干预时间的延长而增加(P0.05),而随着浓度的改变无明显的变化(P0.05)。Eq对OB的MTT吸光度影响弱于E2(P0.05)。Eq和E2对OB增殖作用均可被ER拮抗剂ICI128780所抑制。 2.雌马酚对成骨细胞分化功能的影响:Eq能显著促进成骨细胞的ALP活性和BGP表达,并随浓度升高和时间延长均有上升的趋势。此外,Eq的干预效应明显低于相同干预浓度、相同作用时间的E2(P0.05),且二者对OBALP活性和BGP表达的作用均可被ICI128780抑制。 3.雌马酚对成骨细胞胶原蛋白含量的影响: Eq能显著提高细胞内羟脯氨酸的含量,并随浓度升高和时间延长均有上升的趋势。Eq对其作用弱于E2,且均可被ICI78280所抑制。 4.雌马酚对成骨细胞PKCα表达的影响:Eq干预可明显提高OB的PKCα表达(P0.05),并随作用浓度升高而增强的趋势。E2对OB PKCα表达作用明显强于Eq(P0.05)。各浓度组联合ICI182780作用后,其PKC表达明显受到抑制并具有显著性意义(p0.05),但略高于空白对照组。 综上所述,本研究从人群病例-对照研究和体外细胞实验两方面,探讨了重庆地区绝经后骨质疏松发病的常规危险因素及其与膳食豆制品摄入、体内SI代谢水平的相关性,并围绕不同Eq代谢表型对大豆制品生物学效应的潜在影响,深入观察大豆分离蛋白干预对不同Eq表型绝经后妇女骨质疏松的防治效应,评价Eq代谢表型差异性对SI防治骨质疏松效应的影响,并就其相关机制进行探讨。人群研究发现髋骨骨折家族史、低身体质量指数和多产次是影响重庆市绝经后妇女骨质疏松症发生的重要危险因素,而经常运动、饮茶以及保持适当的雌激素水平则有助于预防PMOP的发生。膳食调查结果发现大豆蛋白、Ca、Vit A、Vit D以及大豆类、深色蔬菜和奶类能有效预防PMOP的发生,而膳食动物蛋白、烹饪油摄入能显著上升PMOP的风险。SI代谢水平分析显示Eq代谢表型分布可能直接影响到人群PMOP的患病,同时尿液中Eq与GNT水平上升能显著降低PMOP的发生风险。大豆分离蛋白干预试验发现,膳食SI干预能显著改善PMOP组的骨密度及血脂、雌激素水平,其中EP+人群的干预效果更为显著;而对于非PMOP人群,研究发现膳食SI干预仅对EP+人群有显著的改善效果。膳食干预对EP-人群也有一定的改善效果,其效应可能主要是通过提高体内GNT水平来发挥。此外,细胞实验发现Eq干预可显著促进成骨细胞的增殖、分化以及骨基质形成,而该效应可不同程度上被ER拮抗剂ICI182780所抑制,推测Eq作为一种天然雌激素,能激活雌激素受体,并通过雌激素受体途径调控细胞的增殖和分化,该调控作用可能与跨膜蛋白PKCα信号转导有关。本研究进一步证实膳食因素对PMOP的发生起着重要作用,并且不同人群中Eq代谢表型的差异性可能是影响大豆异黄酮发挥骨质疏松防治效应的重要因素,其中EP+人群的干预效应更显著。以上结果提示女性应在日常生活中选择合理的生活方式及生育方式,同时积极调整饮食平衡,保证大豆类及其制品、深色蔬菜和奶类的摄入,并适当控制动物性食品和烹饪油的摄入,以从膳食、行为途径上更好地预防PMOP的发生。
【学位授予单位】:第三军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R580

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6 刘丽鹏;吴洁;;转化生长因子-β与绝经后骨质疏松症关系的研究进展[A];中华医学会第六次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会成立十周年论文汇编[C];2011年
7 罗玉君;王小云;;绝经后骨质疏松症的西医诊断技术进展和中西医治疗现状[A];第九次全国中医妇科学术大会论文集[C];2009年
8 邢国胜;;大豆异黄酮防治骨质疏松症及其机理研究进展[A];第十四届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文集[C];2006年
9 吴坚;石见佳子;;大豆异黄酮配合适量运动对骨质疏松症造模动物及闭经后女性的脂代谢和骨代谢的影响[A];中国营养学会第十次全国营养学术会议暨第七届会员代表大会论文摘要汇编[C];2008年
10 郭金;郑瑾;任秦有;史恒军;高阿媚;;中西医防治绝经后骨质疏松症浅谈[A];全国中医药防治老年病学术交流会学术论文集[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 蒲昭和;防骨质疏松症应从30岁开始[N];卫生与生活报;2006年
2 李典云;药膳治骨质疏松[N];上海中医药报;2008年
3 本报记者  孙燕明;八成脊柱骨质疏松症男患者吸烟酗酒[N];中国消费者报;2006年
4 易善永;谨防药物引起骨质疏松症[N];家庭医生报;2007年
5 赵靖;补钙+运动 有效预防骨质疏松[N];中国消费者报;2007年
6 王健 陆邦超;骨质疏松症为什么越来越年轻化[N];家庭医生报;2007年
7 张松伟;骨质疏松症患者谨防冬季骨折[N];中国消费者报;2007年
8 孟刚;预防骨质疏松症从年轻时做起[N];中国消费者报;2007年
9 王金山;年轻女孩也患骨质疏松症[N];中国医药报;2007年
10 熊迎;抗骨质疏松症长效新药面世[N];中国医药报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王建;大豆异黄酮对不同雌马酚代谢表型绝经后妇女骨质疏松症防治效应及机制研究[D];第三军医大学;2009年
2 王燕;2型糖尿病骨质疏松症的基础与临床研究[D];河北医科大学;2011年
3 郭帮富;骨质疏松症患者成骨细胞基因表达与中医证型的相关性研究[D];广州中医药大学;2008年
4 韩利华;脉冲电磁场防治骨质疏松症的体内外实验研究[D];第四军医大学;2004年
5 邵敏;中药骨康对骨质疏松骨吸收与骨形成影响的研究[D];广州中医药大学;2001年
6 马元;通补并用法对原发性骨质疏松症生存质量的影响[D];北京中医药大学;2007年
7 乔荣勤;刘庆思教授论治骨质疏松症学术思想研究[D];广州中医药大学;2011年
8 年华;二仙汤抗骨质疏松的物质基础研究[D];第二军医大学;2006年
9 郑高利;葛根异黄酮对骨质疏松症的防治作用及其机理研究[D];浙江大学;2002年
10 程英雄;补肾健脾活血法对绝经后骨质疏松症患者骨转化的影响[D];广州中医药大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李丽荣;脉冲电磁场治疗骨质疏松症的初步研究[D];第四军医大学;2005年
2 刘贾昆;健骨Ⅱ号对实验性骨质疏松大鼠肿瘤坏死因子及转化生长因子表达的影响[D];黑龙江中医药大学;2006年
3 李少春;植物雌激素α-玉米赤霉醇对去卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用[D];河北大学;2010年
4 梅浩;大豆异黄酮对去势大鼠骨质疏松症预防效果的实验研究[D];遵义医学院;2011年
5 桂继琮;牛奶和钙强化豆浆对上海市绝经后妇女骨代谢的影响[D];复旦大学;2009年
6 闫妙娥;“补肾益气 活血通络”法防治绝经后妇女骨质疏松症的临床研究[D];黑龙江中医药大学;2004年
7 李兴明;运用肝肾同源理论治绝经后骨质疏松症的探讨[D];广州中医药大学;2009年
8 张喜贵;叩击式骨应力刺激仪预防废用性骨质疏松的实验研究[D];福建中医学院;2009年
9 高荣;云克治疗绝经后2型糖尿病并骨质疏松症患者疗效观察[D];新疆医科大学;2010年
10 张田;仙灵骨葆联合密盖息治疗老年性骨质疏松症的疗效观察[D];成都中医药大学;2011年
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