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《第四军医大学》 2010年
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脊索瘤放化疗抵抗机制的初步研究及骨肉瘤耐药细胞系的建立

纪振钢  
【摘要】:研究背景: 药物耐药是限制肿瘤的化疗疗效的主要问题。肿瘤可能是在治疗前就对化学药物耐受,而耐药也能通过最初对化疗敏感的肿瘤的治疗过程中获得。这些继发耐药的一个令人沮丧的特征是这些肿瘤不但对最初用于治疗它们的药物耐药,而且对其他不同作用机制的药物产生交叉耐药。耐药,不管是原发还是继发,被认为将对超过90%的转移癌患者治疗失败,而且耐药的微转移肿瘤细胞也可能降低在后续处理中的化疗的作用。显然,如果肿瘤耐药能被克服,那么肿瘤患者存活率的提高将是非常显著的。许多因素将影响化疗药物的敏感性。这些包括限制到达肿瘤的药物数量,影响肿瘤微环境的机制等。肿瘤细胞耐药可以在多个水平发生,包括增加药物排出,减少药物摄入,药物失活,药物靶点的改变,药物造成的损害作用,凋亡的逃逸。 脊索瘤比较少见,是具有局部侵袭的骨原发恶性肿瘤,来源于脊索残存物。肿瘤主要发生在中轴骨,好发于颅底区域的蝶骨和骶尾部。脊索瘤通常生长缓慢,低度恶性,对原发肿瘤的控制仍是治疗上的主要挑战。脊索瘤的治疗方法主要依赖于外科手术,手术切除加术后放疗是目前最好的治疗方法。化学治疗对脊索瘤不是主要选择,多因为对化疗药物的细胞毒性抵抗所致,而新近发现的靶向制剂可能提供新的选择。 骨肉瘤是一种常见的骨原发恶性肿瘤,其化疗后常有多药耐药现象发生,严重影响患者的治疗效果和预后,因此对其耐药性的检测、耐药机制及逆转的研究一直是众多学者研究的热点。在体外建立多药耐药的细胞模型已逐渐成为研究骨肉瘤多药耐药性的有利工具。紫杉醇作为一种化疗药物,在本中心开展了大量的临床、基础研究并作为骨肉瘤化疗的基础药物,其在临床初始化疗缓解后常会产生耐药性,严重影响患者治疗效果,因此采用紫杉醇诱导建立骨肉瘤多药耐药细胞模型,对探讨骨肉瘤细胞多药耐药机制和耐药逆转治疗具有重要意义。 研究目的: 探讨多药耐药基因1(MDR1)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白、多药耐药相关蛋白(MRP1)在脊索瘤中的表达与脊索瘤病理特征及放化疗抵抗之间的关系。研究脊索瘤CM-319细胞的放化疗敏感性。建立骨肉瘤耐紫杉醇细胞系,探讨骨肉瘤多药耐药的发生机制。 研究内容: 1、脊索瘤细胞系CM-319的生物学鉴定:通过免疫细胞化学染色、细胞周期分析、透射电镜、糖原染色等分析CM-319的生物学特性。 2、脊索瘤细胞系中放化疗相关基因的检测:采用RT-PCR、间接免疫荧光、免疫细胞化学Envision法及western blott法对脊索瘤细胞系CM-319中HIF-1α和MDR1、MRP1基因及蛋白的表达进行检测,探讨HIF-1α和MRP1与脊索瘤化疗耐药、放疗抵抗的关系。 3、脊索瘤组织MDR1、HIF-1α和MRP1的表达及临床意义:选取2000年1月至2008年12月接受手术治疗的50例脊索瘤患者的组织石蜡标本,用免疫组化Envision法检测MDR1、HIF-1α、MRP1蛋白的表达情况,并分析其与放化疗抵抗的关系。 4、脊索瘤细胞系对放化疗的敏感性研究:通过细胞系体外照射及不同化疗药物对细胞系的敏感性实验,观察脊索瘤细胞系对放疗及化学药物的敏感性。 5、人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX、SOSP-9607/PTX、OS-9901/PTX的建立及多药耐药机制研究:采用紫杉醇大剂量间断冲击培养法,诱导建立三株紫杉醇耐药骨肉瘤细胞系,并运用MTT法检测6种药物敏感性变化及细胞生长规律变化,流式细胞仪分析亲本细胞系和耐药细胞系的细胞膜表面P-gp蛋白表达率、罗丹明123排出情况,RT-PCR检测细胞内耐药基因的变化,免疫细胞化学检测细胞内P-gp蛋白的表达,western blot法检测细胞内P-gp蛋白的表达。 研究结果: 1、脊索瘤细胞系CM-319呈上皮样生长,CK、EMA、S-100、Vimentin阳性,富含糖原,染色体为亚三倍体核型,侵袭能力低于骨肉瘤,异种成瘤能力100%。 2、脊索瘤细胞系中能检测到HIF-1α及MRP1mRNA的表达,但未检测到MDR1mRNA的表达(P0.01)。间接免疫荧光染色及免疫细胞化学染色结果提示脊索瘤存在HIF-1α及MRP1的表达。western blot法提示CM-319中存在HIF-1α和MRP1的表达,而不表达MDR1。 3、50例脊索瘤组织MDR1的阳性表达率为10%,与髓核的表达(20%)、骨软骨瘤的表达(13.3%)无统计学差异。HIF-1α、MRP1的阳性表达率分别为80%和74%,均明显高于髓核表达的20%、26.7%,骨软骨瘤的表达的20 %和26.7%,具有统计学意义(P0.01),同时相关性分析显示肿瘤组织中HIF-1α与MRP1两者之间具有正相关性(r=0.8,P0.01),其两者与MDR1相比呈负相关性。结合临床资料分析,脊索瘤肿瘤组织中MDR1、HIF-1α、MRP1的表达与患者性别、年龄、发病次数相比无统计学意义。 4、紫杉醇相对于其他化疗药物对CM-319有较高的抑制率,高浓度紫杉醇与卡铂联合用药对CM-319的抑制有协同作用。紫杉醇作用细胞后电镜下观察到细胞的凋亡现象,细胞周期检测发现细胞阻滞在S期和G2/M期,抑制了细胞的生长。小剂量射线能对紫杉醇起到化疗增敏作用,低浓度紫杉醇能对射线起到放疗增敏作用。 5、历时12个月建成人骨肉瘤耐药细胞系MG-63/PTX、SOSP-9607/PTX、OS-9901/PTX能在含PTX 1μg/mL的培养基中稳定生长并传代,其对PTX的耐药指数为69.8、24.4、26.88,并与卡铂、顺铂、表柔比星、氨甲喋呤、阿霉素等多种化疗药物存在不同程度的交叉耐药性;罗丹明排出实验显示耐药细胞内罗丹明含量明显低于亲本细胞;RT-PCR结果显示在耐药细胞系中存在MDR1基因的表达,而在亲本细胞系中无MDR1基因的表达。免疫细胞化学、流式细胞仪及western blot实验均显示在耐药细胞中存在P-gp的表达。 研究结论: 1、CM-319作为稳定的脊索瘤细胞系,具有上皮组织和间叶组织的特征,性质稳定,为继续研究脊索瘤的放化疗及多药耐药提供基础。CM-319表达肿瘤放化疗抵抗相关的基因HIF-1α和MRP1,而不表达MDR1。脊索瘤组织中同样表达HIF-1α和MRP1,而不表达MDR1。HIF-1α和MRP1的表达呈正相关,与脊索瘤的放化疗抵抗相关。 2、CM-319细胞对多种化疗药物不敏感,紫杉醇相对于其他药物有较高的杀伤率,紫杉醇与放射线对脊索瘤的治疗能起到增敏作用。 3、MDR1/P-gp在多药耐药的特性上起着至关重要的作用,三株骨肉瘤多药耐药细胞亚系的成功建立为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法打下基础。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R738

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【参考文献】
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1 郝新保,范清宇,张殿忠,裘秀春,殷剑宁,张惠中,王晓宁;巨噬细胞融合瘤苗对大鼠骨肉瘤的主动性免疫治疗[J];第四军医大学学报;1999年12期
【共引文献】
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1 张瑞芳,蔡永葆,黄伟良,朱玉芳,曾艳,萧东,袁胜涛,丁健;胃腺癌的血管内皮细胞生长因子和KDR受体的表达及其临床意义[J];癌症;2001年01期
2 阮菲,解先宽,刘少阳;Survivin反义寡核苷酸对卵巢癌耐药细胞COC_1/DDP抑制的实验研究[J];癌症;2004年08期
3 于哲,范清宇,马保安,郝新保,龙华;大鼠树突状细胞融合瘤苗的特异性抗骨肉瘤作用[J];癌症;2005年03期
4 颜笑健;梁立治;曾宗渊;石智;符立梧;;Survivin shRNA增强人卵巢癌耐药细胞OVCAR3对泰素敏感性的研究[J];癌症;2006年04期
5 罗振东;叶琼玉;陈卫国;秦耿耿;程勇;贾铭;;骶骨肿瘤的影像学表现分析[J];中国CT和MRI杂志;2012年01期
6 蔡郑东;李国东;张寅权;王季;雷会宁;;高位骶骨肿瘤的外科切除与重建[J];第二军医大学学报;2007年09期
7 纪振钢;龙华;张殿忠;裘秀春;孙宏慧;马琼;刘云燕;文艳华;王育才;范清宇;;脊索瘤细胞系CM-319中放化疗抵抗相关基因的表达及临床意义[J];大连医科大学学报;2009年03期
8 富凯;杨军;汪欣;许波;;Survivin siRNA抑制人腺样囊性癌ACC-2细胞移植瘤血管生成[J];第三军医大学学报;2010年16期
9 于哲,范清宇,郝新保,龙华,刘云燕,文艳华,赵宏;树突状细胞融合瘤苗对大鼠骨肉瘤的主动免疫治疗[J];第四军医大学学报;2004年17期
10 李红,师文,王茂;前后联合入路骶骨肿瘤64例手术配合[J];第四军医大学学报;2005年22期
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1 杨迪生;;骨与软组织肿瘤治疗的进展[A];全国中西医结合学会骨伤科专业委员会第十二次学术年会浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十次学术年会论文汇编[C];2004年
2 杨迪生;叶招明;;骨与软组织肿瘤的治疗[A];浙江省中西医结合学会骨伤科专业委员会第十一次学术年会暨省级继续教育学习班论文汇编[C];2005年
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1 焦健华;Opsin3基因与人肝癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性关系的研究[D];南京医科大学;2009年
2 侯进琳;临床病理因素及FREM1,GSTT1,ISG20L1,STARD5,15q25.3与卵巢上皮癌紫杉醇联合铂类化疗疗效的相关性研究[D];北京协和医学院;2010年
3 王学东;Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌多药耐药中的作用及机制研究[D];中南大学;2011年
4 李伟;不可逆电穿孔(IRE)对细胞、肌肉及神经组织作用的实验研究[D];第四军医大学;2011年
5 冯丹丹;白血病耐药及复发相关miRNAs的筛选与功能探究[D];中山大学;2011年
6 陈雪丹;食管鳞癌中miR-203的表达及其调控机制探讨[D];第三军医大学;2011年
7 吴彦桥;中间颅底肿瘤临床生物学行为及手术入路解剖比较研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
8 孟化;胃癌中Survivin转录变异体的表达、及其与细胞增殖、凋亡、患者预后和化疗药物耐受的相关性研究[D];浙江大学;2004年
9 董武;卵巢癌腹膜亚临床转移阻断治疗新策略的初步探讨[D];中国医科大学;2004年
10 成胜权;Survivin基因对人肝癌细胞增殖和凋亡作用机制的研究[D];第四军医大学;2004年
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1 邹君君;三物白散对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响[D];湖南中医药大学;2010年
2 王玉瑾;STAT3和hTERT在视网膜母细胞瘤中的表达及临床病理意义[D];兰州大学;2010年
3 李筠;Survivin、Ki-67在宫颈上皮内瘤样病变Leep治疗前后的表达及意义[D];泰山医学院;2007年
4 银晶晶;小蘖碱对人卵巢癌细胞株SKOV-3增殖和凋亡的影响[D];山西医科大学;2011年
5 赵震宇;Survivin shRNA促进HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究[D];昆明医学院;2011年
6 林青;白术内酯Ⅰ对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞存活素survivin表达的拮抗作用及促凋亡作用[D];成都中医药大学;2011年
7 秦昆鹏;聚乙烯醇颗粒与海藻微酸钠微球栓塞犬髂内动脉的效果观察[D];安徽医科大学;2011年
8 李叶天;小颗粒明胶海绵栓塞犬髂内及骶中动脉的实验研究[D];安徽医科大学;2011年
9 王稣佳;有丝分裂检查点蛋白BubR1在乳腺癌细胞发生紫杉醇耐药中的作用及其机制研究[D];重庆医科大学;2011年
10 李妍;乳腺癌Survivin、BCRP基因表达与新辅助化疗TE方案的疗效相关性研究[D];新疆医科大学;2011年
【二级参考文献】
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1 马保安,范清宇,周勇,叶军,张明华,李军,沈万安;肿瘤切除、残腔置管灌注化疗治疗骶骨肿瘤和高浓度化疗药物对马尾神经功能的影响[J];第四军医大学学报;1999年12期
2 郝新保,张利朝,殷缨,韩秀珍,陶秦渝,郝晓柯,张盈华;MTT比色法测定细胞生长曲线[J];第四军医大学学报;1997年04期
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1 宋奇思;早期发生远处转移的脊索瘤1例[J];实用癌症杂志;1986年01期
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3 潘秦镜,张询;脊索瘤针吸细胞学诊断探讨[J];肿瘤防治研究;1999年01期
4 廖勇,马保安;骶尾部脊索瘤的外科治疗[J];医学信息;2000年03期
5 李淑莲,赵文昌;鼻咽脊索瘤1例[J];牡丹江医学院学报;2001年01期
6 余泽瑷;郭花琴;宋杰;;儿童脊索瘤[J];国际儿科学杂志;1983年02期
7 钱立庭,程广源;脊索瘤的放射治疗(附10例报告)[J];中国肿瘤临床;1994年06期
8 谭小军;鼻咽脊索瘤一例[J];中华病理学杂志;1996年04期
9 祁文;腰椎脊索瘤1例[J];诊断病理学杂志;1997年01期
10 赖炳贵;颈椎脊索瘤1例报告[J];实用放射学杂志;1998年05期
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1 张惠明;倪富强;李红艳;;脊索瘤与耳聋、耳鸣(摘要)[A];中西医结合“四种耳病”学术会汇编[C];2001年
2 高伟烨;刘族安;郑少逸;赖文;陈华德;高辉;;右前臂副脊索瘤1例报告[A];第八届全国烧伤外科学年会论文汇编[C];2007年
3 申文江;朱丽红;李萍;;脊索瘤的放射治疗——附3例报告[A];Fast Neutron Radiation Therapy--Proceedings of CCAST (World Laboratory) Workshop[C];1999年
4 鲁华;;骶尾部脊索瘤摘除术的手术配合[A];中华护理学会第14届全国手术室护理学术交流会议论文汇编(中册)[C];2010年
5 王勇;仇波;程鹏;陶钧;李光宇;王运杰;;术前易误诊为其他肿瘤的脊索瘤3例[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
6 贾德泽;申杰;尹俊毅;李刚;;一例以电解质紊乱为表现的鞍区脊索瘤[A];中华医学会神经外科学分会第九次学术会议论文汇编[C];2010年
7 马俊明;杨兴海;黄权;肖建如;;E-cadherin/P120ctn在脊柱脊索瘤中的异常表达[A];2009第十七届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编[C];2009年
8 于冬梅;;一例复发性巨大脊索瘤经远外侧入路切除并枕颈融合术的围手术期护理[A];中国医师协会神经外科医师分会第六届全国代表大会论文汇编[C];2011年
9 张辉;张大良;张红萍;孙炜;孙彦;;颅底及颈部脊索瘤11例临床分析[A];第七届全国老年医学学术会议暨海内外华人老年医学学术会议论文汇编[C];2004年
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1 中南大学湘雅医院急诊科教授 罗学宏;少见脊索瘤“遭遇”误诊[N];健康报;2009年
2 中南大学湘雅医院急诊科 教授 罗学宏;脊索瘤:确诊不易[N];医药经济报;2009年
3 刘爱华;治脊索瘤要多用几招[N];健康报;2006年
4 匡远深;北京完成国内首例胸椎间孔脊索瘤手术[N];中国医药报;2001年
5 孟庆普 孙立照;氩氦刀成功治疗脊索瘤[N];健康报;2006年
6 记者 郑良 许雪毅;坚强父母自建ICU救子 线上线下掀起“生命接力”[N];新华每日电讯;2010年
7 黎悦;鼻腔两瘤并列医生巧手切除[N];科技日报;2006年
8 通讯员 马凤琴;专家刀下留情巧摘瘤[N];科技日报;2006年
9 张献怀;走路腿打软警惕脊柱脊髓瘤[N];中国中医药报;2008年
10 张献怀;多科联袂施治帮瘫痪青年重新行走[N];科技日报;2008年
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1 沈军;脊索细胞遗迹与脊索瘤发生的相关性研究[D];苏州大学;2010年
2 纪振钢;脊索瘤放化疗抵抗机制的初步研究及骨肉瘤耐药细胞系的建立[D];第四军医大学;2010年
3 韩壮;mRNA-DD法克隆、鉴定脊索瘤相关基因cDNA片段及FHIT基因与脊索瘤相关性的实验研究[D];中国医科大学;2003年
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5 马俊明;E-cadherin和连环蛋白家族成员α-,β-,γ-,P120- catenin在脊柱脊索瘤中的表达及预后相关分析[D];第二军医大学;2008年
6 马保安;肿瘤局部切、刮术、残腔置管灌注化疗治疗骶骨肿瘤的实验研究及临床应用[D];第四军医大学;1999年
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1 杨珊珊;脊索瘤的临床病理学研究及预后分析[D];南京大学;2012年
2 宋传祥;COX-2在脊索瘤中表达及其意义[D];中国医科大学;2003年
3 梅志丹;内镜下经鼻腔进路手术切除颅底脊索瘤一例[D];武汉大学;2005年
4 矫健;T-Box转录因子brachyury调控脊索瘤细胞凋亡的作用与分子机制[D];第二军医大学;2012年
5 王季;利用基因芯片技术研究脊索瘤发病相关基因[D];第二军医大学;2007年
6 孙立超;经鼻蝶入路颅底脊索瘤的显微外科治疗[D];吉林大学;2009年
7 王亮;颅底脊索瘤的临床特点及预后相关因素分析[D];首都医科大学;2007年
8 裴斐;5例斜坡脊索瘤经远外侧入路切除临床体会[D];大连医科大学;2009年
9 张芮;脊索瘤复发的临床病理和免疫组织化学研究[D];山东大学;2005年
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