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《第四军医大学》 2011年
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缺血再灌注脑损伤后蛇床子素的作用及机制研究

晁晓东  
【摘要】:缺血性脑血管病是中枢神经系统的常见病和多发病;位列十大致死疾病前三、是首位致残因素,其发生率、病死率及致残率正在逐年上升。因此,脑缺血再灌注的分子机制和治疗方法的研究是国内外学者的研究热点。蛇床子素(osthole,OST)是香豆素类化合物的主要成分,来源于草本植物蛇床子,自然资源十分丰富。近年来大量实验表明,OST具有抗炎、抗凝血、扩张血管、抑制血栓形成、改善学习记忆、调血脂和潜在的神经保护作用。本研究应用大鼠的脑缺血再灌注模型,观察OST对缺血性脑损伤的保护作用,初步探讨OST保护作用可能的分子机制以及与内皮型一氧化氮合成酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)相关通路之间的关系。旨在明确OST对缺血性脑损伤的神经保护作用及其可能的作用机制,为临床应用OST治疗缺血性脑损伤提供理论基础。 实验一、缺血性脑损伤后OST预处理的保护作用 目的:观察缺血性脑损伤后OST的保护作用。方法:步骤一:建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)脑缺血再灌注模型。步骤二:实验用Sprague–Dawle(SD)大鼠45只随机分为假手术组(Sham组)、单纯缺血再灌注损伤组(MCAO组)和不同剂量OST预处理组(OST10+MCAO组、OST20+MCAO组、OST40+MCAO组);Sham组动物仅接受手术,没有动脉夹闭的过程;MCAO前30min,对OST预处理组动物分别腹腔注射OST 10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg。再灌注24h后,采取双盲的形式对各实验组动物分别进行神经功能缺陷评分(neurological deficit score,NDS)。而后,每组随机选取3只动物用于伊红染色法( hematoxylin-eosin staining, HE染色)观察缺血脑组织形态学变化;3只用于2%红四氮唑(TTC)染色观察缺血脑组织的面积;3只用于干湿重法观察缺血脑组织的水肿程度。结果:在缺血再灌注24h后,OST预处理组大鼠的神经功能缺陷评分、缺血脑组织面积和脑水肿程度明显低于单纯缺血的MCAO组。组织形态学结果也是OST预处理组损伤明显减轻(P 0.01)。其剂量在40 mg/kg时表现出神经保护作用最明显。结论:在大鼠的MCAO脑缺血再灌注损伤模型中,OST有明显的神经保护作用,在40 mg/kg时最明显。 实验二、缺血性脑损伤后OST预处理保护作用的机制 目的:观察OST治疗缺血性脑损伤时,丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-8的改变与作用。方法:实验用SD大鼠36只随机分为假手术组(Sham组)、单纯缺血再灌注损伤组(MCAO组)和OST预处理组(40mg/kg)。再灌注24h后,每组随机选取3只动物用于检测MDA;3只用于检测GSH;3只用于检测MPO的活性;3只用于检测IL-1β和IL-8。结果:在缺血再灌注24h后,OST预处理不但增加了GSH的含量,而且降低了MDA、IL-1β和IL-8的水平以及MPO的活性(P 0.01)。结论:缺血再灌注脑损伤后OST的保护作用与其抗炎抗氧化活性密切相关。 实验三、缺血性脑损伤后OST预处理保护作用的分子机制 目的:探讨缺血性脑损伤后OST保护作用时分子机制。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、空载体组(vehicle组)、单纯OST预处理组(osthole组)、OST与一氧化氮合酶非选择性阻断剂左旋硝基精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)共同给药组(osthole+L-NAME组)、OST与特异性PI3K阻断剂LY-294002共同给药组(osthole+LY294002组)、OST与PPARγ选择性阻断剂GW9662共同给药组(osthole+GW9662组)。再灌注24h后,通过TUNEL染色和Caspase3活性的检测验证OST的抗凋亡作用;用试剂盒检测缺血脑组织一氧化氮(nitric oxide,NO)以及硝基硌氨酸的含量;Western Blot检测三种一氧化氮合酶、TNF-α、arginase I、p-Akt、Akt、p-eNOS的蛋白表达;通过TTC染色和NDS分析各种阻断剂对OST作用的影响。结果:再灌注24h后,OST明显减少了缺血周围神经元的凋亡,降低了Caspase3的活性;增加了缺血区NO的含量但没有增加硝基硌氨酸的含量;减低了iNOS的表达增加了eNOS的表达,未改变nNOS的表达;L-NAME可完全阻断OST的保护作用;OST增加表达的eNOS可被GW9662通过增加TNF-α/arginase I的表达抑制;OST增加的eNOS磷酸化可被LY294002通过减少Akt的磷酸化来抑制。结论:OST可能是通过增加eNOS的表达,从而增加NO介导的抗凋亡作用达到神经保护作用。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
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【参考文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【二级引证文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 晁晓东;缺血再灌注脑损伤后蛇床子素的作用及机制研究[D];第四军医大学;2011年
2 陈蓉;蛇床子素抑制异丙肾上腺素诱导小鼠心肌纤维化及其机制研究[D];苏州大学;2012年
3 张露蓉;蛇床子素(osthole)对肝细胞肝癌的抑制作用及其机制研究[D];苏州大学;2013年
4 苑振亭;抗银屑病蛇床子素贴剂的设计与评价[D];沈阳药科大学;2003年
5 董晓华;蛇床子素对AD大鼠学习记忆的影响及机制研究[D];河北医科大学;2012年
6 唐正国;硫化氢延迟预处理对大鼠心肌的保护作用及其机制的研究[D];中南大学;2010年
7 周军;蛇床子素对帕金森病防治作用的基础研究[D];第四军医大学;2009年
8 董文鹏;白藜芦醇对肠缺血再灌注损伤的保护作用及研究机制[D];第四军医大学;2011年
9 张爽;蒺藜皂苷单体B对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[D];吉林大学;2011年
10 杨丽娟;雌激素对脑缺血再灌注损伤神经元的保护作用及机制探讨[D];中南大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 施昀;蛇床子素对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究[D];第四军医大学;2013年
2 高捷;蛇床子素水凝胶栓的研制[D];浙江工业大学;2011年
3 宋鹏;蛇床子素的抗骨质疏松作用及其分子机制研究[D];兰州理工大学;2013年
4 李栋;蛇床子素的神经保护作用研究[D];第四军医大学;2011年
5 刘畅;蛇床子素抗犬贾第虫的作用研究[D];吉林大学;2013年
6 张建军;蛇床子素对小鼠酒精性脂肪肝的治疗作用及其机制研究[D];苏州大学;2010年
7 沈寿国;蛇床子素抑制植物病原真菌机制的初步研究[D];南京农业大学;2004年
8 周峰;蛇床子素治疗肾性高血压诱导大鼠心肌肥厚及其机制研究[D];苏州大学;2012年
9 杜娆;蛇床子素对小鼠高脂性脂肪肝的治疗作用及其机制研究[D];苏州大学;2010年
10 林黎;中药独活及其单体蛇床子素抗血管生成的实验研究[D];南京中医药大学;2011年
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