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《第四军医大学》 2001年
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同种异体纯培养黑素细胞移植治疗白癜风

卢涛  
【摘要】: 白癜风是一种常见病,发病率大约1%-2%。主要表现为斑片状或 片状皮肤色素脱失变白。病变皮损区中黑素细胞(Melanocyte MC) 明显减少甚至缺失。往往给患者带来沉重的心理负担,影响工作、学 习、社交等正常活动。病因复杂。治疗比较困难。一般采取内用、外 用药相结合、中西医相结合、药物和理疗或其它疗法相结合,目的是 刺激皮损部位尚存的MC增殖、迁移或成熟。但是治疗效果常常不理 想。许多患者对药物不敏感,有些部位几乎无效。通过自体移植MC 治疗白癜风已经取得了较好的效果。但是这类方法要从自体正常部位 通过一些外科手段才能取得MC,而且数量有限,患者痛苦较大,费 用和风险较大。如果植入异体MC不被排斥,就会解决MC的来源问 题,弥补以上缺陷。基于下面的认识:1.白癜风患者免疫状况特殊; 2.MC一般不表达MHC-Ⅱ类抗原;3.体外纯培养MC的悬液中不含有 朗格罕氏细胞(Langhans cell LC);4.培养的角质形成细胞同种异体移 植获得成功,预计同种异体MC在白癜风患者体内很有可能存活。为 此,本研究进行了同种异体MC临床试验。在移植前不配型、移植后 不使用任何免疫抑制剂的情况下,观察同种异体MC移植后的临床效 果,检测异体MC的转归,探索异体MC移植的可行性。至今已经做 第四军医大学硕十学位论文 了11例临床试验。 首例患者,女,27岁,志愿配合同种异体MC移植。移植时处于 稳定期。用健康男青年(与患者无血缘关系)环切的包皮体外培养 MC,培养基不含有TPA。把第4代纯培养的MC用胰酶消化后,加 入含 20%小牛血清的生理盐水终止,离心洗涤后加入生理盐水,吹打 制成不同浓度的细胞悬液备用。用表皮分离机在患者腹部白斑处吸抱 4个。从疮内抽出大部分疮液,再从原针孔处分别注入不同浓度的MC 悬液。A、B处 MC数量为 2勺‘个,C、D处 MC数量分别为 1\‘ 个和广 10‘个。移植后连续观察色素恢复情况。 移植后患者无特殊不适。至30天时移植点发红,有轻微色素沉 着。45天后移植点色素加深,周围略发红。75天后4个移植点色素恢 复明显,颜色与邻近正常皮肤颜色基本匹配。恢复的色素在移植后 160 天仍然稳定。色素恢复区没有向周围扩散的迹象。D点移植细胞少, 色素恢复区面积较小。在C点用表皮分离机吸痞取疮皮,提取DNA, 检测 Y染色体特异性片段。结果为阳性。移植 180天后,在 A点做活 检,银氨黑素染色显示:MC周围的表皮细胞内明显可见黑素颗粒, 以基底层较多;毛囊部位没有黑素颗粒着色;在表皮基底层和棘层之 间有M C存在:真皮层有少量淋巴细胞浸润。 为了检验患者在首次移植后能否接受再次移植,160天后用吸疙 法在腹部原移植部位周围和右骼部白斑处做第二次移植,注入另一个 健康供体的第四代 MC悬液,每个疮注人 lxlo‘个 MC,并在右骼部 设置两个不加 MC的对照。200天后,腹部、右髓部接受第二次MC 移植的部位有小面积的色素恢复,对照部位无色素沉着。首次移植后 恢复的色素仍然稳定存在,没有向周围扩展。 在首例移植取得效果半年后,我们又重复做了10例移植,7女3 -3- 第四军医大学硕士学位论文 男,除一位男性处于活动期外,其他均处于稳定期。所用试剂和移植 方法基本同前。注入的异体MC是培养3——5代的MC,注入的细胞数 量为 lx10‘一lx10’个/M。3个月后 1位女性二位男性失访。随访到的 6位女性移植点色素较周围白斑区深,其中2例色素恢复明显,基本 接近周围正常皮肤。从3位女性色素恢复点取疮皮,提取DNA,从中 检测到Y染色体特异性片段,有1例非常明显。l例活动期患者在1 月后开始有色素恢复,3月后恢复色素明显,但是近6月时病情活动, 恢复的色素逐渐消失。 从临床结果看,首例患者接受异体MC移植的白斑区色素恢复比 较满意,基本接近于周围正常皮肤。移植360天后恢复的色素仍稳定 存在,有的移植点达到痊愈。重复的7例患者移植后也有一定效果,2 例明显。异体MC可以使白缀风皮损恢复部分颜色,效果确切。在首 例患者接受的第二次移植中,异体*C来自另外一个供体。结果不但 没有出现明显的排斥反应或变态反应,而且半年后有小面积的色素恢 复。启示白癫风患者有可能接受多次异体细胞移植,甚至是来自于不 同供体的细胞。通过组织病理学检查,色素恢复区有存活的MC,并 能分泌黑素颗粒。 存活的MC我们推测是移植的异体MC。首先,首例女性患者移 植 160天后疮皮 DNA经 PCR检查其中含有 Y染色体特异性片段;三 例女性患者在移植3月后也重复到这个结果。而只有来自男性供体的 MC中才有Y染色体特异性片段。其次,首例患者第二次MC移植半 年后,腹部和右骸部移植MC的部位有小面积的色素恢复,未注射 MC的对照部位无色素恢复。说明患者皮损区色素恢复不是炎症刺激 的结果,而是异体MC存活并发挥作用的结果。第三,如果说首例患 ?
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R758.41

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