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《第四军医大学》 2001年
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脑缺血再灌注vWF及laminin在微血管的表达与炎症介质作用的实验研究

狄政莉  
【摘要】: 脑缺血后的再灌注往往引起较缺血本身更为严重的损害。这是因为溶栓 治疗血液循环再通后,大量中性粒细胞聚集于缺血区,同时粘附分子、细胞 因子等炎性因子上调,导致微血管功能紊乱,破坏了血管结构的完整性,加 重了脑血流供应障碍,同时白细胞穿过血脑屏障向脑实质浸润,进一步损害 正常脑神经功能。此过程中由于中性粒细胞和氧的重新供应可产生大量自由 基,进一步造成脑损害。所以研究脑缺血再灌注过程中炎症介质的表达变化 与再灌注损伤的关系尤为重要。本实验采用三血管阻断法,通过大鼠全脑缺 血再灌模型,检测再灌注后不同时间点血管完整性标记成分的改变及此过程 中一些重要的粘附分子和细胞因子的表达变化,试图在分子水平阐明脑缺血 再灌注脑损伤的炎性机理,为治疗提供依据和方法。 本实验研究将健康雄性SD大鼠随机分为缺血再灌注组和假手术组,采 用三血管阻塞建立大鼠全脑缺血再灌注模型。用免疫组化SABC法检测SD 大鼠在全脑缺血30min后再灌注1h、3h、6h、12h、24h、48h、72h时FⅧ 相关抗原和层粘蛋白(laminin)的表达,以标记微血管在脑缺血再灌注过程 第@零废大学项十学幢论支 一 中损伤与修复变化;同时用兔疫组化SP法检测各个时间点IL-lp、h-6的 表达,用原位杂交法测定不同鹃注时间点P亿electin、IL8tnRNA的表达 水平,以观察脑缺血聊注后微血管形态结构以及这些炎症因子在微血管内 皮细胞的表达变化规律。实验结果如下: 1微血管损伤与修复实验结果:门汀ffi相撕原主要在微血管内皮细胞 表面表达,在缺血髓注lh开始下降四<0刀5,脑缺血再灌注组与假手术组 相比),到2个48h达最低值①<O·01),72h时表达又开始恢复;脑缺血再 灌注组各个时间点的差异具有显著的统计学意义(P<0.01h 假手术组各 个时间点相比差异无统计学意义(P>0.05)。(2)ltalnin主要在微血管基膜 表达,在缺血再灌注lh开始下降o<0.05脑缺血融注组与假手术组相比), 到2个48h时达最低值o<0.01),72h时表达又开始恢复;脑缺血再灌注 组各个时间点的差异具有显著的统计学意义T<口.O二);假手术组表达均 呈强阳性,各个时间点相比差异无统计学意义(P>刀5卜 2 IL。18、n七免疫组化检测:()脑缺血再灌注 lh n。16时表达开 始上升(*<0.05,脑缺血再灌注组与假手术组相比),6。12卜时达峰值(P<O. 01)后开始下降,各个时间点相比差异具有显著的统计学意义;阳性表达主要 在微血管内皮细胞。门)脑缺血鹃注 3h时 n乃表达开始上调,2448h 达峰值,72h仍有表达。 3 n-8、P-selectin tnRNA.原位杂交实验:()P-selectrin mRNA的表达: 假手术组未见 P。selectrin A表达,缺血再灌注后 lh出现表达,24h达表 达高峰,48h开始下降,各个时间点相比差异具有显著的统计学意义(P<0. of)。只有微血管内皮细胞出现表达。(2)n-SInRNA的表达:n-stnRNA 假手术组见IL{ 少量表达,脑缺血再灌注3h,表达上调(与假手术 组相比P<0刀5),24h达高峰后开始下降,72h表达仍高于假手术组(与假手 术组相比P功刀引。在微血管内皮细胞均有表达。 综上所述,研究结论如下:()脑缺血再灌注后nl6表达及其高峰出 现较早,它的表达上调刺激了粘附分子、ILE和IL6的表达,在炎症反应过 程中起了始动作用。门)之后,IL七可趋化中性粒细胞和内皮细胞表达的粘 附分子发生作用并浸入组织,引起再灌注后的低灌注,加重脑损害。0) 、6. 一 p七eleCtill表达介导白细胞与内皮细胞粘附,并在内皮细胞上滚动,在其它粘 附分子的协助下穿过血脑屏障向脑实质浸润。料)微血管及其血脑屏障的损 伤导致了内皮细胞表达 Fib相关抗原及微血管表达 landnin下调,7儿后才开 始修复。6)IL七表达出现较晚,可能它参与了再灌注损伤后的修复作用。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R743

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