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《第四军医大学》 2001年
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胃癌SGC7901细胞多药耐药相关新蛋白和基因的筛选及鉴定

王新  
【摘要】: 肿瘤的多药耐药现象是肿瘤化疗的主要障碍。目前发现的肿瘤多药耐药机制 主要涉及Pgp、MRP、LRP、BCRP、GSH/GST、PKC、TopoⅡ、DNA修复、多种凋亡相 关基因和肿瘤细胞生活的内外环境(如pH、缺氧、温度)变化。但有关胃癌MDR 的机制还所知甚少,初步的研究显示胃癌MDR有其特殊性,现有的MDR机制还不能 圆满解释和逆转胃癌的多药耐药性。 目的 建立和优化蛋白质组学分析中的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,寻找胃 癌细胞耐药相关蛋白质;分离、克隆胃癌细胞中耐药相关的差异表达基因,阐明胃 癌细胞耐药新的分子机制。 方法 建立和优化蛋白质组学分析中的双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 (O'Farrell系统和IPG-等电聚焦双向电泳系统),并用其比较胃癌SGC7901细胞 和长春新硷耐药细胞SGC7901/VCR蛋白质组的差异,凝胶银染法显示其蛋白质的差 异表达,进而用质谱测序鉴定这些差异表达蛋白;应用改进的mRNA差异显示技术 分析这两种细胞中显著差异表达的cDNA,经反向Northern分析、差异基因序列测 定和Northern Blot分析确证差异表达基因。进一步用RACE和MTE Array分析 差异表达基因。 结果 建立并优化了蛋白组学分析中的双向电泳技术—O'Farrell双向电泳 系统和IPG-等电聚焦双向电泳系统,应用此双向电泳技术比较胃癌SGC7901细胞 和其长春新硷耐药亚系SGC7901/VCR细胞蛋白质组的差异。结果发现30种明显差 异表达的蛋白质,并初步确定了其等电点和分子量。其中3个蛋白点表达量很高但 第四军医大学博士学位论文 一 在非耐药细胞图谱中未出现;6个蛋白点丰度明显上调;19个蛋白点丰度明显下调; 2个蛋白点在耐药细胞图谱中未出现但在非耐药细胞中高表达。把差异蛋白转印到 PVDF $上,对其中一个差异蛋白质进行了测序鉴定分析,同源性检索显示为一未 知的蛋白质。应用mRNA差异异示技术从胃癌SGC7901和SGC7901/VCR细胞中筛选 并鉴定了20个在SGC7901/VCR细胞中特异或高表达的基因,其中7个基因片段与 己知基因高度同源,部分己知基因与耐药相关。另外13个CDNA片段为未知基因, 对其中的毛个cDNA片段进行了Northern分析,结果再次表明它们在VCR细胞中特 异或高表达。它们的 mRNA全长分别为 GRP-2。1.gkb:GRP-28,1、6kb:GRP19,2.okb: GRP32,1.7kb。对 GRP-2片段用 3 RACE法扩增其全长达 1.Zkb,仍为一新的基因。 MTE Arraa杂交分析显示 GRP-2主要在正常肺组织内表达,其它组织细胞中弱表达。 GRP-2很可能是在胃癌VCR耐药机制中很重要的基因。 结论 在胃癌SGC7901/VCR发现了30种明显差异的蛋白质,其中3种蛋白质在VCR 耐药细胞中特异高表达。同时发现20种基因在胃癌SGC7901/VCR细胞中高表达,其 中 7个基因片段与已知基因高度同源,部分已知与耐药相关。13个 CDNA片段为未知 基因,其中GRP-2在耐药细胞中特异高表达。这些差异表达的蛋白质和基因分子可 能与胃癌细胞长春新碱耐药机制相关,为进一步研究胃癌MDR机制奠定了物质基础。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R735.2

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【同被引文献】
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