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《第四军医大学》 2001年
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含孔磷酸钙陶瓷为支架基因转染自体细胞成骨能力研究

陈希哲  
【摘要】: 组织工程是应用细胞生物学和工程学的原理,对病损组织结构和功能的修 复与重建进行研究开发的一门新兴学科。其是继细胞生物学和分子生物学之 后,生命科学发展史上的又一里程碑,标志着人类将走出单纯器官移植领域, 步入组织、器官再造的新时代。 骨是最早在实验室中获得组织工程化的组织之一。组织工程骨修复亟需研 究的内容包括:①能分化为成骨细胞的多能干细胞;②介导多能干细胞游走、 分化、增殖的促生长和分化因子;③可吸收的细胞外基质或称支架以支持干细 胞在骨缺损区的游走及附着;④在整个新骨形成过程中血管网的构成。基于以 上要求,本实验进行了四部分研究: 1 按目前学术界普遍认可的方法进行了大鼠骨髓基质细胞的诱导培养,大鼠 骨髓基质干细胞在含有地塞米松、左旋抗坏血酸、β—磷酸甘油钠等的培养基 中原代培养2周已具明显成骨细胞表型;利用梯密度离心法分离并培养大鼠骨 髓内皮细胞,证实了大鼠骨髓内皮细胞具有W—P小体以及其它内皮细胞共有 的特征。这两种细胞都属有限细胞系,可传代、冻存及复苏。此部分结果为后 续实验打下了基础。 2 进行噬菌粒载体pBK-BMP_2的扩增、提纯及酶切鉴定,并利用脂质体将此穿 梭质粒转染大鼠骨髓基质干细胞。通过免疫组化、原位杂交及Western Blot 印迹杂交检测,从分子水平和蛋白质水平直接或间接地证实经筛选后的细胞克 隆能表达、分泌外源性的BMP_2。 3 应用纤连蛋白对含孔磷酸钙陶瓷进行表面修饰并证实其有利于成骨细胞的 贴附和成骨表型;建立封闭群动物SD大鼠骨组织工程模型并证实其对小型试 材骨修复的研究结果更接近临床;将rhBMP_2转染的自体细胞复合同体骨髓基质 干细胞并种植于含孔磷酸钙陶瓷上,回植原动物皮下或肌肉内均表现明显的异 位成骨能力;这种基因转染自体细胞—陶瓷复合体用于颅骨极量骨缺损的修复 可取得与自体成骨细胞移植相同的效果,间接说明了转染细胞能在体表达BMP_2 并促使未转染的基质干细胞分化为成骨细胞。 4 通过颈总动脉墨汁灌注及透射电镜观察,系统了解并分析自体细胞—陶瓷 陈希哲 下四军医大学博士学位论又 一Z一 要合汁颅g极量骨缺殒修复过程中血管生成与骨形成及陶瓷降解Z问的X系, 1实山向兰ISOtlS提供的含孔磷酸钙陶瓷作为骨组织工程细胞支架有利于血育 和骨的丙十,随时问推移陶瓷本导可以降解;种植的成骨细胞与新上的血管内 皮别胞关系密切,推测其卜必有某些问于引发的信号转导级联效口。 实验设计及技术路线如下图: — — 大鼠左恻殴、温骨骨钮 1 Me***--H_7w~?ri 一J~\ F--s------- WWWk’G一4%:PJ LHerylerx ’tyxtew—“。二{ilZJZtr- 成骨纽胞诱导培养 刀卫sC。rhB卜IP。基因转染 \\/ — ———@p—— 一 细胞一囚瓷 体构鱼 大气颅骨极量骨 修复/、 异位骨形成 回 憾
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R318.08

【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 葛成;SD大鼠成骨细胞中BMP与PKA/PKC信号途径的交互作用[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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7 柏涛;;骨髓间充质干细胞诱导表达软骨细胞表型的研究进展[A];玉溪市第三届二次骨科学术研讨会论文汇编[C];2009年
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10 杨彬;兰喜;殷相平;李学瑞;李宝玉;方玉萍;柳纪省;;口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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2 黄旋平;hBMP-2基因修饰自体BMSCs移植促进兔下颌骨牵张成骨新骨形成的实验研究[D];广西医科大学;2011年
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6 杨庆秋;云南白药及主要成分骨形成作用的实验研究[D];昆明医学院;2011年
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9 朱伟;摄食抑制因子NUCB2/Nesfatin-1对机体胰岛素敏感性的影响[D];重庆医科大学;2011年
10 孙德毅;人骨髓间充质干细胞与骨诱导活性材料构建组织工程骨的实验研究[D];中南大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 盛英俊;不同持续时间的周期性压力对构建组织工程软骨的影响[D];南京医科大学;2009年
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6 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
7 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
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9 肖丰伟;骨髓间充质干细胞联合异体骨治疗骨缺损的实验研究[D];泰山医学院;2010年
10 刘莉;HSV-2 gD模拟抗原表位、IL-18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察[D];泰山医学院;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前3条
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2 葛成,杨连甲,刘宝林,赵丽君;大鼠成骨细胞中蛋白激酶A的表达及信号作用[J];临床口腔医学杂志;2002年06期
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 曹罡;可吸收性珊瑚羟基磷灰石为载体构建组织工程骨的实验研究[D];第四军医大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 马晓莉;庆大霉素损伤后前庭上皮细胞增殖调亡信号转导机制的研究[D];第四军医大学;2001年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
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2 魏庆言,樊俊华,陈东宝,李绍章,胡宏宇,华文君,王翀,扈荣良;猪微注射基因胚胎的自体移植[J];生物工程进展;1994年02期
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9 陈希哲,杨连甲,付崇建,张庆诗;含孔磷酸钙陶瓷复合自体成骨细胞骨组织工程大鼠模型的构建[J];中华实验外科杂志;2002年05期
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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3 李黔鄂;;简易自体血液回收装置在手术中的应用[A];全国手术室护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2004年
4 李韶山;;自体卵巢异位移植1例[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
5 张其清;刘玲蓉;王涛;;骨形成蛋白诱导成骨能力的实验研究[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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3 李虔桢;曲匹地尔对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响[D];福建医科大学;2007年
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8 刘大朋;自体骨膜碎片混合自体骨移植修复骨缺损的实验研究[D];河北医科大学;2002年
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