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《第四军医大学》 2001年
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IL-1Ra对培养RPE炎前因子表达和实验性PVR的影响

宋宗明  
【摘要】: 研究背景 增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreo retinopathy,PVR)可被 看成一种特殊的创伤愈合过程。视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)分泌的细胞因子在细胞移行、增殖、分泌胶原和PVR膜形成等 过程起重要的作用。临床研究发现IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎症早期的 几种细胞因子在PVR发生的各个时期均有不同程度的高表达,与PVR的发生明 显相关。尽管现代玻璃体手术使视网膜脱离的复位率有很大提高,但术后视网 膜表面和玻璃体腔中的细胞增殖常常导致手术失败。研究证实地塞米松和道诺 霉素等药物可以降低PVR的发生率,可是其固有的缺点使它在临床应用上受到 一定限制。因此,通过寻找安全、高效的药物以救治增生性玻璃体视网膜病变 是眼科医生的任务。研究发现白介素1受体拮抗剂(IL-1Ra)是IL-1的天然抑制 剂,可与IL-1受体结合而不诱发细胞内信号传导,从而阻断IL-1的效应,增 加体内IL-1Ra的含量可以抑制IL-1所介导的生物学效应。二者之间的一定比 例对维持局部内环境稳定起重要作用。 目的 本研究以RPE为实验材料,利用ELISA、免疫组化和原位杂交等方法观察 IL-1Ra、IL-6反义核酸、地塞米松和道诺霉素等从不同方向对炎前因子 (proinflammatory factor)的阻断效应,观察抑制剂的作用及其机理。 材料与方法 1.体外实验:①在培养RPE细胞中加入IL-1α和LPS等刺激物,ELISA 第四军医人学博十学位论文 法检测RPE细胞培养上清IL-lp、IL-6、IL-8和T川’-u 等细Iki囚于分泌:分 别使用兔疫组化和原位杂交法观察细胞内几d、1卜6、1卜8和刁”M‘-U 蛋臼 质和 ml{NA的表达。②观察几-II{a等抑制剂对炎性因于介导的!wI表达炎汕细 胞因子蛋白质和 mRNA的影响。 2.体内实验 将W巳注入兔眼(48只眼)玻璃体腔建立1‘VIZ模型,同时注 入几-IRa等抑制剂,通过直接检眼镜、B型超声和组织学检查观察!’V!{的形成, 计算各组卜VR的发生率。 结果 1.体外培养RPE在基础状态下产生少量的I!。-6、IL-8和’1’M’-。,-IZ要 存在于细胞内。在 LPS和 IL-IQ的刺激下,培养上消中和绷胞内 L-6、仕-8 和‘I’NF-Q的含量于培养后的 Zh—4h明显增加,于6h一sh达,E叩¥。sh-比11以后 培养上清和细胞内炎前因子的表达趋于平稳。l[。-Ic与uS联合刺激刁“以*显 增加 TNI’-Q的表达,在联合刺激后 sh培养上清中*。-6、I!.-H和”l”NI’-。分别达 到 3500、3000和 4510pg.ml’.10”cells。 2.兔疫组化法检测基础状态下细胞内炎前因于蛋白质表达儿乎不着色。 经过几-la或者LPS刺激sh后 RPE细胞内 IL-6、IL-8和‘I’NI’-u蛋白质的表达 呈现为胞浆中浓淡不一的棕黄色着色,IL-IQ联合计S作用后 I{PE染色较深。 但是IL-lp不着色。 3.在炎症介质介导下,RPE细胞几干、ILE和 TNF-u ml{NA表达表现为 胞浆中蓝色着色,而未经刺激的细胞则只有很少的细胞呈现淡蓝色。 4.ELISA显示在几-in介导下,IL-IRa组、地塞米松组$[I道诺霉素组培 养11f#I-I。IL-6、IL-8和”l”N!‘-口的剂量比对照组低,IL-6 )R义核酸组」:j肖中 11。-6 的剂量比对照组低,联合用药组上清中几-6、IL-8和TrNF-Q 比其他各组均低, 方差分析显示各组之间具有显著性差异。 5.原位杂交结果表明几-IRa组和道诺霉素组 IL-6、11。-8和‘l’NI‘-。ml(N 的表达少,IL-6反义核酸组仅仅只有几-6mRNA染色比对照组淡,’ti h[。ISA— 致。地塞米松组 IL-6、IL-8和 TNI‘-a mRNA染色与对照组没有明显差异。 6.体内实验显示第4周末对照组100%的眼发生视网膜脱离,IL-II{a组 有5只眼(62.5%)发生视网膜脱离,组织学检查可见牵拉性视网膜脱禹,脱离的 4 第四军医大学博十学位论文 视网膜下可见渗出液,未见细胞成分。玻璃体腔内增殖膜的形成,增殖膜与视 网膜相连,PVR膜细胞浆内无色素颗粒;地塞米松组有4只眼(50%)发生视网膜 脱离,在脱离的程度上均比对照组轻:道诺霉素组和IL-6反义核酸组分别有5 只(62.5%)和 6只眼(75%)发生视网膜脱离,而联合用药组则只有 2只眼(25%) 发生牵拉性视网膜脱离。联合用药组比所有其它组的视网膜玻璃体病变轻,视 网膜脱离的面积也较小。 结论 1在几* a或者 LPS的刺激下,体外培养的 RPE可以表达一定的]I』-6、l;.-8
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R770.2

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