肝靶向十六酸拉米夫定酯固体脂质纳米粒的实验研究

【摘要】： 本实验制备了十六酸拉米夫定酯固体脂质纳米粒(LAP-SLN)和半乳糖苷修饰的十六酸拉米夫定酯固体脂质纳米粒(LAP-GSLN)，研究二者在小鼠体内的分布，比较其肝靶向作用。 一、十六酸拉米夫定酯和半乳糖苷的合成和鉴定 拉米夫定(Lamivudine,LA)、十六酸和二环己基碳二亚胺在4-二甲氨基吡啶催化下反应生成十六酸拉米夫定酯(LAP)；表面活性剂MOA经硅胶柱层析分离得到了HO-(CH_2CH_2O)_n-C_(12)H_(25)(n=0，1，2，3)，经糖苷化、脱保护两步反应制备相应的半乳糖苷GDE，~1HNMR证明其结构正确： 二、LAP稳定性和脂溶性研究 1、LAP在不同pH缓冲液、小鼠血清和不同组织匀浆中的稳定性精密吸取LAP溶液，分别加到在37℃水浴预热的不同pH缓冲液、 刃四军医大学硕士研纪生学位论文 血清及肝、肾、肺、脾匀浆稀释液中，于不同时间点取样，HPLC法测 定残留LAP浓度。水解为表观一级反应。pH对LAP稳定性影响较大。 LAP在弱酸性溶液中较稳定，在弱碱性溶液中水解较快。血清和组织 匀浆中的酶可显著地加速前体药物的水解，特别是在肝匀浆中。 二、LAP和LA分配系数的测定 精密量取 LAP的正辛醇溶液 （3 n g·mL‘）smL，加入用正辛 醇饱和过的磷酸盐缓冲液（PH68）sm混合 smin，静置，HPLC法测定 两相中LAP浓度，计算LAP分配系数。同法测定LA的分配系数。将 LA与十六酸反应生成 LAP后，分配系数由 0＊ 1增大到 521．5，说明其 脂溶性得到明显提高。 5、LAP．SLN和LAP－GSLN的制备及性质考察 二、LAPSLN和LAP－GSLN的制备 通过均匀设计实验忧化处方。LApGSLN处方：LAp 11．3ffig、大 豆磷脂 95mg、GDE sing。LAP－SLN的处万为：LAP 11．3mg、大显磷 脂 100mg。 考察磷酸盐缓冲液、蒸馏水、6O／O甘露醇水溶液作分散介质的效果。 6％甘露醇水溶液作分散介质的SLN最稳定c 制备工艺：精密称取处方量物质于100mL圆底烧瓶中，加入15mL 氯仿溶解。旋转蒸发除去氯仿，在烧瓶壁上形成一层薄膜。加入6％甘 露醇水溶液 10mL冰浴超声两次，每次 lmin．0．45 n m微米微孔滤膜过 滤，分装于安葫中。 2、LAP－SLN和LAP－GSLN的形态学研究 LAP－SLN为略带淡蓝色的胶体，LAP－GSLN为乳白色的胶体。电 镜下可见许多圆形或椭圆形的球粒。LAPSLN粒径280．8上98二urn， 第四军匠大学贝士研丈生学位诀文 一 LAP－GSLN粒径257．4上92．3urn。两者粒径比较均匀，无明显差别。 3、LAP－SLN和LAP－GSLN的载药量和包封率的测定 HPLC法测定透析前后 SLN胶体溶液中 LAP浓度 C。和 C分 包封率 ＝＝ C ＆／C。XI 00％。 载药量 ＝＝包封的 LAP重量／纳米粒总重 XI 00％。 LAP－SLN载药量为9石3％，包封率为9769％；LAP－GSLN载药 量为 9．11％，包封率为 95．82％。两者载药量和包封率比较，无明显差 别。 四、LAP－SLN和LAP－GSLN在小鼠体内的分布研究 1、RP－HPLC分析LA生物样品浓度方法的建立和认证 取0．lmL血清或组织匀浆，加入0．smL甲醇，漩涡混合30s，150009 离心 10min，上清液直接进样。选用 Kromasil C18（150nunX4石mm， 5 u m）为分析柱，pH6．8磷酸盐缓冲液－甲醇p切为流动相，流速为 lmL·min－’，检测波长为270urn。各工作曲线线性范围为0二5－50 u g·min－‘，最低 检测浓度为 60ng·min’＊／N二3）。各样品平均绝对 回收率＞88％，方法口收率在9工100％之间，日内日间精密度的肪D 均小于 100／o。此方法经济、可靠、简单、快这，可用于动物体内分布 研究。 2、LAP－SLN和LAP－GSLN在小鼠体内的分布研究 昆明种小鼠 90只，随机分为 18组，每组 5只。其中 6组为 LAP－ SLN组，6组为LAPGSLN组，其余为LA－S。l组。每只小鼠均于禁食 12h后按每千克 72mg LA（LAPELN组和 LAPGSLN组相当于 7．Zing LA）尾静脉注射给药。分别于给药后的 5，3 omin和 1，2，4，sh处 理一组。小鼠眼眶取血，处死后取出肝脏（给药后30min时小鼠处死