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《第四军医大学》 2002年
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腺病毒介导脑源性神经营养因子(BDNF)基因转染促进大鼠视神经损伤的修复

侯旭  
【摘要】: 目的 视神经损伤是常见的眼外伤类型,伤后视力损失严重,临床缺乏有效的治疗手段。视网膜神经节细胞(RGC)的程序性死亡被认为是视神经损伤后视功能损失的主要原因。脑源性神经营养因子(BDNF)在离体及活体实验中均能促进神经元存活及阻止程序性死亡过程。我们使用含BDNF cDNA的重组腺病毒注入大鼠视神经损伤模型眼中,转染RGC及神经胶质等视网膜细胞,观察BDNF的表达和促进视神经挫伤后RGC细胞及轴突功能的修复。探讨治疗视神经损伤的新途径。 方法 (1)利用含β-gal报告基因的腺病毒以不同滴度经眼表、前房、玻璃体、球周等途径微量注射入SD大鼠眼内,观察基因表达的部位、效率以及有无组织病理改变。 (2)将含BDNF基因的腺病毒经玻璃体途径注射入大鼠眼内,用荧光免疫组织化学的方法观察基因的表达;用ELISA的方法定量分析视神经夹伤+生理盐水注射组、假手术+BDNF玻璃体注射组、夹伤+BDNF玻璃体注射组视网膜组织不同时间点的表达水平。 (3)用视觉电生理方法观察正常大鼠F-VEP P1波潜伏期、峰潜时,大鼠视神经夹伤后经玻璃体注射BDNF重组腺病毒,于伤后2小时和1,2,3,4周重复测值。 结果 (1)各病毒滴度组均可有效地转染外源基因,且未观察到细胞病理性改变。玻璃体腔内注射的大鼠眼球组织包括角膜、虹膜、睫状体、视网膜均有β-半乳糖苷酶基因表达,前房注射组角膜、虹膜、睫状体有表达,表面点药组仅有角膜上皮细胞表达,球旁注射组眼外肌有表达。注射3d后开始出现β-半乳糖苷酶基因阳性表达,持续达4wk以上。 (2)荧光免疫组织化学方法观察到BDNF基因的表达情况与β-gal报告基因相类似;ELISA的方法定量分析两个BDNF转染组在各时间点表达明显高于未转染组,视神经夹伤+生理盐水注射组在3d和1wk 第四军匠大学硕士学位论文 时高于正常组。 (3)本实验系统测得的正常大鼠 F-VEP中川 波振幅为 15.sl士 3.67卜V,峰潜时为86.20士4.30ms…一20)。视神经不全损伤后急性期PI 波振幅降低,峰潜时延长。BDNF腺病毒组 PI波较对照组波幅高,峰 潜时短,且在13Wbs具有显著性差异。 结论 腺病毒能有效、稳定地转染外源基因到活体眼组织的角膜、 虹膜、睫状体、视网膜等。BDNF基因转染后能有效增加视网膜组织 的BDNF表达。腺病毒介导BDNF基因转染对大鼠视神经损伤后早期 功能的恢复有促进作用。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R779.1

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