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《第四军医大学》 2002年
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有关神经干细胞移植的若干研究

张琪  
【摘要】: NSCs可自我复制并具有多种分化潜能,被广泛应用于中枢神经系统损伤及退行性疾病等的细胞替代治疗研究中。NSCs的移植效果取决于移植后细胞的存活情况,及其能否正确整合迁移等许多因素。 鉴于此,为寻求各种方法提高移植效率,改善外源NSCs存活及分化,进而促进其实现功能性替代,为临床NSCs治疗提供理论基础,本实验进行了以下三部分的研究: 实验第一部分研究了以lacZ作为移植细胞标志基因时X-gal染色的影响因素,并得出排除非特异背景的优化条件。利用此条件,在体比较了原代NSCs及永尘化神经干细胞系C17.2相同条件下移植后的异同,即将两种细胞注射于新生小鼠侧脑室,分别于1W,6W后观察比较它们的存活、整合及迁移情况,结果如下:1W时,原代NSCs存活的细胞数远大于C17.2(P<0.01),且主要分布于脑室系统内,而C17.2则几乎全部都向脑室壁发生了整合,由于X-gal染色可显示C17.2整个细胞形态,观察计数得此时C17.2处于分裂相的细胞高达69.4±12.2%。6W后,C17.2的细胞总数大大增加,而原代NSCs则略有下降,两者细胞总数无明显差别,绝大部分原代NSCs也向脑实质发生了整合,但其迁移距离小于C17.2(P< 第 四 军 医 大 学 硕 士 学 位 论 文 一 0刀5)这时C 17.2处于分裂相的细胞降至9.4士 1.2%,而有突起的细胞可 达89.8士 13.4%。这些结果显示,CI7.2与原代NSCS相比,不易在脑脊液 中存活,但整合入脑实质后,它们则更易增殖并向远处迁移。移植后早 . 期,C17.2处于旺盛的分裂,到晚期则显示出可能发生了一定分化。 实验第二部分探索肌昔对神经干细胞生长分化的影响及对神经干细 胞损伤的保护作用。结果显示在0~800 V M时,肌昔可明显促进CI7二的 增殖,在50~800 v M,可明显促进突起的生长,100 U M的肌百可使C厂二 p-tubulin Ill的表达上调,对GFAP及MAG的表达则无影响。值得注意的 是,肌昔的这些作用在其浓度到达 1000 V M时被逆转。在这部分实验中, 我们还探讨了肌昔对CI7.2的直接保护作用,通过MTT值的测定,光镜及 电镜的形态观察,Hoechst33342染色后核形的观察及DNA凝胶电泳结果, 发现肌昔可对HZOZ诱导的C门.2凋亡起到直接的保护作用,且存在明显的 密度依赖性。 实验的最后部分初步探索了体外OECS对C 17.2增殖、分化及生长方 式的影响。结果显示两种细胞共培养中在增殖上有正协同作用(P< 0刀5);OECS对口.2的分化没有影响:与3T3相比,OECS对*.2的生长 显示出更大的允许性,它们可紧密接触重叠生长,并且这时C门.2往往伸 出多根突起或长突起,少数情况下,两者的突起可并行延仰,可能是这 些旧.2细胞膜上有较多粘附分于如LI等表达的缘故。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q813

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