收藏本站
《第四军医大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

反义寡脱氧核苷酸抑制肝癌细胞VEGF的表达及肝癌细胞中VEGF的自分泌机制

王宏光  
【摘要】: 目前肝细胞癌的各种治疗方法主要是针对癌细胞本身进行的,由于肝癌细胞的遗传性能不稳定,早期发现困难,手术切除率低,且易对化疗和放疗产生治疗耐受,因而寻找有效的治疗途径是提高肝癌生存率的关键。以新生血管为靶点对肿瘤进行生物治疗已成为近几年新的研究热点,与传统治疗手段相比,其具有广谱、放大的抗肿瘤作用,且毒副作用小,不易产生耐药性。此外,随着现代分子生物学技术的发展,反义技术越来越受到人们的重视,尤其是反义寡脱氧核苷酸(ASODN)有望成为率先应用于临床的基因治疗药物,预示着一个肿瘤治疗新时代的到来。 肿瘤血管生成受多种调控因子的调节,其中,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对血管内皮细胞的增殖、水解基膜、迁移和血管构建的调控作用最强,且特异性高。其在多种肿瘤中的过表达促进了肿瘤新生血管的形成,从而维持肿瘤细胞的旺盛代谢,并使肿瘤细胞得以进一步扩散和转移。因此,VEGF及其受体是抗血管生成治疗肿瘤的理想靶位。人们一直认为,VEGF是以旁分泌的方式调节肿瘤的血管形成,即肿瘤细胞分泌的VEGF选择性作用于肿瘤血管内皮细胞上的特异性VEGF受体(Flt-1 第四军医大学博士学位论文 中文扬要 和 KDR),并通过酪氨酸激酶介导的信号转导,调控内皮细胞分化和血管形 成。但近年研究发现,多种肿瘤细胞自身也有VEGF受体的表达,而且针对 VEGF及其受体的干预措施可以改变这些肿瘤细胞的体外增殖活性和其他生 物学特性。这说明肿瘤中很可能存在VEGF的自分泌机制。研究表明,人肝 细胞肝癌中有VEGF的表达,且VEGF的表达与肝癌的生长和转移密切相关。 但对于肝癌中VEGF的自分泌机制尚未见报道。 本研究以多种肝细胞肝癌细胞系为体外模型,以人VEGF 11mNA序列 5’ 翻译起始位点第5Al74位碱基为反义靶点,人工合成ZI聚ASODN,并以其 正义链侣ODM为对照。通过激光共聚焦显微镜观察ASODN在肝癌细胞中的 分布‘惰况,定量分析其作用的浓度及时间特点,并在InRNA、蛋白及蛋白分 泌水平检测ASODN对肝癌细胞VEGF表达的抑制作用。为探讨肝癌细胞中 VEGF的自分泌机制,采用RTFCR、免疫细胞化学染色方法检测了多种肝 细胞肝癌细胞系中VEGF受体的表达。并以MTh法、形态学观察及流式细 胞仪分析等手段研究了ASODN对肝癌细胞体外增殖活性、形态结构、细胞 周期以及膜表面VEGF受体表达的影响。主要实验结果如下: l.VEGF ASODN在 S删CJ72细胞中的浓度随作用时间的延长而逐渐升 高,12h后即能达到较高浓度,48 h达到最高峰,以后则逐渐降低,但作用 可持续 72 h以上;细胞内 ASODN的含量随作用浓度升高而增加,但当达到 一定的作用浓度后,增加的并不明显,5 u mol/L是 ASODN较为理想的作用 浓度。VEGF ASO洲在S删CJ 细胞分布部位主要位于胞浆,胞核也 有少量分布。其中分裂期的细胞对ASODN的摄入能力远大于非分裂期细胞, 且ASODN在分裂期细胞内主要分布在胞核。 2.RT-PCR和免疫细胞化学染色显示,SMMC-772细胞有 VEGF InRNA和 蛋白的表达:VE*F*S*DN可抑制S MMMM*-7721细胞***F的表达。 3.完成牛主动脉内皮细胞田AEC)的体外培养鉴定,并对其生物学特性进行 观测。 — —3 一 第四军医大学博士学位论文 中文拘要 4.SMMC772细胞培养上清能刺激 BAEC的增殖,且随 SMMC-772接种 数目的增加而增大,当细胞数为 1刀 XIO‘时生物活性最高,过高的细胞数反 而抑制 BAEC的增殖。VEGF ASODN能抑制 SMMC-772细胞培养上清对 BAEC增殖的刺激作用,且抑制率与剂量呈线性关系,剂量越大,抑制作用 越强:so*N则基本上没有抑制作用,且*SO*N对SAEC增殖也无直接作 用。 5.体夕培养的SMMC-7721细胞有*-1的弱表达:而HHCC和HCpGZ 细 胞表达KDR。 6.不同浓度 VEGF ASODN对 HHCC细胞增殖有抑制作用,且抑制作用随 ASODN浓度的增高而增强,SODN则对HHCC细胞增殖无明显影响:VEGF ASODN对 SMMCJ72和 L929细胞增殖无明显影响。 7.HHCC细胞经 VEGF ASODN作用后,出现形态学变化。表现为细胞排 列较稀疏,核分裂相减少,细胞异形性降低,细胞表面的微绒毛减少,线粒 体肿胀、空泡形成,染色质边集等。SODN及对照组HHCC细胞形态学无明 显变化:各处理组S MMMMO7刀1细胞形态学无明显变化。 8.流式细胞仪分析 VEGF ASODN作用后细胞周期变化显示,HHCC细胞 S 期比例下降,Q期比例有所上升,且出现一小的凋亡前期峰:而各处理组 SMMC-772细胞周期无明显变化。 9.流式细胞仪检测显示,SMMC-7721细胞膜表面有N-l 的表达,其中 ASODN、SODN及对照组的阳性百分率分别为20%、21.7%和19了%,3组 间无明显差别。HHCC细胞膜表面有KDR的表达,ASODN、SODN及对照 组的阳性百分率分别为19二%、29.8%和31二%,其中ASODN组HHCC细 胞膜表
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R735.7

【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
2 王永庆,夏瑞祥;CD44分子在非霍奇金淋巴瘤中的表达[J];安徽医药;2005年09期
3 翟敬芳;丛林;欧玉荣;;血管内皮生长因子及其激酶插入区受体在卵巢子宫内膜异位症中的表达及意义[J];蚌埠医学院学报;2010年04期
4 曾革非,张智清,周小明,张立国,车团结,安乃莉,陈爱君,姚立红;血管内皮细胞生长因子受体Flt-1胞外区基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达[J];病毒学报;2000年02期
5 崔澄,胡建军,杨彦忠;VEGF在肿瘤免疫抑制中的作用及其临床应用前景[J];白求恩军医学院学报;2005年01期
6 李秀华,张阳;肿瘤血管生成评估研究进展[J];大连医科大学学报;2002年01期
7 宋磊;吕申;;原发性肝癌TACE治疗前后血浆VEGF水平变化及其与疗效间相关性的研究[J];大连医科大学学报;2008年03期
8 缪应业;刘家云;易静;苏明权;沈建军;郝晓柯;;KDR siRNA表达载体的构建和鉴定[J];第四军医大学学报;2006年10期
9 缪应业;刘新;李浩;乔卿华;侯林虎;刘小圆;郝晓柯;;siRNA沉默PC3细胞中KDR基因的表达[J];第四军医大学学报;2008年19期
10 宋锦文;李彦豪;陈勇;杨艳;刘晓红;宁季军;杨军;石新霞;;经皮穿刺瘤内注射碘油化疗药乳剂治疗兔移植性VX2瘤疗效研究[J];南方医科大学学报;2010年11期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王宇光;加味升阳益胃汤对阿霉素肾病大鼠肾小管间质损害保护作用的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 樊庆胜;VEGF、VEGFR-2及PDGF-BB联检在TACE联合索拉非尼治疗肝细胞肝癌中的价值[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
3 郭敏;食管癌血管生成调节机制研究及血管生成因子对肿瘤结构血管和灌注血管的影响[D];郑州大学;2002年
4 严瑞兰;抗血管内皮生长因子发夹核酶治疗卵巢癌的实验研究[D];第一军医大学;2002年
5 李先茂;颗粒酶B靶向性抗肿瘤血管生成的研究[D];第一军医大学;2002年
6 邹戈;膀胱移行细胞癌及人膀胱癌T24细胞中VEGF、TSP-1和COX-2mRNA表达及意义研究[D];中南大学;2003年
7 陈颖;PTEN及肿瘤相关基因在正常卵巢及卵巢良、恶性病变中的改变和意义[D];中国医科大学;2004年
8 张靖;组织因子(TF)与胃癌发生发展的关系[D];第四军医大学;2005年
9 陆琳;人子宫内膜癌细胞系的建立及其特异性结合短肽的筛选[D];暨南大学;2005年
10 唐恭顺;噬菌体随机环7肽库筛选胰岛素受体高亲和肽作为肝细胞癌靶向载体[D];四川大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 简娜提·阿不力孜;VEGF、P27和CyclinD1在乳腺癌中的表达及意义[D];新疆医科大学;2010年
2 张建民;抗VEGFR-2嵌合Fab抗体对鼠肝癌原位移植瘤及其新生血管的抑制作用[D];南京医科大学;2011年
3 柯小丽;神经生长因子受体p75NTR对肝癌细胞的促凋亡作用及其机制的研究[D];华中科技大学;2010年
4 张峰;EIF-5A2蛋白在人脑胶质瘤的表达和意义[D];广州医学院;2011年
5 张会娟;中晚期宫颈癌动脉介入栓塞化疗前后病变组织中VEGF、Caspase-3的变化及意义[D];泰山医学院;2011年
6 陈治;血管内皮生长因子及受体在大肠肿瘤血管靶向治疗中的应用研究[D];第一军医大学;2000年
7 柏林;sVEGF在肝癌诊断中的应用价值及RF治疗术后变化的实验研究[D];第一军医大学;2000年
8 帕侬赛(PHAKAN Phanomsay);肝癌相关抗原衰老标记蛋白-30(SMP30)在肝癌组织的表达及其意义的研究[D];广西医科大学;2001年
9 钟世顺;大肠癌血管生成及p53基因对其调控作用的研究[D];第一军医大学;2001年
10 曹先东;胃癌组织中血管内皮生长因子、增殖细胞核抗原的表达及其与微血管密度间相关性的研究[D];安徽医科大学;2001年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王孟龙,殷正丰,吴宗娣,王率,吴孟超;腺病毒介导的VEGF启动子-胸苷激酶表达系统对肝癌细胞的选择性杀伤作用[J];第二军医大学学报;2002年01期
2 唐其东,林碧莲,林曙光;反义寡脱氧核苷酸抑制大鼠肝细胞载脂蛋白B的表达[J];中国动脉硬化杂志;1999年04期
3 翁景宁,张惠蓉;PCNA反义寡脱氧核苷酸对牛晶状体上皮细胞体外增殖活性的影响[J];眼科研究;2001年03期
4 尹俊,石刚刚,刘幸平,谢舜峰;组织因子反义寡脱氧核苷酸防治心肌缺血再灌注损伤的实验研究[J];诊断学理论与实践;2004年06期
5 张伟平,陈协群,张永清,梁蓉,李亚红,高广勋,朱华锋;bFGF和VEGF在急性白血病中的表达及对HL-60细胞生长的影响[J];中国实验血液学杂志;2005年01期
6 谢娟,李少林,张玉诺,刘方欣;~(99m)Tc标记c-erbB2反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌显像的实验研究[J];中华医学杂志;2005年41期
7 王春红,孙秉中,袁跃传;以阳离子脂质体为载体增强反义寡脱氧核苷酸作用的研究[J];中国实验血液学杂志;1998年03期
8 刘庭波,吕联煌;c-myc反义寡脱氧核苷酸诱导人髓系白血病细胞系HL-60细胞凋亡[J];中国实验血液学杂志;2001年01期
9 白文俊,侯树坤,王晓峰,闫征,何培英,邓庆平,胡小朋,管考鹏;PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞cNMP的影响[J];中华男科学;2002年02期
10 杨敏!510080广州市,唐其东!510080广州市,蔡立丰!510080广州市中山大学生命科学院药学系实习生,林曙光!510080广州市;预防血管成形术后再狭窄的C-sis反义寡脱氧核苷酸在血清中的稳定性[J];岭南心血管病杂志;1999年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵忠芳;吕仁荣;霍然;傅洪滨;徐广琪;;普萘洛尔治疗增生期血管瘤患儿血清中VEGF、MMP-9的变化[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
2 徐勇;黄仁魏;王东宁;林桂真;林东军;何易;李旭东;林曲;;急性白血病血管内皮生长因子(VEGF)和受体的表达及其临床意义研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
3 李飞;李树清;;VEGF表达在局灶性脑缺血后亚低温脑保护中的作用研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
4 赵忠芳;吕仁荣;霍然;傅洪滨;徐广琪;;普萘洛尔治疗增生期血管瘤患儿血清中VEGF、MMP-9的变化[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
5 杜娟;王景美;钱晓萍;刘宝瑞;;COX-2和VEGF在胃癌中的表达和意义[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
6 田翀;彭晓琳;张嫦慧;唐玉涵;任玮叶;孙秀发;郝丽萍;应晨江;;VEGF在白藜芦醇缓解内皮细胞高通透性的作用[A];营养与慢性病——中国营养学会第七届理事会青年工作委员会第一次学术交流会议论文集[C];2010年
7 陈西华;;小鼠月经模型中Hif-1α对VEGF调节作用的研究[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
8 梁国刚;;TGF-β1和VEGF在大肠癌中的表达及临床意义[A];第八届全国中西医结合普通外科临床与基础学术会议暨全国中西医结合外科危重病学习班论文汇编[C];2003年
9 廖圣恺;;5-LOX、CD-34、VEGF在涎腺黏液表皮样癌中的表达及意义[A];第八次全国口腔颌面—头颈肿瘤会议论文汇编[C];2009年
10 孙大军;杜建时;王征;臧广生;刘卓;;丹参与VEGF联合应用在动物肢体缺血模型中的实验研究[A];中国中西医结合学会周围血管疾病专业委员会第六届换届暨学术交流会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 由香港麦迪信医学出版有限公司供稿;VEGF“陷阱”有效抑制肿瘤[N];医药经济报;2002年
2 张中桥;VEGF对乳腺癌的生长起重要作用[N];中国医药报;2002年
3 记者 李大庆;我科学家发现肝癌细胞演化和迁移新路径[N];科技日报;2011年
4 贾玉容;Survivin蛋白促进肝癌细胞快速增生[N];中国医药报;2004年
5 江山;小心肝癌细胞“吃”血糖[N];大众卫生报;2005年
6 胡德荣;纳米磁微粒烧死肝癌细胞[N];健康报;2005年
7 史凤芝 陈英云;砒霜可诱导肝癌细胞“自杀”[N];大众卫生报;2000年
8 新华社;VEGF有望成为预防动脉梗塞新药[N];中国医药报;2005年
9 记者 张建松;肝癌细胞为何转移[N];新华每日电讯;2000年
10 朱恒顺;山大一项免疫学成果通过鉴定[N];科技日报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王宏光;反义寡脱氧核苷酸抑制肝癌细胞VEGF的表达及肝癌细胞中VEGF的自分泌机制[D];第四军医大学;2002年
2 张国鹏;两种核素报告基因系统用于监测治疗基因VEGF165表达的基础研究[D];华中科技大学;2010年
3 费嘉;VEGF mRNA反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响[D];暨南大学;2003年
4 赵薇;细胞因子GM-CSF、VEGF对大鼠内皮祖细胞功能活性的影响及其信号转导途径的体外研究[D];中国医科大学;2008年
5 宋关斌;肝癌细胞力学特性及其与细胞周期的关系研究[D];重庆大学;2002年
6 董宏伟;大肠癌形成过程中肿瘤血管生成与细胞凋亡的变化及VEGF和p53表达的意义[D];中国医科大学;2002年
7 彭湃;VEGF在慢性创面愈合中的作用及机理研究[D];第一军医大学;2004年
8 范海涛;Survivin与VEGF的检测及二者反义寡核苷酸对膀胱癌的治疗研究[D];吉林大学;2010年
9 杨秀鹏;Tryptase诱导AML骨髓基质细胞高表达VEGF及机制的研究[D];中国医科大学;2010年
10 吴建兵;RNA干扰抑制BMP-2基因表达对肝癌SMMC7721细胞增殖和侵袭的影响及机制[D];南昌大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙丹;Snail、VEGF、MMP-9在肝细胞肝癌中的表达及临床意义[D];山东大学;2010年
2 魏小勇;p-p38和VEGF在原发性肝癌中的表达及相关性研究[D];南昌大学;2009年
3 杨辉;抑制促血管生成素-2基因表达对肝癌血管生成的影响[D];遵义医学院;2010年
4 孙洁;VEGF表达及微血管密度与三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌临床病理特征的关系[D];广西医科大学;2010年
5 齐振平;非小细胞肺癌中VEGF及其受体Flt-1的表达及临床意义[D];大连医科大学;2010年
6 刘小兵;脑胶质瘤VEGF,bFGF,IGFBP-2在血浆和脑脊液的定量分析及意义[D];河北医科大学;2010年
7 张志学;肺腺癌中血管内皮生长因子及其受体的表达与血管生成及预后的关系[D];青岛大学;2001年
8 李磊;VEGF,MMP-2在胃癌中的表达及其与浸润和转移的关系[D];郑州大学;2002年
9 栾东风;锌对高糖条件下视网膜müller细胞分泌VEGF的影响[D];吉林大学;2010年
10 郭晓斌;在细胞三维立体培养模型中观察VEGF对H460细胞MMP-2表达的影响[D];兰州大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026