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《第四军医大学》 2002年
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白细胞介素-2与雌激素及其受体交互作用的研究

钟延清  
【摘要】: 研究背景: 随着神经-免疫-内分泌网络学说的建立及发展,三大系统的信息分子及其受体间交互作用受到越来越多的关注。免疫系统中的细胞因子白细胞介素-2(IL-2)对机体的细胞及体液免疫有非常重要的调节功能,目前研究表明,IL-2对神经、内分泌系统的功能也有一定的作用。雌激素(E)是一种重要的性激素,主要在生殖系统中发挥作用。E对免疫系统的活动有一定的调控,机体E水平的变化与免疫器官的发育、免疫系统的功能及多种自身免疫性疾病密切相关。对于IL-2与E及其受体间交互作用的研究,将有助于对神经-免疫-内分泌网络的了解。 我们实验室近年来的实验发现IL-2与雌二醇(E_2)在垂体前叶(AP)有一定的交互作用。如大鼠AP存在IL-2和IL-2R三条链的免疫阳性物质,大鼠注射E_2后,IL-2R各条链的阳性细胞数增加,尤以IL-2Rβ和γ的上调最为明显,而IL-2染色明显降低。E_2(10~(-6)M)作用24 h可使垂体瘤ATT-20细胞IL-2R三条链的阳性细胞数显著增加。IL-2(10U/ml-500U/ml)能明显促进雌性大鼠AP细胞的增殖,且其作用与体内E水平密切相关。IL-2作用48 h后,大鼠AP细胞ERαmRNA表达增加,而ERβmRNA表达减少。 正常大鼠AP细胞是否能表达IL-2R的mRNA,E作用后大鼠AP IL-2R免疫阳性物质的增加是否是其mRNA表达增加的结果?E对AP IL-2R的作用是否与AP内的ER有关?E对其它组织的IL-2R表达是否有同样的作用?以上的问题目前仍不清楚。 研究目的: 第四军医大学博士学位论文 进一步研究IL-2与E及其受体间在垂体前叶及子宫、脾脏和胸腺的交 互作用。 研究内容和方法: 1.采用半定量反转录-聚合酶链式反应(RTFCR)方法、免疫组织化学方 法检测E对大鼠AP、子宫、胸腺和脾脏皿-2及h-ZR——A表达的影响。2.以 半定量反转录-聚合酶链式反应(RTPCR)方涪、兔疫组织化学方法检测 E对 大鼠AP、子宫、胸腺和脾脏ER蛋白和mRNA表达的影响。3 以兔疫细胞化 学方法观察 n上 在两种乳腺癌细胞 MCFjpeRa阳性砰 MDAMB上3 peRO 阳性)的存在表达,以MTT法和勺丁dR掺入法观察 n上对两种细胞增殖和 DNA合成的影响,流式细胞仪检测IL-2对细胞细胞周期和凋亡的作用,用 激光共聚焦显微镜检测h.2对两种细胞胞内钙浓度的影响,并观察了E对 MCF-7细胞IL-ZR表达的影响和抗E药物Tmoxifen对n-2作用的调节。 主要研究结果 1 以半定量RTFCR &发现正常雌性大鼠AP组织及原代培养细胞均存在 IL毛、p、Y三条链InRNA的表达,而且 IL上 的表达受EZ和 h上的 调节。500 U/Inl和 1000 U/Inl浓度的 n上作用 3 d可显著促进原代培养 AP细胞 n上和 n上 时HY 111.--renA的表达,对于 IL上,500 U/ml的 h上 有强的促进其表达的作用,表明外源的n-2能上调其自身受体在AP的 表达。E。* pg/Kg/d)作用 30 d可促进 AP组织 h毛 H条链 InRNA的 表达,但在离体条件下 E。10-w)作用 3 d对 h上 表达的影响不显著。 二 正常雌性大鼠于宫存在 n上R卜丫免疫阳性物质和 InRNA的表达,n- ZRO、Y免疫阳性细胞主要存在于大鼠子宫内膜。大鼠卵巢摘除(OVp3 d 后,IL上 免疫阳性细胞减少,而注射E。* pg/Kg/dp0 d可显著促进 子宫 h七 和Y免疫蛋白和 mRNA的表达,但对 h上R6蛋白和 InRNA 的表达无显著影响。 3 大鼠每日进行注射的刺激会使胸腺 IL上和 IL上、Y InRNA的表达均 升高,表明每日针刺注射的刺激可促进OVX大鼠和正常大鼠胸腺IL上 及其受体的表达,而补充EZ* e用刀0 d能进一步促进胸腺h上 的表达,但对IL-2和受体的其它两条链的表达影响不大。对于脾脏,大 鼠每日注射会使IL毛和 h毛 表达增高,E。* H卿d)作用 30 d可 显著抑制每日注射刺激引起的脾脏IL.2表达的增加,但对IL.ZR三条链 2 第四军医大学博士学位论文 的表达无显著影响。 4 大鼠OVX后补充E。及正常大鼠补充E人100 pg/Kg/p0 d均可显著抑制 大鼠AP ERa兔疫阳性物质的含量及InRNA的表达,但对ERO的表达无 显著影响。大鼠 OVX后补充 E。及正常大鼠补充 E。O pg/Kg/d尸0 d可 显著抑制大鼠于宫 ERa蛋白和 IllltrvA的表达而促进子宫 ERS蛋白和 InRNA的表达。 5 大鼠OVX后补充E。及正常大鼠补充E人mo p纠屯旧30 d可显著抑制大 鼠脾脏ERa蛋白和 1ill:\rvA的表达,但对胸腺ERa蛋白和 11]u-enA的表达 则为促进作用。 6.乳腺癌 MCFJ细胞存在 IL上 三条链的兔疫阳性物质,其中 IL上 的 阳性细胞数和表达强度均强于n.ZR的其它两条链,以RT.PCR方法可 在 MCFJ细胞上检测到 IL上 InRNA的表达。n上在 100 U/ml刁 U/Inl的浓度范围内可显著促进 MCF-7细胞的增殖和 DNA合成,2.5O 的新生小牛血清可抑制IL.2的促细胞增殖作用。 7.乳腺癌细胞 MDA-MB上3存在 IL上R卜 Y兔疫阳性物质及 n
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R338

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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【二级参考文献】
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