收藏本站
《中国人民解放军第四军医大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

抗肿瘤中药成分的筛选及作用机理研究

韩月恒  
【摘要】: 自然界中植物种类多种多样,可用于肿瘤治疗的植物药也是数量繁多,如果能将其中起主要作用的有效成分分离出来,研究其理化性质及作用机理,对于抗肿瘤新药的研制开发将具有非常重要的意义。 为此,我们选取几种肿瘤细胞系,以培养细胞为实验模型,用MTT试验、软琼脂试验等方法,在细胞水平检测了多种中药提取物或单体的体外抗癌作用,筛选出能够以较低浓度(微克/毫升水平)抑制肿瘤细胞生长或增殖的药物。在此基础上,以荷瘤小鼠为实验模型,在动物水平检测了姜黄素和水飞蓟素两种单体的在体抑癌作用。筛选的25种中药单体及粗提产物中,发现可能有抑制肿瘤作用的(镜下观察有明显细胞形态改变的,如细胞皱缩,破碎,漂浮等)有12种。其中,几种纯度较高的单体抑制浓度能达到微克级水平,与它们在动物体内血浆和组织分布的浓度水平比较接近。动物实验表明,姜黄素和水飞蓟素都没有急性毒副作用,水飞蓟素的作用符合体内抑瘤试验的有效标准,与未处理组及橄榄油注射组有显著性差异;姜黄素处理组虽有肿瘤平均重量的减少,但不具有显著性差异,且肿瘤重量的变异范围较大。 根据第一部分实验的筛选结果,我们重点选择姜黄素和水飞蓟素,深入研究了这两种中药单体的抗肿瘤作用机理。其中,姜黄素对各种肿瘤细胞都 第口N回J一丰协士吵应论义 第 5页 有极强的抑制作用,因此,考虑用姜黄素作用于耐药肿瘤细胞,观察其作用 效果,包括药物对耐药胃癌细胞SGC7901/VCR的抑制作用,与其它常规化 疗药物的协同性,能否诱导凋亡及相关分子机制等。我们首先通过MTh试 验确认,多药耐药的人胃腺癌细胞系SGC7901/VCR对姜黄素并没有耐受现 象。进而,检测了姜黄素与常规化疗药物的协同作用。我们的研究表明亚剂 量姜黄素与三种常规化疗药物联合应用,均有协同作用,包括姜黄素与1倍 血药高峰浓度的阿霉素,与0.l、l、10倍血药高峰浓度的5.氟尿嗜唆,及与 1倍血药高峰浓度的长春新碱。也就是说,低剂量的姜黄素可以在一定程度 上逆转SGC79001/VCR细胞的耐药表型。通过对用药后DNAladder的检测, 以及用 Western blot检测 PARP裂解,发现姜黄素可诱导 SGC7901/VCR细胞 发生凋亡,且其作用既是剂量依赖的也是时间依赖的。先前的研究表明MAPK 家族成员参与了由特定药物如阿霉素、长春新碱等选择的肿瘤细胞多药耐药 的进展。我们采用 Western blot方法,应用针对 MAPK家族成员 JNK、ERK、 p3 8磷酸化形式及非磷酸化形式的特异性抗体,检测了姜黄素作用后以上激 酶的表达水平及活化程度的改变。在不同浓度药物u,10,20,40 p M) 作用24hr后,这几种激酶的表达水平都没有明显的改变,而它们磷酸化的程 度与加人DMSO的阴性对照组相比则有显著的改变。其中JNK和ERK的磷 酸化受到明显的抑制,而p38的磷酸化水平有一定的增加。激酶的磷酸化程 度体现了其活化水平,因此,我们认为姜黄素的作用抑制了JN’K和ERK的 活性,而在一定程度上提高了 p3 8的活性。而姜黄素对 MAJ,K家族成员不同 的调节作用与细胞的存活状态及凋亡程度可能具有一定的相关性。这也为我 们了解MAPKS的表达水平活化程度与SGC7901/VCR细胞的存活状态之间的 相关提供了线索。 在第一部分实验中,我们还发现水飞蓟素对几株恶性程度有明显差异的 乳腺癌细胞有不同的抑制作用,并且对恶性程度高的抑制作用较强,对恶性 oe,arrn’e’t’ ofaioca肋血QMd,’otetulara切b区入’.’.,ti 窜曰旱回一沁剧u眸s@卜江们n欠 第6页 程度低的较弱。这种现象使我们对水飞蓟素的作用机理产生了很大的兴趣。 因此,我们首先用MTh试验检测了水飞蓟素对乳腺癌细胞的作用,并多次 验证了第一部分的观察。其次,用水飞蓟素作用于体外培养的人外周血淋巴 细胞以及永生化的人胃粘膜上皮细胞GES-1,以观察水飞蓟素对正常细胞或 低恶性程度的永生化细胞的杀伤作用。实验结果表明,水飞蓟素对淋巴细胞 和永生化GES八细胞的抑制作用最弱,对SK-BR-3细胞的抑制作用较正常细 胞强,但明显弱于另外二种乳腺癌细胞,MCF7和 MDA-MB-23。这提示, 水飞蓟素对于恶性程度高的细胞的抑制作用强于恶性程度低的细胞。进而, 我们用流式细胞仪分析了水飞蓟素对几种乳腺癌细胞细胞周期的影响,发现 随着药物作用时间的延长,与阴性对照相比,SK七R3细胞的 GI期细胞比 例增多,出现了GI期阻滞,而另外两种细胞则有GZ期细胞比例增多的表现, 即GZ期阻滞,此外,MCF-7细胞还出现了较典型的凋亡峰。我们推测水飞 蓟素对几种恶性程度不同的乳腺癌细胞的选择性作用可能于它对这几种细胞 的细胞周期的不同的调控有关。并且,对水飞蓟素作用靶分子的进一步研究 有助于揭示造成几种乳腺癌细胞恶性程度差异分子基础。 综上所述,我们首先通过细胞水平的药物敏感性分析和动物水平的在体 试验,从25种中药单体或粗提产物种筛选出十余种可能具有抗肿瘤作用的成 分,并深
【学位授予单位】:中国人民解放军第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R285

免费申请
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李凤琴,张大锤,曲显俊,王惠,周玲,左春旭;芦笋提取物抗癌作用的研究[J];癌症;1993年03期
2 王思功,李予蓉,王瑞宁,冯莉;仙鹤草对人癌细胞裸鼠移植瘤的影响[J];第四军医大学学报;1998年06期
3 罗继征;紫杉醇治疗肺癌研究现状[J];国外医学(肿瘤学分册);1997年04期
4 周振华;中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展[J];国外医学(中医中药分册);1998年03期
5 杜昱光,白雪芳,卜宗式,马小军,孟令纡;竹荪深层发酵菌丝体对小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤作用[J];中国生化药物杂志;1997年05期
6 饶伟文;癌胚共性与抗生育中草药的抗肿瘤作用[J];中草药;1997年03期
7 邹恒琴,徐峰,张忠义,孙逊;一种具有前景的抗癌药苦马豆素的研究进展[J];中草药;1997年07期
8 单友亮,庄志铨,李博华,孙晓红;云芝多糖研究进展[J];中草药;1998年05期
9 徐学民,袁崇均;一个具有生物活性的新紫杉烷类似物──紫杉次碱的分离及结构测定[J];中草药;1998年06期
10 宋炳生,杨玉龙;香菇多糖抗肿瘤活性的研究概况[J];中草药;1998年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 夏俊,陈治文,石莹;绿芦笋提取液抑制肿瘤细胞核酸生物合成的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
2 马泓,宁涛,邓大君,周静,袁媛,柯杨;幽门螺杆菌致人淋巴细胞胃粘膜上皮细胞微核作用[J];癌变.畸变.突变;1996年03期
3 王家晓;中药治疗原发性肝癌的机理研究进展[J];安徽中医临床杂志;2002年05期
4 李冬杰;魏景芳;许宁;张进献;;植物生长物质对冬凌草愈伤组织生长及褐化的影响[J];安徽农业科学;2006年06期
5 王永学;王中全;陈正跃;邱培勇;张积霞;;RP-HPLC法测定大叶香茶菜中冬凌草甲素含量[J];安徽农业科学;2008年22期
6 卢萍;霍红雁;钱亚光;李松;牛艳芳;;小花棘豆内生真菌中苦马豆素的鉴定及含量测定[J];安徽农业科学;2012年08期
7 侯金凤;黄芪的现代药理研究及临床应用[J];安徽医药;2003年03期
8 冯捷,刘广芝,付天云,叶雪,姚煜;人卵巢癌永生化细胞系BUPH:OVSC-2的建立及其生物学特性研究[J];癌症;2002年07期
9 朱越雄,石亮,曹广力;野生树舌多糖的脱色和脱蛋白[J];氨基酸和生物资源;2005年03期
10 杨菲菲;;香菇多糖作为饲料添加剂的研究进展[J];现代农业科技;2007年24期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴科峰;范世锦;吕应年;苟占平;;刺齿凤尾蕨抗肿瘤活性二萜类化合物的含量测定[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
2 冯彬彬;张建海;徐晓玉;陈红;;抗肿瘤中药研究进展[A];2011年中华名中医论坛暨发挥中西医优势防治肿瘤高峰论坛论文集[C];2011年
3 黄宏思;黄卫彤;韦鹏涯;黄衍强;;黄芪多糖协同抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用[A];第三届全国中医药免疫学术研讨会论文汇编[C];2006年
4 于英君;李丽阳;宋高臣;管宇;;树舌多糖GF注射液对环磷酰胺的增效减毒作用[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
5 武晓丹;金哲雄;;仙鹤草的研究进展[A];第一届全国中药商品学术大会论文集[C];2008年
6 吴科锋;吕应年;刘义;李立;George.G.Chen;梁念慈;;半边旗提取物5F-Na盐注射液对小鼠S_(180)型肉瘤抑制作用研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
7 朴炳奎;;中药在肿瘤治疗中的运用及有关作用机理的研究[A];中国临床肿瘤学教育专辑(2002)——中国抗癌协会第六届临床肿瘤协作中心(CSCO)学术年会论文集[C];2002年
8 骆婷;李淼;丁克坚;;桑黄固体培养基的筛选及培养条件测定[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
9 谢少茹;沈洪;赵崧;张国新;郝波;刘增巍;施瑞华;;黄芪多糖对胃癌细胞的抑制作用及其机制[A];中华中医药学会脾胃病分会第十九次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2007年
10 张建海;冯彬彬;陈红;徐晓玉;;中药抗肿瘤动物试验研究进展[A];第二届临床中药学学术研讨会论文集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴达;甘肃棘豆生物碱抗肝癌活性及其对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究[D];西北农林科技大学;2010年
2 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
3 魏巍;乌头碱降解产物化学成分及生物活性研究[D];吉林大学;2011年
4 曲婷婷;活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞株作用的实验研究[D];辽宁中医药大学;2011年
5 赵红;昆参颗粒影响血管生成因子表达的实验研究及其治疗进展期胃癌的临床观察[D];山东中医药大学;2011年
6 张巍;红菇菌丝体培养多糖部分生物活性研究[D];黑龙江中医药大学;2011年
7 王明华;红藤四萜大环内酯酸钠对肝癌的药效学及作用机制研究[D];第四军医大学;2011年
8 韦星船;姜黄素类似物的合成及抗肿瘤活性研究[D];广东工业大学;2011年
9 华洋林;竹荪多糖的提取分离、结构分析和生物活性研究[D];华南理工大学;2011年
10 陈进军;狗舌草提取物对L1210细胞的作用及其毒性研究[D];西北农林科技大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 崔璨;冬凌草种质资源研究[D];河南中医学院;2010年
2 兰海滨;白附子混悬液对H_(22)荷瘤小鼠端粒酶活性及p16和bcl-2基因表达相关性研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
3 卢言琪;加味生脉散配合放疗治疗气阴两虚型NSCLC临床疗效观察[D];黑龙江中医药大学;2010年
4 张桂华;中药体外毒性试验及其毛细管电泳研究[D];广西民族大学;2010年
5 赖黎丽;基于芯片杂交结果克隆疏叶骆驼刺、苦马豆相关基因的研究[D];新疆农业大学;2010年
6 姜海荣;健脾方加减结合OLF方案治疗晚期胃癌的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
7 杜明;桑黄多糖的提取及其对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 吴懿;小柴胡汤ADME/Tox特征及肝靶活性—毒性机制研究[D];成都中医药大学;2010年
9 郑海娜;冬凌草甲素的药代动力学和组织分布研究[D];河南大学;2011年
10 臧毅;缝裂木层孔菌和伸筋草化学成分的研究[D];华东师范大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜琰琰,莫自耀;绞股蓝总皂甙致突变和抗诱变作用研究[J];癌变.畸变.突变;1995年03期
2 谷淑燕,赵文平,曾毅,唐慰平,赵明伦,邓惠华,李昆;从低分化鼻咽癌病人建立鼻咽癌上皮细胞株[J];癌症;1983年02期
3 王瑞林;冬凌草治疗原发性肝癌31例临床观察[J];癌症;1984年01期
4 王益夫,黄胡信,张明仁,杨显荣;结晶天花粉蛋白对体外培养的、肿瘤细胞的抑制作用观察[J];癌症;1989年03期
5 李琦,陈正;冬凌草甲素对β-肾上腺素受体及腺苷酸环化酶活性的影响[J];白求恩医科大学学报;1991年02期
6 邱淑玉;李克华;洪善祥;曾志刚;;香菇多糖注射液长期毒性试验[J];福建医药杂志;1989年05期
7 黄永融;;乌头抗癌研究概述[J];福建中医药;1991年01期
8 蔡幼清;绞股蓝皂甙对过氧化氢导致氧化剂损伤的血管内皮细胞的保护作用[J];国外医学(中医中药分册);1994年03期
9 张明智,李苏宜,吴孔明,许莉;升白能治疗化疗所致骨髓抑制临床观察[J];河南肿瘤学杂志;1994年03期
10 河南省冬凌草研究协作组;;冬凌草抗肿瘤及其他药理作用的研究[J];河南医学院学报;1975年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张川,张卫东,苏娟,秦路平,周静,胡汉杰,孙坚彤;水飞蓟素磷脂复合物对四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤的保护作用[J];中国医学生物技术应用;2003年04期
2 黄晴,吴立军,田代真一,小野寺敏,池岛乔;水飞蓟素在去血清条件下诱导G_0/G_1期人宫颈癌HeLa细胞凋亡(英文)[J];中国临床康复;2005年06期
3 程敏;;水飞蓟素对甲硝唑代谢和分布的影响[J];国外医药.植物药分册;2005年02期
4 苑泽宁;;水飞蓟细胞悬浮培养液脱钙与增加水飞蓟素积累的相关性[J];国外医药(植物药分册);2006年06期
5 成军;肖琳;;水飞蓟素在抗肝纤维化中的应用[J];国际消化病杂志;2007年01期
6 黄俊琼;董革辉;;姜黄素对HL_(60)/ADR细胞多药耐药逆转作用的研究[J];中国卫生检验杂志;2008年06期
7 翟世康;;水飞蓟素对实验性鬼笔碱中毒的作用[J];国外医学.药学分册;1975年02期
8 杨杏英;水飞蓟素治疗高脂血症的对照试验[J];药物流行病学杂志;1995年04期
9 张军 ,张国平;水飞蓟素的胃保护作用[J];国外医学.中医中药分册;1996年01期
10 张其根;水飞蓟素联合复方丹参注射液治疗酒精性肝病30例[J];中西医结合肝病杂志;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 于长安;温见燕;廖福龙;;剪应力与姜黄素联合作用对人脐静脉内皮细胞功能的影响[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
2 陈秀;李作孝;佟琳;陈忠伦;张琳;彭建一;;姜黄素对实验性脑出血肿周边含水量影响的研究[A];第五次全国中西医结合神经科学术会议论文集[C];2004年
3 杨磊;张建业;张莲英;;姜黄素对前列腺肿瘤细胞生长的抑制作用[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
4 成扬;平键;徐列明;胡义扬;刘成海;;姜黄素激活过氧化物酶体增殖因子活化受体γ信号对大鼠肝星状细胞的影响[A];第二十次全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2008年
5 李莉;赵昱;龚淼;;姜黄素对人食管癌Ec-109细胞作用的体外实验研究[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年
6 廖华;孙爱军;张红旗;;姜黄素对大鼠肺微血管平滑肌细胞周期和增殖能力的影响[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
7 曹健美;胡义扬;刘成海;王晓柠;;姜黄素对LPS诱导KC炎症细胞因子分泌的抑制作用及其对肝细胞损伤的影响[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
8 李军祥;诸葛丽;;姜黄素和葛根素干预非酒精性脂肪性肝炎作用机制的对比研究[A];第二十三届全国中西医结合消化系统疾病学术会议暨消化疾病诊治进展学习班论文汇编[C];2011年
9 潘国凤;张晓东;朱晓新;;姜黄素抗肿瘤作用及其机制研究最新进展[A];第十届全国中药药理学术会议论文集[C];2007年
10 刘建国;张彬;王全胜;朱锐;汪永辉;张丽哓;徐敏;;姜黄素对单侧输尿管梗阻后肾间质纤维化的调节作用的研究[A];中华中医药学会第二十一届全国中医肾病学术会议论文汇编(下)[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 高原;研究发现姜黄素能延长动物寿命[N];新华每日电讯;2010年
2 张骁束 梅英;姜黄素抗癌作用研究进展[N];中国医药报;2003年
3 肖瑶;姜黄素有明显抗肿瘤作用[N];健康报;2008年
4 ;姜黄素对肾脏有保护作用[N];中国中医药报;2004年
5 ;食用天然色素简介——姜黄素[N];中国食品质量报;2004年
6 ;姜黄素有可能预防阿尔茨海默病[N];医药经济报;2005年
7 本版编辑苏奎 李文;中药开发曙光初现[N];医药经济报;2007年
8 印高乐;吃姜黄素食物有助预防口腔癌[N];中国中医药报;2003年
9 通讯员 李克俭;特克斯中药材种植为农开富路[N];伊犁日报(汉);2007年
10 孙翠英;水飞蓟盘整结束进入上升通道[N];中国医药报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 韩月恒;抗肿瘤中药成分的筛选及作用机理研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
2 郑斌;姜黄素及其类似物L3的抗氧化活性和对小鼠糖尿病模型及血管并发症影响的研究[D];福建医科大学;2010年
3 任玥欣;姜黄素对胆盐诱导的急性胰腺炎防治作用的应用基础研究[D];第一军医大学;2004年
4 王蓬文;姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠的神经保护作用[D];北京中医药大学;2011年
5 吴雪梅;姜黄素新剂型:自乳化和亚微乳给药系统的研究[D];福建医科大学;2010年
6 刘红军;姜黄素对膀胱癌细胞株T24 miRNA表达谱的影响及其机制的探讨[D];广西医科大学;2011年
7 鲍华英;姜黄素对增殖性肾炎防治作用的实验研究及其机制探讨[D];南京医科大学;2003年
8 张文俊;(I)姜黄素半互穿式羟丙甲纤维素—明胶微球给药系统的研究(II)OX26-NGF-融合蛋白的基因克隆及其表达纯化[D];天津大学;2010年
9 崔群力;姜黄素对多巴胺能细胞的保护作用及其机制的实验研究[D];华中科技大学;2010年
10 周京旭;姜黄素对亚硝胺诱导的大鼠肝癌的化学防护作用研究[D];第一军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 魏小娣;姜黄素对新生大鼠坏死性小肠结肠炎模型的疗效评价及其机制的研究[D];重庆医科大学;2010年
2 安伟;姜黄素对大鼠肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的实验研究[D];山东大学;2010年
3 孙玉;依那普利联合姜黄素对实验性肝纤维化小鼠肝脏的保护作用及机制[D];河北医科大学;2010年
4 陈玲玲;凋亡诱导因子在姜黄素诱导的大鼠肺成纤维细胞凋亡中的作用[D];南京医科大学;2011年
5 覃勇;姜黄素逆转人结肠癌细胞株HCT-8/VCR多药耐药的实验研究[D];重庆医科大学;2011年
6 张秀红;依那普利联合姜黄素对防治小鼠肝纤维化效果及机制研究[D];河北医科大学;2010年
7 宫亮;姜黄素Ⅲ脂质体制备及其对肺癌细胞A549生物学特性的影响[D];第三军医大学;2004年
8 李帆;姜黄素对阻断NF-κB信号通路抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖[D];第四军医大学;2010年
9 周进伟;姜黄素对肿瘤细胞中β3Gn-T8及其相关基因表达的影响[D];苏州大学;2010年
10 许娇红;酪氨酸激酶抑制剂筛选方法的建立及姜黄素衍生物的筛选[D];福建医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026