收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

以藻酸钙为载体的可注射性组织工程骨研究

曹强  
【摘要】: 由于肿瘤、炎症、外伤和发育异常而导致的骨组织缺损是临床上常见疾病之一,传统的修复方法存在一定的缺陷,组织工程的出现为骨组织缺损修复重建开辟了新的途径。可注射组织工程骨是利用组织工程学的基本原理,选用可注射性细胞外支架材料构建的组织工程骨,具有损伤小、易操作的优点,成为目前组织工程领域研究的一大热点。可注射组织工程骨的研究主要从三个方面进行:①体外种子细胞培养最佳条件和环境的研究;②三维生物支架材料的开发和性能研究;③可注射组织工程骨的构建方法研究。本实验围绕着以上三个方面,以藻酸钙为细胞载体展开一系列研究,为尽早将可注射组织工程骨应用于临床提供理论依据。 第一部分 犬骨髓基质成骨细胞的分离、培养及生物学行为观察 实验一 犬骨髓基质成骨细胞的体外培养与鉴定 目的:观察犬骨髓间充质细胞在体外培养中向成骨细胞分化及体外成骨表型。方法:通过穿刺方法从犬髂骨抽取骨髓,在常规培养液(含10%胎牛血清的DMEM培养液)和诱导培养液(加入地塞米松、β-磷酸甘油钠、维生素C的培养液)中进行培养,观察细胞生长状态,测定生长曲线,观察成骨细胞特异性蛋白分泌情况。结果:在诱导液中培养的犬骨髓间充质细胞较常规培养液中培养的细胞更丰满,骨髓间充质细胞经诱导培养后可表达成骨细胞特异性蛋白。但生长速度明显减慢。结论:通过穿刺获取的骨髓间充质干细胞可通过体外诱导培养分化为成骨细胞。 实验二 以藻酸钙为载体体外培养骨髓基质成骨细胞的生物学行为研究 目的:研究骨髓基质成骨细胞在藻酸盐凝胶中的生物学行为。方法:将体外培养、分化、扩增的犬骨髓基质成骨细胞与藻酸盐溶胶复合,构成骨髓基质成骨细胞/藻酸钙凝胶复合体,继续体外培养,观察骨髓基质成骨细胞在藻酸盐凝胶中的生长状况和成骨细胞特异性蛋白表达。结果:骨髓基质成骨细胞被包埋在三维立体网状结构的藻酸钙凝胶中,呈悬浮状生长;5天后扫描电镜下显示有少量细胞外基质分泌;细胞维持成骨细胞的特异性蛋白质分泌。结论:骨髓基质成骨细胞在藻 富 强 第四军医大学博士学位论文 酸钙凝胶中保持了成骨细胞的特性,并有少量基质分泌,提示藻酸钙凝胶可以用 作成骨细胞的支架材料。 第二部分藻酸钙凝胶理化性能研究 实验一藻酸钙凝胶理化性能测定 目的:为了合理使用藻酸钙凝胶于可注射组织工程骨中,对藻酸盐溶胶的pH值 和藻酸钙凝胶的机械强度进行测定。方法:将藻酸盐制成 30g/L的溶胶,在pH七 型酸度计上测量pH值;再通过向藻酸盐溶胶内加入硫酸钙的方法,将藻酸盐溶 胶制成特定形状的藻酸钙凝胶,然后在万能材料试验机上测量藻酸钙凝胶的压缩 强度、拉伸强度和弯曲强度。结果:藻酸盐溶胶的pH值为7.332,略偏碱性;压 缩强度为440刀OKPa、拉伸强度为133.75KPa、弯曲强度为56.25KPa。结论:藻酸 盐酸碱度为中性略偏碱,藻酸钙凝胶机械强度较差,不直在受力部位单独使用。 实验二不同消毒方法对藻酸盐凝胶理化性能的影响 目的:研究不同消毒方法对藻酸盐凝胶理化性能的影响。方法:将藻酸盐制成 30g/L 的溶胶,分别采用的钴照射消毒和高压蒸汽消毒,在 pH上型酸度计上测量 pH值; 再通过向藻酸盐溶胶内加入硫酸钙的方法,将藻酸盐溶胶制成特定形状的藻酸钙 凝胶,然后在万能材料试验机上测量藻酸钙凝胶的压缩强度、拉伸强度和弯曲强 度。结果:藻酸盐溶胶经两种方法消毒后pH值均明显下降,呈低度酸性,其中 高压蒸汽消毒较一钻照射消毒对酸碱度影响更明显;经两种方法消毒后藻酸盐凝 胶机械强度均明显下降,其中一钻照射消毒较高压蒸汽消毒对机械强度影响更明 显。结论:用钻照射消毒和高压蒸汽消毒都可以使藻酸盐溶胶pH值下降,使用前 应作pH值调整;高压蒸汽消毒对藻酸钙凝胶机械强度影响相对较小,建议使用。 第三部分氯化钙对骨髓基质成骨细胞的影响 实验一 氯化钙对成骨细胞增殖和分化的影响 国的:研究不同浓度氯化钙对骨髓基质成骨细胞增殖与分化的影响。方法:从兔 筋骨中获取骨髓基质成骨细胞,将骨髓基质成骨细胞置于食不同浓度氯化钙的细 胞培养液中,培养24h、72h。120h后,通过检测骨髓基质成骨细胞的代谢活性和 碱性磷酸酶活性。观察不同浓度氯化钙对成骨细胞增殖和分化的影响。结果:随 着细胞培养液中氯化钙浓度的升高,骨髓基质成骨细胞的代谢活性和碱性磷酸酶 活性均降低。结论:氯化钙对骨髓基质成骨细胞增殖与分化有一定的抑制作用。 实验二不同浓度氯化钙对成骨细胞的细胞毒性研究 一3- 曹 强 第四军医大学博士学位论文 目的:研究不同浓度氯化钙对骨髓基质成骨细胞的细胞毒性作用。方法:从兔滚 骨中获取骨髓基质成骨细胞,将骨髓基质成骨细胞与不同浓度氯化钙溶液进行不 同时间的接触,然后再在细胞培养液中培养24h,通过观察骨髓基质成骨细胞的 形态改变和细胞代谢活性的改变,了解不同浓度氯化钙对骨髓基质成骨细胞的细 胞毒性。结果:


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 祁洁;陈亮;陈富林;;不同来源成骨细胞构建组织工程骨之分子生物学评价[J];现代生物医学进展;2009年04期
2 马绍英;李宝兴;赵亚平;张乃丽;董丽;刘晓明;周沫;;骨膜成骨细胞与生物衍生骨材料联合培养的实验研究[J];西部医学;2008年01期
3 李向东;景尚斐;;骨髓基质干细胞修复骨缺损的研究进展[J];中国现代医生;2009年31期
4 张健,胡敏;骨组织工程血管化的研究进展[J];中华口腔医学杂志;2005年04期
5 李裕标;杨志明;秦廷武;李秀群;;异种脱钙骨基质复合成骨细胞异位成骨的实验研究[J];广西医科大学学报;2008年01期
6 王瑞芳;秦书俭;;血管化在成骨过程中的作用[J];华北煤炭医学院学报;2007年06期
7 钱鋆;沈尊理;张兆锋;朱邦尚;贾万新;黄燮青;侯明钟;;运用组织工程原理结合纳米技术构建骨组织的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2006年05期
8 卜令学;高振华;荆恒;陈立强;刘凤芝;李宁毅;;犬骨髓基质干细胞向成骨细胞诱导分化及细胞片层的制备[J];现代口腔医学杂志;2010年05期
9 祝建中,苗宗宁,戴涟生,刘登生;骨髓来源成骨细胞复合纳米晶羟基磷灰石胶原构建组织工程骨的实验研究[J];交通医学;2003年06期
10 孙源;林红;吴子征;陈瑜;董健;;联合培养时诱导的内皮细胞对自体骨髓基质干细胞成骨作用的影响[J];中华创伤骨科杂志;2006年10期
11 范伟;安洪;蒋电明;曹本珍;;脱蛋白骨为支架材料体外构建的组织工程骨[J];中华医学杂志;2006年47期
12 范伟;张弓;安洪;蒋电明;倪卫东;;hBMP2和hVEGF165双基因修饰组织工程骨的构建及检测[J];重庆医学;2010年24期
13 刘勇;裴国献;江汕;任高宏;梁双武;赵培冉;;组织工程骨神经化构建的影像学研究[J];实用医药杂志;2008年05期
14 段小军,杨柳,何天佐;骨组织工程关键技术的研究进展[J];中国矫形外科杂志;2003年23期
15 赵淑贤;张兰;王敏;董凯;胡小春;;APBSC与TEB犬体内埋植诱导成骨的实验研究[J];临床口腔医学杂志;2006年08期
16 何惠宇;阿达来提·阿合买提江;;口腔种植中组织工程骨的研究进展[J];新疆医科大学学报;2006年11期
17 蓝旭;梁军;葛宝丰;刘雪梅;;表面修饰羟基磷灰石修复骨缺损骨形态发生蛋白-2的表达[J];生物医学工程与临床;2008年01期
18 陈涛;王艳辉;卜令学;李宁毅;;应用细胞片层技术构建功能性组织工程骨的动物实验研究[J];华西口腔医学杂志;2011年04期
19 张开刚;曾炳芳;张长青;;组织工程骨膜成骨的构建及血管化超微结构的观察[J];上海交通大学学报(医学版);2006年02期
20 胡汉祥;刘丹平;;骨髓基质干细胞在骨组织工程中的应用研究进展[J];吉林医药学院学报;2007年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 赵淑贤;;外周血干细胞与组织工程骨移植修复犬牙周骨缺损区转化生长因子-B的表达[A];中华口腔医学会老年口腔医学专业委员会换届选举暨第四届全国老年口腔医学学术研讨会论文汇编[C];2008年
2 岳进;毛天球;雷德林;白石柱;;Ⅰ型胶原修饰快速成型骨组织工程支架对兔成骨细胞粘附与增殖的影响[A];第五次全国口腔颌面—头颈肿瘤学术研讨会论文汇编[C];2006年
3 唐本森;姜泳;尹培荣;吴承龙;宋华;;胎兔成骨细胞与bFGF-明胶海绵复合物的体外共建[A];2006年贵州省医学会骨科学分会学术年会论文汇编[C];2006年
4 田伟;柏树令;;重组骨AECM和Wistar鼠成骨细胞联合培养的实验研究[A];全面建设小康社会:中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集(下)[C];2003年
5 陈婷婷;李智;徐选福;徐亚伟;左玫;苏莉;李晶华;曹谊林;胡洪亮;;Wnt7b重组逆转录病毒载体的构建及其在C3H10T1/2中的表达[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
6 李祖兵;李智;;骨髓来源成骨细胞复合脱钙骨修复兔下颌骨缺损的实验研究[A];2004年中国口腔颌面修复重建外科学术会议论文汇编[C];2004年
7 祝振华;;缺锌对生长期大鼠长骨成骨细胞维生素D受体及钙结合蛋白基因表达的影响[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
8 邹海滨;苏宜香;;大豆异黄酮类对体外培养大鼠成骨细胞的影响[A];中国营养学会第五届妇幼营养学术会议论文摘要汇编[C];2002年
9 邓力;杨志明;智伟;解慧琪;罗静聪;李秀群;刘天庆;宋克东;;旋转壁式生物反应器构建组织工程骨[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
10 杨茗;傅风华;张树平;;菝葜皂苷元对成骨细胞活性的影响[A];2008年全国抗衰老与老年痴呆学术会议论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 罗晓中;组织工程骨低温保存的实验研究[D];四川大学;2005年
2 曹强;以藻酸钙为载体的可注射性组织工程骨研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
3 陈学忠;力学环境下组织工程骨的构建与动态培养[D];南方医科大学;2011年
4 祁洁;骨组织工程中成骨细胞与生物材料相互作用的分子机制[D];四川大学;2005年
5 吕红兵;颅神经嵴细胞的培养特性及向神经细胞、成骨细胞的定向诱导分化[D];第四军医大学;2002年
6 谭晓红;成骨细胞特异性Smad4基因剔除导致小鼠早期发生骨质疏松[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
7 李良;力学刺激对绝经后骨质疏松大鼠成骨细胞作用的细胞分子基础[D];四川大学;2004年
8 丁仲鹃;种植体表面微形态对骨形成影响的研究[D];四川大学;2004年
9 刘颖;应力刺激下成骨细胞c-fos基因表达及影响因素的实验研究[D];四川大学;2004年
10 仇丽鸿;静磁场对大鼠成骨细胞及其牙周炎组织影响的研究[D];中国医科大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 章永江;兔骨髓间充质干细胞生物学特性和自体皮下移植的成骨研究[D];天津医科大学;2005年
2 张弓;多基因修饰组织工程骨中其基因表达时限的检测[D];重庆医科大学;2009年
3 刘增兵;血管内皮生长因子在胚胎成骨细胞中的表达研究及应用[D];河北医科大学;2008年
4 刘剑军;骨髓间充质干细胞与珊瑚羟基磷灰石复合自体肌肉内移植成骨的实验研究[D];南昌大学;2008年
5 张黎龙;富血小板血浆诱导兔骨髓基质干细胞分化为成骨细胞的实验研究[D];中国医科大学;2007年
6 龚飞飞;无机活性诱导元素支架材料对颌骨缺损骨创面骨祖细胞的生物诱导作用[D];安徽医科大学;2008年
7 周瑜;无机活性诱导元素骨支架材料对骨膜源性成骨细胞生长分化影响的实验研究[D];安徽医科大学;2009年
8 李智;骨髓来源成骨细胞复合脱钙骨修复兔下颌骨缺损的实验研究[D];武汉大学;2004年
9 韩立强;人体脂肪基质细胞的分离培养及其成骨活性的研究[D];天津医科大学;2006年
10 金钫;MMPs在大鼠牙周组织改建以及体外培养成骨细胞中的表达[D];第四军医大学;2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 钱铮;日本利用人类胎盘培育出成骨细胞[N];中国劳动保障报;2006年
2 钱铮;日本利用人类胎盘培育出成骨细胞[N];医药经济报;2006年
3 蒋锐;我国组织工程骨应用研究获成果[N];中国医药报;2006年
4 杨丽佳通讯员 周宁人;骨折不愈合缘于成骨细胞“爬不动”[N];健康报;2008年
5 熊艳;用组织工程骨替代缺损肋骨[N];中国医药报;2000年
6 杨丽佳周宁人;骨折不愈合 缘于成骨细胞“爬不动”[N];大众卫生报;2008年
7 杨耀武 吴一福;借鸵鸟骨做人工骨[N];健康报;2007年
8 杨建辉;雌三醇对成骨细胞保护作用的研究[N];中国中医药报;2004年
9 韩富明;苏玉军;让鸵鸟、乌贼“献身”医学造福人类[N];中国医药报;2004年
10 韩富明 苏玉军;让鸵鸟乌贼“献身”医学造福人类[N];科技日报;2004年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978