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《中国人民解放军第四军医大学》 2003年
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抗肝癌单链抗体的表达、纯化及其在荷人肝癌裸鼠体内的放射免疫显像的初步研究

张歌萌  
【摘要】: 肝癌是我国及某些亚非地区的最常见的恶性肿瘤之一,其中90%以上是肝细胞肝癌。肝细胞肝癌恶性度高,多数病人在发现时已是中晚期,目前仍缺乏有效的治疗措施,攻克肝细胞肝癌已成为亟待解决的重大课题。早期发现和治疗对于患者的预后仍起着关键性的作用。 肿瘤放射免疫显像(RⅡ)是利用放射性核素标记肿瘤抗体,结合体外影像诊断肿瘤的技术。其基础是标记抗体能够选择性地浓聚于肿瘤部位,以肿瘤/非肿瘤(T/NT)比来定量的衡量这种亲肿瘤的特异性分布,近半世纪的动物实验及临床研究的结果证明,放射免疫显像技术对于恶性肿瘤的定位及定性诊断有着其它手段所不能比拟的优越性。通过对不同放射性核素的选择,使之成为临床恶性肿瘤诊断和治疗的有利的辅助手段。但是到目前为止,对于肝肿瘤仍缺乏良好的示踪剂进行诊断。因此,临床迫切需要一种特异性较高的肝癌阳性显像示踪剂,以利于早期病灶的检出。 1:目的 初步研究~(131)I标记的mscFv25在荷人肝癌裸鼠体内的生物学分布和放射免疫显像,为肝癌抗原的单链抗体在肝癌的早期诊断和治疗的应用奠定基础。 2:方法 2.1 mscFv25的表达及纯化 第。军区大q硕士嗲伍伶式 将原核表达载体 pGEX 4T-mscFv25转化 E.col JM109,通过nTG的诱导表达目的 蛋白,此种融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的12%,表达产物经包涵体的纯化一变性一 复性一亲和柱纯化一凝血酶酶切一进一步纯化。 2.2‘’‘工mscFv25在荷瘤裸鼠体内的放射兔疫显像的初步研究 将25只荷人肝癌裸鼠随机分为A、B两组,其中A组20只又分为AI、AZ组,分 别通过静脉和腹腔注射相同剂量的”‘工mscFv25,B组5只为阴性对照。然后分别于注 射标记品后1、4、8、16、24、28h固定动物,进行放射免疫显像。然后处死裸鼠,取 肿瘤、全血及主要组织器官,称重,测放射性活度,计算瘤(T)/非瘤(NT)比值及 每克组织占注射剂量的百分数。 3:结果 成功制备了分子量约为52000的mscFv25与GST融合蛋白,,然后通过包涵 体的纯化及GST亲合柱纯化得到了分子量约为26 000的电泳纯的mscFv25。高效碘标 法制备‘’‘工mscFv25,标记率为80%。放射免疫显像结果显示试验组荷人肝癌裸鼠在6-8 小时全部明确显像,对照组鼠瘤区未出现放射性浓聚。”l标记 mscFv25的瘤/肝比值 28小时为9.63士0.05。静脉途径和腹腔途径试验组裸鼠放射免疫显像没有明显差异。 4:结论‘”工mscFv能提高瘤/肝比值(T/NT),缩短显像时间,有可能成为肝癌早期诊 断的一项重要技术。
【学位授予单位】:中国人民解放军第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R735.7

【参考文献】
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