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《中国人民解放军第四军医大学》 2003年
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微囊化SD大鼠神经组织/细胞移植促进周围神经再生的实验研究

胡昭华  
【摘要】: 周围神经(PN)损伤后的再生和修复,是当今神经生物学、创伤外科和显微外科等学科的一个重要研究领域,改善神经修复的微环境,寻求促进再生的有效方法是这一领域中的热点。神经生长因子(NGF)作为一种神经营养因子,它主要来源于周围神经中的SC,其促进神经再生的作用己公认,近来的实验证明可将SC的匀浆或神经生长因子(NGF)及其他促进周围神经再生的物质通过周围神经再生室、直接注入神经外膜下或应用于损伤神经的周围以及全身用药来促进神经再生。但在临床上如何应用还存在许多限制:首先,天然的NGF含量极低,分离纯化工作复杂,价格昂贵。其次,NGF本身是蛋白质,生物半衰期短,局部给药只能是在术中,术后重复给药困难;口服途径会被胃肠道的蛋白水解酶破坏;静脉给药NGF不能通过血脑屏障,需要脑室或腰椎穿刺注射给药,十分不便;而神经外膜下直接注射给药存在被注射神经发生继发性损伤的可能。因此,研究合适的给药途径和方法是当前需要解决的实际问题。近年出现的转基因细胞移植技术由于能持续稳定分泌所需的活性因子,为局部应用展现了一定希望,但无法克服的免疫排斥反应又使其应用受限。本实验探索用微囊化组织/细胞移植促进神经再生的方法,作为研究微囊化转NGF基因移植的第一步工作。从理论分析认为,微囊具有的半透膜特性使移植的组织或细胞能够获得囊外营养物质而存活并分泌活性物质,又因囊壁阻碍大分子物质和抗体进入而使其免受排斥反应,而且已有微囊化胰岛组织/细胞等移植成功,由此构成本实验思路的基础。 第四军医人学硕十学位论文 一 研究内容和方法:()微囊化大鼠异体坐骨神经组织/细胞培养,用 **T和*u8A实验检测微囊在体外的存活及**F分泌情况:(2川各微 囊移植到损伤大鼠坐骨神经吻合口周围,以美兰染色、免疫组化、电镜 技术、坐骨神经功能指数(SFI)测定(足印实验)和电生理检测等, 研究移植的微囊对损伤神经再生的修复的促进作用。结果:(豆)大鼠 坐骨神经组织微囊化后,在体外培养条件下至少可存活六周,第一、二、 三周的OD值升高.而后逐步减少,说明微囊内的周围神经组织/细胞存 在增殖现象;(2)ELISA法对微囊培养上清测量显示微囊内的细胞有分 泌 NGF的活性,第三周时测得 NGF含量达 90pg/ml;(3)微囊移植的 神经吻合组,再生神经纤维数目多,髓鞘厚(P<0刀5),神经纤维丝排 列规则有序,走行通畅,再生轴突超微结构恢复正常时间短;而空囊组 和对照组与微囊组相比再生神经纤维数目少,髓鞘薄,神经纤维丝排列 杂乱无序,再生轴突超微结构恢复正常时间长。(4)从动作电位幅值恢 复率、传导速度恢复率及坐骨神经功能指数等功能学指标检测显示,微 囊移植组能明显改善损伤坐骨神经的功能恢复。 结论:u)微囊化异体大鼠坐骨神经组织/细胞在体外培养条件下可 以存活至少 6周;(2)这种组织/细胞能持续分泌 NGF,分泌量随时间 延长逐步减少;(3)微囊化大鼠神经组织/细胞移植于损伤的大鼠坐骨神 经处对神经再生具有显著的促进作用。
【学位授予单位】:中国人民解放军第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R651.3

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【参考文献】
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