收藏本站
《第四军医大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

正常人骨髓成纤维样基质细胞系对急性髓细胞性白血病细胞增殖、分化和凋亡的影响

梁蓉  
【摘要】:白血病是造血细胞恶性克隆性增殖所致,是常见的恶性肿瘤之一,虽然20年来在白血病发病机理的研究和诊断治疗上取得很大的进展,但是还有很多如难治和复发性白血病、造血干细胞移植后复发等等诸多难题需要解决。既往对白血病的研究多集中在白血病细胞本身,对造血微环境在白血病的发生发展中扮演什么角色研究甚少。而白血病细胞象正常造血细胞一样,依赖造血微环境存活。骨髓基质细胞是造血微环境的主要成分,通过分泌细胞因子和/或直接黏附,对正常造血具有调控作用。近年来国内外研究越来越发现它在白血病细胞恶性克隆的选择、增殖、分化、迁移和凋亡中起重要作用。通过对骨髓基质细胞和白血病细胞相互作用的研究,不仅可以使我们更深入地了解白血病的发病机制,而且可以对白血病发展过程中出现的骨髓造血抑制、白血病细胞的耐药、白血病的复发等病理现象的机制产生新的认识,为白血病治疗提出新的思路和策略。 从目前的研究结果来看,最初多采用人体外长期培养的骨髓基质细胞——一种混合的细胞体系,来研究其与白血病的关系。现在随着各种正常人骨髓基质细胞系的出现不仅为体外实验带来方便,同时也利于我们搞清楚到底是那一种基质细胞在起作用。由于大约20%急性B淋巴细胞白血病传统化疗无效,缓解后易复发,而且B淋巴细胞前体的增殖与骨髓基质细胞密切相关,所以对急慢性B型淋巴细胞白血病的研究较多, 第四军医大学博士学位论文 目前研究发现骨髓基质细胞能抑制其对化疗药物所致的凋亡,其机理可能 是通过VLA一4,5及其配体VCAM一1和ICAML一l起作用:最新研究又发 现还伴有bcl一2表达增高和caspase3活性的减低。但迄今为止,骨髓基质 细胞到底是通过什么具体的分子机制抑制白血病细胞对化疗的凋亡易感 性还不明确。对于急性髓细胞性白血病(Aeute Myeloid Leukemia,AML) 的研究目前发现,体外长期培养的正常骨髓基质细胞对AML细胞有促增 殖和向成熟粒细胞和单核细胞分化的作用;而另一研究却发现骨髓成纤维 样基质细胞在没有化疗药物时,能抑制AML细胞的集落形成,但在化疗 药物存在下,反而能促进白血病细胞的集落形成:又有研究表明,与骨髓 成纤维样基质细胞系直接接触,能抑制化疗药物引起的AML细胞的凋亡, 而且与bel一2表达强弱无关;最新文献报道一种小鼠基质细胞系能阻止 AML细胞系HL一60和病人AML细胞的化疗所致的凋亡,伴有Bcl一2家族 (bcl一2、bel一xL)的表达增高,而且可能与基质细胞分泌因子有关,这一 结果与上一个报道相左。到目前为止,均表明骨髓基质细胞对AML细胞的 存活有影响,但究竟是哪一种基质细胞起主要作用,对AML细胞凋亡易感 性和药物敏感性的影响是否像急性淋巴细胞白血病一样,是否也有凋亡相 关分子以及其他信号传导分子的参与,到底是通过直接接触还是分泌某种 因子作用大,以及相互作用后白血病细胞基因表达谱存在什么样突出改 变,目前还都不明确,故AML细胞与基质细胞相互作用及分子机理有待进 一步研究。 本实验以AML细胞系为研究对象,观察正常人骨髓成纤维样细胞系 HFCL对急性单核细胞白血病细胞系U937、急性粒细胞白血病敏感细胞 HL一60和多药耐药细胞HL一60邝CR增殖和分化的影响:观察HFCL细胞 对HL一60细胞和HL一60丹CR凋亡易感性的影响;检测HFCL细胞对HL一60 细胞基因表达谱的影响,进一步探讨HFCL细胞对HL一60细胞增殖、分 化和凋亡影响的分子机理。本实验建立了U937、HL一60和HL一60那CR细 胞与HFCL细胞的共培养模型,实验分三组分别为:①对照组:单独培 养U937、HL一60和HL一60丹CR细胞:②直接接触组:先种HFCL细胞 一3一 第四军医大学博士学位论文 48h后,再在已贴壁的HFCL细胞上直接加入悬浮生长的U937、HL一60 和HL一60邝CR细胞。③transwell组:先种HFCL细胞48h后,按millipore transweu的说明,放入transwell(孔径0.4卜m)装置,以保证培养液和可 溶性因子能上下相通,而装置内外的细胞被隔开,在transwell中加入 U937、HL一60和HL一60戊CR细胞。采用台盼蓝拒染法测定生长曲线;硝 基四氮哇蓝(NBT)确定细胞分化;流式细胞仪检测细胞周期和CDllb、 CD13、CD14、CD33细胞表面抗原进一步鉴定细胞分化:W七stem blot检 测增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuelear Antigen,pCNA)和p糖蛋白 (P一GlycoProtein,Pgp)的表达。采用瑞氏一吉姆萨染色在光镜下和叮咙橙/ 澳化乙陡(AO/EB)染色在荧光显微镜下进行形态学观察,TUNEL检测 晚期凋亡细胞,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡峰和AnnexinV阳性的早 期凋亡细胞。Westem blot检测Bel一2、活化的Caspase一3蛋白和P糖蛋白 (PgP)的表达变化。本实验采用Affymetrix公司的人类全基因组u133A 寡核昔酸微阵列基因芯片,来检测HL一60细胞与HFCL细胞共培养前后 基因表达谱的改变,并采用半定量RT-PCR、Northem blot、W七stem blot 和EUSA Kits进一步验证芯片结果。 本研究主要发现如下: 1.在正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对AML细胞系增殖和分化 影响的研究中发现,与HFCL细胞共培养96h后,U937、HL一60和 HL一60瓜CR细胞的生长受抑,且与HFC
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R733.71

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 梁蓉,陈协群,杨平地,白庆咸;蛋白激酶C抑制剂H7对HL-60/VCR细胞多药耐药的部分逆转[J];癌症;2001年12期
2 傅勤,范洪学,凌翎,王丽娟;骨髓造血基质细胞对HL—60细胞逆转分化作用的超微结构观察[J];白求恩医科大学学报;1997年05期
3 付相建,王苹,彭贤贵,张曦,孔佩艳,刘林,刘红,王庆余,陈幸华;急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响[J];重庆医学;2003年08期
4 刘天浩,林旭滨,陈运贤;基质细胞与造血干细胞移植后的造血重建[J];中国病理生理杂志;2000年05期
5 张毅,李秀森,江飞子,毛宁,唐佩弦;FLT3配基在人骨髓基质细胞系中的基因转移与表达[J];中国应用生理学杂志;2001年01期
6 马俐君,王冠军,李梁,冯凯,白慈贤,裴雪涛;阳离子脂质体介导hGM-CSF真核表达载体在骨髓基质细胞系中的表达[J];中华血液学杂志;2000年12期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏立,孔佩艳,陈幸华,彭贤贵,曾东风,常城,杨文博,刘红,刘林,王庆余,张怡;抗CXCR4单克隆抗体12G5对HL-60细胞粘附及增殖的影响[J];癌症;2004年11期
2 李忠俊,陈幸华,刘林,滕本秀,张曦,孔佩艳,王吉刚,彭贤贵,杨镇洲;白血病骨髓基质抑制化疗药物诱导的白血病细胞凋亡[J];重庆医学;2005年05期
3 李忠俊;陈幸华;;白血病原代骨髓基质细胞诱导Jurkat细胞基因差异表达研究[J];第三军医大学学报;2006年14期
4 梁蓉,黄高升,王哲,冯骥良,郭英,杨国嵘;正常人骨髓成纤维样基质细胞系对白血病细胞U937增殖的影响[J];第四军医大学学报;2003年17期
5 李杰,李薇,侯燕,马俐君;转FL、GM-CSF基因的人骨髓基质细胞促进脐血CD34~+细胞体外扩增[J];基础医学与临床;2003年06期
6 李薇,侯燕,马俐君,王冠军;转FL基因基质细胞对脐血造血干细胞的作用[J];基础医学与临床;2005年06期
7 吴清法,王立生,吴祖泽;间充质干细胞的来源及临床应用[J];军事医学科学院院刊;2002年03期
8 魏立;孔佩艳;史占忠;曾东风;陈幸华;常城;彭贤贵;张怡;刘红;;Effects of anti-CXCR_4 monoclonal antibody 12G5 on proliferation and apoptosis of human acute myelocytic leukemia cell line HL-60[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2007年01期
9 梁蓉,黄高升,王哲,冯骥良,张晓辉,杨国嵘,郭英,王娟红;pIRES2-EGFP-hBMP2载体在人骨髓基质细胞中的表达及意义[J];西北国防医学杂志;2004年03期
10 梁蓉,黄高昇,王哲,杨国嵘,郭英,张伟平,董宝侠,王娟红;HFCL细胞对U937细胞的诱导分化作用[J];细胞生物学杂志;2004年05期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 田卫卫;补虚化瘀方拮抗化疗后P388白血病小鼠骨髓抑制的作用及机制探讨[D];成都中医药大学;2001年
2 侯玲玲;间充质干细胞向神经细胞分化的研究[D];西北农林科技大学;2002年
3 赵子义;骨髓间充质干细胞构建组织工程化骨与软骨的实验研究[D];吉林大学;2005年
4 庞全海;山羊骨髓间充质干细胞的分离培养及体外分化潜能的研究[D];西北农林科技大学;2005年
5 李忠俊;白血病骨髓基质细胞对柔红霉素作用下Jurkat细胞凋亡及基因表达的影响[D];第三军医大学;2005年
6 叶霈智;浙贝母颗粒逆转急性白血病多药耐药临床研究[D];北京中医药大学;2006年
7 庄俊玲;骨髓基质细胞和黏附分子对骨髓瘤细胞生长的影响作用初探[D];中国协和医科大学;2004年
8 陆晓茜;骨髓间充质干细胞的免疫调节作用及其对GVHD影响的机制探讨[D];四川大学;2006年
9 张寅;复方浙贝颗粒配方辅助化疗提高难治性急性白血病疗效的临床研究[D];北京中医药大学;2007年
10 储真真;补肾生血方减轻化疗血液学毒性反应临床研究[D];北京中医药大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王兴凯;VEGF诱导成神经分化的间充质干细胞定向迁移研究[D];苏州大学;2011年
2 宋陆茜;骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞细胞遗传学特征的研究[D];苏州大学;2011年
3 侯翠芳;急性白血病患者骨髓中C×43的表达及其与耐药相关性研究[D];山西医科大学;2012年
4 王震;SCL、KDR和Sema3基因在白血病和再障骨髓基质细胞中的表达[D];暨南大学;2003年
5 吴秀丽;GATA-1、GATA-2和GATA-3基因在白血病和再障骨髓基质细胞中的表达[D];暨南大学;2003年
6 楼晓;人骨髓间充质干细胞支持造血的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
7 潘玉夏;急性髓系白血病患者基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)的表达及其意义[D];河北医科大学;2003年
8 王宇;益心汤对实验性心肌梗死大鼠促血管新生的研究[D];湖北中医学院;2004年
9 魏立;阻抑骨髓基质SDF-1作用对HL-60细胞增殖、凋亡及药物敏感性的影响[D];第三军医大学;2004年
10 刘啸;香菇多糖对骨髓抑制贫血小鼠造血调控的影响[D];成都中医药大学;2005年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 傅勤,范洪学,凌翎,王丽娟;骨髓造血基质细胞对HL—60细胞逆转分化作用的超微结构观察[J];白求恩医科大学学报;1997年05期
2 王欣,凌翎,王立华,范洪学;造血基质干细胞的研究(Ⅳ)骨源性造血基质细胞的性质[J];白求恩医科大学学报;1996年04期
3 李立新,汪闻裕,曹滨冬,李璐璐,王文华,陈学新,宋悦,石镌华;人类脐血与正常骨髓CFU-F特性的比较研究[J];白血病;1997年03期
4 谢荣林,王芸庆;维生素A酸诱导HL-60细胞分化后银染核仁形成区的研究[J];实验生物学报;1989年04期
5 秦凤华;谢蜀生;;IL-6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复的促进作用[J];中华血液学杂志;1998年11期
6 张明徽,陶群,曹雪涛;骨髓基质细胞对白血病细胞的直接抑制作用及其机制探讨[J];中华血液学杂志;1999年06期
7 王江方,张学光,张毅,郑列琳,刘征辉,夏学鸣,茅子均;急性淋巴细胞性白血病细胞及其骨髓基质细胞粘附分子表达和粘附行为的探讨[J];中国免疫学杂志;1996年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邱灵华,马逢顺,高瑞兰,金锦梅,谢桂丽;非转化集落来源的胎肝基质细胞系的建立及鉴定[J];中国实验血液学杂志;1999年01期
2 陈惠芹;张绪超;黄绍良;吴北燕;吴燕峰;包蓉;;人AGM区基质细胞对脐血LTC-IC的支持作用[J];中国实验血液学杂志;2006年01期
3 付劲蓉;陈惠芹;张绪超;黄绍良;周敦华;黄科;;人胚胎造血的AGM区基质细胞基因表达谱分析[J];中国实验血液学杂志;2006年04期
4 吴北燕;黄绍良;陈惠芹;张绪超;;人胚AGM区造血干/祖细胞的分离及其在含AGM区基质细胞体系中的培养[J];中国实验血液学杂志;2008年03期
5 龚伟,梅兴国,王华,王立生,章扬培;造血干/祖细胞体外扩增的最新研究进展[J];国外医学.生物医学工程分册;2005年05期
6 于晓沈,刘晓丹,刘元林,张双喜,周生,李秀森,刘兵,毛宁;TC-1基质细胞系促进逆转录病毒介导的小鼠骨髓造血细胞基因转移的实验研究[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1999年04期
7 宋献民,袁有忠,王健民,杨建民,江千里,周虹;表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系的建立及其在HL-60细胞分化过程中的作用[J];第二军医大学学报;2003年09期
8 陈燕春;于丽;刘焕彩;高海玲;赵春艳;;造血干细胞体外扩增的研究进展[J];解剖科学进展;2007年01期
9 侯晓薇;李郑武;李北兵;;白细胞介素—11的基础与临床应用[J];黑龙江医药;2003年02期
10 陈幸华;张诚;张曦;高蕾;王吉刚;孔佩艳;彭贤贵;李忠俊;;人淋巴细胞白血病细胞黏附介导耐药模型构建初探[J];第三军医大学学报;2006年23期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 贾延军;刘江;张可莹;单小燕;李伟;王丽君;刘娜;王琳;崔爽;倪雷;赵波涛;王东梅;高颂明;张志欣;;利用外周血单个核细胞生产成熟红细胞[A];中国输血协会第五届输血大会论文专集(摘要篇)[C];2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026