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《第四军医大学》 2004年
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gp350影响培养CD5~+B细胞免疫球蛋白产生及其机理的研究

王琳  
【摘要】:近年的研究中,天然免疫现象成了一个倍受瞩目的课题,作为机体天然免疫的重要组成部分,天然自身抗体(NAA)也受到了广泛的关注。NAA广泛存在于人和脊椎动物体内,具有多反应性、低亲和力、缔和性广及种属特异性差的特点。抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)是NAA的重要组成部分,在对AK auto Ab免疫学特性及生理和病理意义的大量研究中,直接或间接地发现AK auto Ab是机体正常免疫调节网络的组成部分,在维护生理状态的稳定、清理衰老细胞及代谢产物、调节免疫和抗感染等方面起到重要作用;在一些病理情况下(如银屑病、接触性皮炎等),体内AK auto Ab的组分和滴度会发生变化,而正常水平的AK auto Ab则有利于限制病情的发展,促进损伤的修复。CD5~+B细胞作为一种特殊类型的B淋巴细胞,可产生多种自身抗体,主要是多反应性、低亲和力的IgM型抗体,还可能参与胸腺细胞克隆选择,对免疫系统的成熟和自我稳定起重要的作用,在独特型网络、抗原提呈及诱导免疫耐受中也起作用。补体Ⅱ型受体CD21/CR2分子主要分布于B淋巴细胞膜上,其天然配体为C3裂解片段,同时它也是EB病毒表面包膜糖蛋白gp350/gp220、HIV-1、IL-6、TNF-α、CD23/FcεRⅡ等的结合位点,CD21/CR2与不同的配体结合,广泛参与了免疫应答、组织修复及炎症反应等过程。 现已证实补体的活化以及B细胞表面CR2的交联在先天和获得性免疫之间架起了重要的桥梁,表现为C3与B细胞CD21的 第四军医大学博士学位论文 相互作用有利于启动抗体应答反应,并对初级抗体应答反应有调 节作用,CDZI/C D35对于抗体的亲和性成熟具有重要作用,在 抗原浓度低的情况下,对于活化B细胞是至关重要的,而且 mlgM一CDZI交联有利于特异的低亲和性B细胞对T细胞依赖性 抗原和T细胞非依赖性抗原产生免疫应答。在补体研究的某些方 面也涉及天然自身抗体的相关内容,补体系统对产生NAA的 CDS十B细胞有阳性选择作用,CRI/CR2缺陷的CrZ一八小鼠腹膜 CDS+B细胞群减少。 gp350是EB病毒相应膜抗原的一个蛋白质成分,具有ADCC 的抗原决定簇,抗gp35o抗体是中和抗体,有免疫保护作用,gp35o 具有介导EB病毒吸附宿主细胞表面受体CRZ的位点,是CRZ的特 殊配体。有关gP350与人B细胞的补体C3d受体CDZI结合的工 作已有大量报道:EBV gp35o通过与CDZI结合可诱导B细胞增殖 以及IL一6的产生;以gP35O作为CRZ的配体,通过共交联mlg 和CRZ观察对B细胞的刺激,发现低浓度的抗人膜表面免疫球蛋 白IgD共交联gp350(anti一IgD一gp350)能刺激B细胞高度增殖, 这依赖于19结构和CRZ,因为CRZ抗体有效地阻止了这种增殖, 这说明将gp350连接到那些具有弱免疫原性的分子能使细胞系扩 展,并且激活那些同时结合了抗原和CRZ配体gp35o的抗原特殊 的B细胞,因此,交联gp350携带分子是提高人类对弱免疫原性 分子免疫应答的一个理想方法。而且这种方法无需外源性辅助因 子的参与就能使B细胞系扩展和激活。早先曾有人使用抗体交联 到C3d与CRZ共辘抗原的方法提高抗体应答,即抗原结合到补体 C3,如果同时交联了mlg和CD21,在低浓度抗原时就能诱导B细 胞激活,在缺少mlg情况下,以抗CDZI抗体交联B细胞CRZ同样 能诱导B细胞的增殖和分化,如果用gp35o替代C3d有很多优点, 它解决了由于注射包括补体在内的任何自身抗原可能产生的自身 抗体带来的影响,产生针对gp350的抗体是有利的,可以提供对 4 第四军医大学博士学位论文 EB病毒媒介的疾病的保护作用。 我们既往的实验证实了EBV蛋白能诱导培养的B细胞产生可 能具有NAA性质的免疫球蛋白,并推测很可能是EBVgP350活 化CDZI的结果。为了进一步验证纯化的gp35o肤段是否具有诱 导抗体产生的作用,我们对EBVgp35O肤段进行了克隆和纯化,得 到去除了EB病毒的野生型,保留了与CD21结合的gp350肤段。 国外的研究己经证实EBV gp350通过与CD21结合可诱导B细胞增 殖以及工L一6的产生是通过NF一KB途径实现的。NF一KB是一种重 要的核转录因子,参与众多基因的调控,其中包括病毒瘤基因、免 疫调节分子、白细胞粘附分子、急性期反应蛋白、细胞因子、生 长因子、转录和生长调控因子等;能够激活NF一KB的诱导因素 又分几大类:细菌产物如脂多糖(LPS),病毒或病毒产物如人类免 疫缺陷病毒(HIV),凋亡因子,HZOZ以及丫射线等。 因而,进一步研究纯化的gp350肚段是否刺激CDS+B细胞产 生具有天然自身抗体性质的免疫球蛋白及其可能的作用机理,一 方面可以验证gp35o肤段的活性,另一方面也可以从免疫系统自 我调节的整体观出发,探讨天然自身抗体的产生机理。 本实验首先检验了纯化的gp35o月太段能否刺激培养的CDS+B 细胞产生免疫球蛋白和相关的细胞因子以及刺激前后CDS十B细 胞表面标志CDZI的改变情况。在无菌条件下采集新生儿脐带血, 采用RosettesePTM方法分离出总B细胞,免疫磁珠分离得到 CDS+B细胞,将分离所得的总B、CDS+B、CDS卫三组细胞分别 用EB病毒、紫外线照射灭活的EB病毒(UV-EBV)、gP35O刺激, 于培养的第18小时起,不同时间点分别留取上清,EL
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R392

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【参考文献】
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