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《第四军医大学》 2004年
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HBV转基因小鼠孕前期及孕期应用乙肝疫苗的实验研究

雷小英  
【摘要】:乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染是母婴传播的一种主要途径,也是造成人群中大量HBV携带者的原因之一。研究表明,母血中的表面抗原(HBsAg)浓度与宫内感染发生率成正相关,即母血中的HBsAg浓度越高,宫内感染发生率越高。因而降低母血中的HBsAg浓度对于降低宫内感染发生率有重要作用。本研究运用免疫学、病理学和毒理学的技术方法,分析HBV转基因(HBVTg)鼠血清中HBsAg浓度在应用乙肝疫苗前后的变化,以及应用乙肝疫苗对孕鼠和子鼠的安全性影响,探讨应用乙肝疫苗孕期治疗的可能性,从而为孕期HBV的抗病毒治疗提供动物实验依据。 方法①14只HBV Tg雌鼠随机分为A、B两组,12只普通BALB/C雌鼠亦随机分为C、D两组。其中,A组为试验组,B、C和D组为对照组。②A、C组鼠于孕前3wk和怀孕当天分别腹腔注射乙肝疫苗10μg/只,B、D组同时腹腔注射生理盐水1mL/只。③4组雌鼠均于首次给药前、首次给药3 wk后、首次给药6 wk后采血3次,并保存血清。每组的子鼠在观察20 d后解剖处死并保存血清。④记录4组雌鼠孕期的体重、饮水量及食量,比较各组之间有无差别。⑤固相免疫放射分析(RIA)血清中的 第叨军医大学硕士学位论文 HBsAg浓度,并经重复测量分析孕鼠及其子鼠血清中HBSAg浓度 变化。⑥对A、B组鼠首次给药前、首次给药6 wk后的血清进 行HBV DNA定量检测,并分析两组的变化。⑦用乙型肝炎病毒 表面抗体诊断试剂盒检测A、C组给药后所收集的两次血清及其 子鼠的血清,并分析表面抗原抗体(抗一HBs)有无产生及产生 水平的差异。⑧对每组的部分孕鼠解剖,连同活胎仔一起进行 毒理学的安全性检查,比较用药组与对照组有无差别;对自然 分娩的子鼠进行生长发育观察。⑨应用HE染色的方法,对每组 剖解的母鼠的肝、脾、肾及胎盘组织进行病理学检查,观察有 无组织、细胞的异常改变。⑩在统计学软件SPSS 11 .5中进行 单因素方差分析、t检验、卡方检验和重复测量分析,在 Mi erosoft Exeel中制图。 结果①给药前A、B、C和D4组母鼠的平均体重分别为25.16 士2.359、25.87士1.219、24.12士2.299和24. 68士1.279,通过 单因素方差分析,4组雌鼠体重总体无明显差别(P0 .05)②A、 B两组HBVTg鼠用药前的血清HBsAg浓度分别为130.76士 37.89ng/mL和243.07士83.30ng/mL,通过t检验,两组之间无显 著性差异(P0 .05)。③A、B两组转基因鼠三次血清的HBsAg平 均浓度按首次用药前、首次用药后3 wk、首次用药后6 wk的顺 序分别为A组:130.76士37.89ng/mL、 148.93士41.58ng/mL、 159.36士79.15ng/mL;B组:143.07士83.30ng/mL、195.92士 114.24ng/mL、168.57士112.22ng/mL。经重复测量分析,A、B 组间因素效应无差异,组内三次不同时间的血清HBsAg浓度均数 的差异无统计学意义,组内因素与组间因素亦无交互效应 (Pi llai’5 Traee法,P)0.05)。而子鼠中,A组30只有 14只HBsAg 阴性,B组29只中有10只HBsAg阴性。经x’检验,A、B两组子鼠 HBsAg转阴率无差异。④A、B组鼠血清中HBV DNA用药前后变化 不明显。⑤A、C组鼠首次给药后3 wk、首次给药后6 wk均有部 分鼠血清抗一HBs阳性,,两组鼠抗一HBs阳性率无差异(fisher精 3 第叨军医大学硕士学位论文 确检验,P0 .05)。其子鼠中均未检测到抗一HBs。⑥每组鼠孕 12d一孕17d每天饮水量约为9~10ml,孕12d~孕17d的每天食量 约为8一99,各组鼠的饮水量、食量从孕12d一孕17d没有明显变 化。体重从孕0d~孕18d每隔2d统计一次,随孕期增加呈明显增 长,但各组之间的这三个统计量无明显差异(P0 .05)。⑦解剖 后的孕鼠所怀胎鼠外观形态正常,内脏检查、骨骼畸形检查均 正常。各组孕鼠的黄体数、胎窝总重、胎盘总重、胎仔总重、 活胎数的总体均数比较无差异(P0 .05)。剩余的各组孕鼠平均 产仔数分别为A:9只、B:7只、C:8只、D:9只,总体均数无差异 (P0.05);胎鼠体重分别为A:1.49、B:1.39、C:1.29、D:1.29, 总体均数无差异(P0.05)。⑧各组出生后的子鼠一般健康良好, 行为正常,出生后5d、10d、15d、20d的平均体重总体均数比较 均无差异(P0.05)。对小鼠的张耳天数、出毛天数、开眼天数 纪录后统计,各组小鼠在这三方面的情况基本一致,分别约为 出生后4d、6d、巧d。⑨经病理学检查,未发现各组孕鼠的肝、 脾、肾及胎盘组织有异常病理改变。 结论①孕期注射较大剂量的乙肝疫苗不会对小鼠母胎产 生明显的药物急性毒副作用。②经注射乙肝疫苗,母鼠血清中 HBsAg浓度、HBv DNA未见明显下降,提示乙肝疫苗用于小鼠孕 期的HBV的治疗效果不明显,但不排除乙肝疫苗作用的时间较短 或HBv Tg鼠体内HBV突变的可能。③无论是HBv Tg鼠还是普通鼠 都可经较大剂量的乙肝疫苗诱导产生相应抗体,但其子鼠均未 检测到抗一HBs,提示注射rHBv可诱导感染HBV的机体产生相应抗 体,但抗一HBs能否胎盘到达胎体还需进一步研究。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R392

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