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《第四军医大学》 2004年
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人TNF-α自体疫苗的研究

万一  
【摘要】:研究背景TNF-α是一种具有复杂生物活性的细胞因子,它主要由巨噬细胞和T细胞产生。该物质除了能够在体内或体外杀伤肿瘤细胞外,还具有抗病毒感染、激活巨噬细胞及多形核粒细胞、促进组织相容性抗原表达、调节机体免疫机能等多种功能。但是,当肿瘤坏死因子过量表达时,它与其它炎症因子一起产生多种病理损伤,如:自身免疫性疾病,感染性疾病,恶液质等。因此,中和体内过量的TNF—α,可为上述疾病的治疗提供一条有效途径。目前,临床上通过中和体内过量的TNF—α,治疗上述疾病的药物有:TNF—α单克隆抗体和TNF—α可溶性受体。但是,这些药物存在有用药量大、需长期反复使用、易引起超敏反应的缺陷。疫苗只需少量注射就可以诱发产生抗体,可克服抗体及可溶性受体药物的缺陷。因此TNF—α疫苗是治疗此类疾病的一条有效途径。目的 观察表面呈现人TNF-α的丝状噬菌体颗粒和人TNF-α与GST融合蛋白在小鼠体内的免疫作用,为人TNF-α自体疫苗的研制奠定基础。 第四军医大学硕士学位论文 方法用噬菌体表面呈现技术,将人TNF一克隆入pCANTABSE 噬菌粒载体,使TNF一a呈现于噬菌体cpm的N末端,得到表 面呈现人TNF一Q的重组噬菌体颗粒。将人TNF一Q克隆入 pGEx一4T一融合表达载体,重组质粒转化大肠杆菌DH5a,经 IPTG诱导表达,亲合色谱法纯化,得到GST一TNF融合蛋白。 用这两种蛋白颗粒对小鼠进行免疫,观察免疫效果。 结果TNF一Q重组噬菌体的酶联免疫吸附实验,点杂交实验和 竞争抑制试验结果均表明TNF一a呈现于噬菌体cplll的N末 端,TNF一a重组噬菌体颗粒具有TNF一a的免疫反应性。表面 呈现TNF一的噬菌体颗粒对L929细胞的杀伤活性试验结果 表明,表面呈现TNF一a的噬菌体颗粒不具有人TNF一a的细 胞杀伤活性。GST一TNF融合蛋白的Western blot实验结果表 明TNF一与GST融合表达,经亲合柱纯化,获得纯度约90.4% 的融合蛋白,L929细胞杀伤活性试验结果证明GST一TNF融合 蛋白具有人TNF一Q的L929细胞杀伤活性,作为疫苗需作灭 活处理。用TNF一Q重组噬菌体颗粒和GST一TNF融合蛋白免疫 小鼠,结果表明TNF一Q重组噬菌体颗粒和GST一TNF融合蛋白 均可在小鼠体内诱发特异的鼠抗人TNF一a抗体。 结论制备了表面呈现人TNF一a的噬菌体颗粒和GST一TNF融 合蛋白。表面呈现人TNF一a的噬菌体颗粒不具有人TNF一Q 的L929细胞杀伤活性,可直接进行免疫。GST一TNF融合蛋 白具有L929细胞杀伤活性,作为疫苗成份需进行灭活处理。 噬菌体和GsT均可作为疫苗载体,在动物体内诱发特异的免 疫反应。其中,GST一TNF融合蛋白免疫诱发的抗体滴度较高, TNF一Q重组噬菌体颗粒免疫诱发的抗体滴度较低。分析原因 可能是因为TNF一a在M13呈现系统中呈现率较低,改用其他 第四军医大学硕士学位论文 的噬菌体呈现系统有望在小鼠体内诱发高滴度的鼠抗人 TNF一Q抗体。以上研究为研制TNF一a自体疫苗奠定了基础。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R392.1

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【参考文献】
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