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《第四军医大学》 2004年
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压力对人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1的影响

汤楚华  
【摘要】:健康的牙周组织是义齿修复的生理基础,而牙周组织的健康有赖于功能性咬合力的刺激。咬合力减弱时,牙周组织发生退行性变;咬合力增强时,如在生理情况下,牙周膜增厚,牙槽骨密度增加;如果超出生理限度,会出现牙周膜损伤,牙槽骨吸收。由此可见咬合力在牙周组织的改建过程中扮演着重要的角色,但是咬合力导致牙周组织损伤的内在机制仍不十分清楚。既往研究表明,人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament fibroblasts,HPLF)作为牙周膜的主体细胞在牙周组织改建过程中发挥重要作用。因此获取HPLF并研究其在应力作用下的功能变化和生物学效应,对揭示咬合创伤损伤与修复的机理有重要意义。 学者们研究发现,HPLF在机械力刺激下合成并分泌多种细胞因子在牙周组织改建中发挥重要作用。转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是损伤修复过程中的重要生物介质,在牙周膜成纤维细胞中有较强的表达。近年来研究表明,转化生长因子β1具有强大的促进牙周膜细胞产生细胞外基质的作用,参与了牙周组织发育、牙齿移动、牙周伤口的愈合和牙周组织重建等一系列生理、病理过程。但是应力对HPLF合成TGF-β1的影响尚不十分清楚。 本实验改进了HPLF原代培养方法,并在此基础上通过细胞 第四军医大学硕士学位论文 加载装置,对HPLF施加一次性压力,观察该压力对HPLF活力 及HPLF合成TGF一日1.的影响,以期进一步认识牙周膜成纤维细 胞的功能变化与压力刺激的关系。 方法和结果: 第一部分:酶消化组织块法培养人牙周膜成纤维细胞的初步 研究 采用酶消化与组织块相结合的方法处理来源于12一16岁因正 畸而拔除的第一双尖牙牙周膜组织块18例,14例获取细胞成功: 通过形态学、免疫细胞化学染色等方法鉴定所获细胞来源,倒置 相差显微镜下观察到获得的细胞呈梭形,抗波形丝蛋白染色呈阳 性,抗角蛋白染色呈阴性,细胞生长曲线呈S形,细胞倍增时间 为54.2h。证实获得的细胞符合人牙周膜成纤维细胞的形态学特征 和生物学特性,原代培养成功率为77.8%。表明酶消化组织块法 取得较高的人牙周膜成纤维细胞原代培养成功率,方法可行。 第二部分:人牙周膜成纤维细胞活力与压力的关系 本研究通过四哇盐(MTT)比色试验探讨牙周膜成纤维细胞 活力与压力的关系。 1、实验一观察HPLF活力与压力值的关系:本实验分别给予 细胞0.25MPa、0.SMPa、1 .OMPa压力作用30min后,置于C02 培养箱继续培养。在细胞受力后的第6h、12h、18h、24h、30h、 36h检测OD值。观察到0.25MPa、0.SMPa组的OD值在各个时 段与对照组无显著性差异(P0.05),1 .OMPa组同对照组相比有显 著性差异(p0 .05),表现为受力后6h细胞OD值与对照组相比有 所降低,OD值于12h明显降低,18h有所回升,24h以后与对照 组相比无显著性差异。 2、实验二观察HPLF活力与压力作用时间的关系:在实验一 结果基础上,本实验给予细胞1.OMPa压力,压力作用时间分别为 lomin、30min、50min,加载后立即置于COZ培养箱继续培养, 第四军医大学硕士学位论文 在细胞受力后的第6h、12h、18h、24h、30h、36h检测OD值。 观察到加载10min组QD值与对照组相比无显著性差异(P0.05), 加载3Omin组和加载SOmin组同对照组相比有显著性差异 (P0.05),表现为受力后6h细胞OD值有所降低,OD值于12h 明显降低,18h有所回升,24h以后与对照组无差异。加载SOmin 组与加载3omin组相比无显著性差异(p0.05)。 本组实验结果显示HPLF的活力与压力值及压力作用时间存 在一定的关系。HPLF在受到一次性压力作用后,在一定载荷及一 定加载时间内,细胞的活力随着压力值的增加、压力作用时间的 延长而有所降低,但是这种影响是可逆的。 第三部分:人牙周膜成纤维细胞合成TGF一pl与压力的关系 以酶联免疫吸附法(EUSA)观察HPLF合成TGF- pl与压 力的关系。 1、实验一观察HPLF合成TGF一pl与压力值的关系:本实验 分别给予细胞 0.25MPa、0.SMPa、l.OMPa压力作用30min后,置 于CO:培养箱继续培养。在细胞受力后6h、12h、18h、24h检测 培养上清中TGF一pl含量。观察到0.25Mpa、o.SMPa组TGF一pl 含量与对照组无显著性差异(p0.05),1.OMPa组同对照组相比有 显著性差异(P0.05),表现为细胞受力后的第12h,TGF一pl含量 较对照组显著降低:在第18h、24h,1.OMPa组 TGF一pl含量回 升,与对照组无显著性差异。 2、实验二观察HPLF合成TGF一pl与压力作用时间的关系: 本实验给予细胞1.OMPa压力,压力作用时间分别为10min、30min、 50min,细胞经压力刺激后,置于cOZ培养箱继续培养,分别于细 胞受力后的第6h、12h、18h、24h检测培养上清中TGF一pl含量。 观察到加载10min组TGF- pl含量与对照组相比无显著性差异 (p0.05);加载30min组和加载50min组与对照组相比有显著性差 异(P0.05),表现为细胞在受力后的第12h,TGF一日1含量较对照 第四军医大学硕士学位论文 组显著降低,在第18h、24h,TGF一pl含量回升,与对照组无显 著性差异。 本组实验结果表明HPLF合成TGF一pl受到机械压力的调控,
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R780.2

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【二级参考文献】
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