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TGF-β1转基因牙龈成纤维细胞生物学特性及其胞内信号转导的初步研究

许杰  
【摘要】:修复与重建因牙周病丧失的牙周组织难度很大,要实现牙槽骨、牙骨质和牙周膜的完全功能性再生一直是牙周病学领域研究的热点。近年来随着组织工程技术和基因治疗技术的不断深入发展,有实验表明:通过转基因技术,牙龈成纤维细胞(gingival fibroblast,GF)既能获得新的生物学特性,又能为活体中的组织提供稳定持续的重组蛋白,有望成为诱导牙周组织再生的一种理想种子细胞。 本实验通过基因转染,将TGF-β1基因导入GF,观察转基因GF生物学特性以及TGF-β受体和Smad2/3蛋白的表达情况,初步了解转基因GF中TGF-β1信号转导途径;还观察了牙周致病因子内毒素(lipopolysaccharide,LPS)作用下,转基因GF生物学特性的改变,为将TGF-β1应用于牙周病的基因治疗,也为TGF-β1转基因GF能成为牙周组织工程理想的种子细胞作进一步论证。实验分以下几个部分: 1.将pcDNA3.0-TGF-β1重组质粒转化感受态大肠杆菌DH5α,扩增后以碱裂解法提取重组质粒,双酶切鉴定阳性重组子。体外培养人GF及人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells,PDLCs),利用阳离子脂质体(Lipofectamine)将TGF-β1基因转染至GF中,


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