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《第四军医大学》 2006年
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腺病毒介导的mCbfa1基因治疗骨缺损的实验研究

张勇  
【摘要】:目的 以AdEasy腺病毒表达系统制备携带Cbfa1基因的高滴度腺病毒,感染小鼠成肌细胞C2C12,利用外源性基因编码的生长因子诱导其表达成骨细胞表型。再将感染的C2C12与高分子生物材料chronOS支架相复合,在体外构建组织工程化骨,移植修复小鼠股骨骨缺损,观察该方法的可行性和有效性,以期找到一种较好的修复骨缺损的方法。 方法 (1)将小鼠Cbfa1基因cDNA克隆到穿梭载体形成转移质粒pAdTrack-CMV-Cbfa1,经PmeⅠ酶切线性化后与骨架质粒感受态细胞AdEasier-1 Cells经电穿孔法同源重组得到腺病毒质粒pAdCbfa1并酶切鉴定,PacⅠ酶切线性化后感染293细胞包装后获得复制缺陷型重组腺病毒AdCbfa1。(2)以复制缺陷重组腺病毒介导小鼠Cbfa1基因感染C2C12后,以MTT法及流式细胞仪观察感染对细胞增殖活力及细胞周期的影响;用RT-PCR法、免疫组化染色以及Westernblot证实转基因C2C12的Cbfa1蛋白和Ⅰ型胶原的表达情况;通过改良Gomori钙钴法及ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性;通过放免分析试剂盒检测两组细胞的骨钙素(osteocalcin,OCN)含量。(3)制备孔径为150~300μm,孔隙率为90%的chronOS与腺病毒感染后的C2C12
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R681

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