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《第四军医大学》 2007年
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TLR4 siRNA防治D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝损伤的实验研究

徐哲  
【摘要】: 由病毒性肝炎、酗酒、服用肝毒性药物或其它多种原因所致的肝功能衰竭是临床常见危重症,每年发病数以百万计。目前的综合治疗措施仅能使其病死率降至60%,而生物人工肝支持系统和肝细胞移植的应用虽然能够进一步提高患者的生存率,但肝移植仍然是目前唯一能明显改善患者预后的治疗措施。由于供肝来源受限、手术费用昂贵以及术后须长期服用免疫抑制剂等,大部分患者还无法接受肝移植治疗,寻找新的肝衰竭防治方法势在必行。 肠源性内毒素血症在肝衰竭的发病机制中扮演着重要的角色。肝衰竭动物模型和临床研究表明内毒素血症和肝损伤有密切关联。肠源性内毒素血症通常可导致过度的炎症反应、肝坏死、肝脏炎症加剧甚至肝功能衰竭。 内毒素由脂多糖(LPS)和蛋白质组成,LPS是内毒素的主要活性成分,有着重要的病理生理功能。TLR4是LPS信号转导的关键受体。调控TLR4的表达有可能控制LPS有关的炎症反应。然而,目前支持此推论的体内研究证据较少。因此,有必要进行体内TLR4基因表达调控治疗的研究。 RNA干扰是转录后基因沉默的有力工具。本研究基于pSilencer 4.1-CMV neo siRNA表达载体,设计并构建了TLR4 siRNA表达载体。通过转染RAW264.7细胞评估其基因沉默效率,进一步在小鼠肝损伤模型中评价TLR4基因沉默的治疗效果。实验结果如下: 1.双酶切及测序证实重组载体构建成功;体外实验表明,RAW264.7细胞中TLR4 mRNA及蛋白水平均明显降低;TLR4 siRNA明显抑制LPS对TNF-α及MIP-2表达的上调作用,LPS对p38-MAPK及ERK1/2的活化作用亦被TLR4 siRNA显著下调。 2. D-GalN/LPS联合给药前48小时及24小时TLR4 siRNA预处理可明显降低ALT及AST的升高幅度,TNF-α及MIP-2的mRNA及细胞因子水平亦被抑制,TUNEL阳性肝细胞百分率下降。TLR4 siRNA预处理可明显减轻D-GalN/LPS对C57BL/6小鼠的肝损害作用,降低小鼠的死亡率。 结论 通过TLR4 siRNA阻断TLR4表达可能有助于控制LPS炎性反应,防治肝损伤。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R575

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