收藏本站
《第四军医大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

低氧干预后G1/S期增殖型HKC抑制成纤维细胞生长的研究

何丽洁  
【摘要】: 肾功能衰竭是各种急慢性肾脏损害所致一种临床危重症,肾小管萎缩和间质纤维化是其发生以及进行性恶化的主要危险因素之一,而肾小管萎缩和肾间质纤维化的发生与非适应性肾小管重塑密切相关。如能阐明肾小管重塑的过程及损伤后再生修复机制,则可采取相应干预措施,防止肾小管萎缩和间质纤维化的发生,为进一步预防肾功能衰竭的发生奠定基础。 生长发育中的肾脏,受细胞周期循环调控而进行细胞发展方向的“筛选”。增殖、凋亡、增生和分化细胞群常常共存于正常的肾小管细胞群体中,在正常生长条件下通过以增殖细胞为多数比例的动态平衡来保证肾小管正常的生长发育。G1/S期的“筛选”功能,被认为是细胞周期循环中最重要的环节。成熟肾小管上皮细胞(RTEs)在生理状态下,很少逆转入胚胎发育时期的细胞周期行为,但在病理性损伤时,RTEs则发生类胚胎发育的损伤后再修复过程。在缺血缺氧性肾小管损伤早期,低氧损伤具有细胞“同步化”作用,诱导分化状态的RTEs进入细胞周期,并停滞在G1/S期,进行增殖或凋亡的“筛选”,使那些“健康存活”的RTEs通过启动S期脱氧核糖核酸(DNA)合成而进入细胞增殖周期。因此,我们推断低氧等病理损伤后受G1/S期所“筛选”的增殖RTEs具有在“率领”整个肾小管组织细胞群体定向启动适应性再生修复的过程中,势必会同时抑制成纤维细胞(Fb)的增殖。为此,本研究通过模拟受低氧干预的停留在G1/S期的即将发生增殖的RTEs与Fb共同培养,研究增殖型G1/S期RTEs对Fb的抑制作用,以验证我们的论点。为进一步研G1究/S期HKC启动成熟肾小管损伤后再生修复机制以及临床早期干预非适应性肾小管萎缩和肾间质纤维化所致的肾功能衰竭奠定基础。 【目的】 本研究通过模拟受低氧干预的停留在G1/S期的即将发生增殖的RTEs与Fb共同培养,研究增殖型G1/S期RTEs对Fb的生长抑制作用,以论证低氧损伤后G1/S期所“筛选”的增殖RTEs具有“率领”整个肾小管细胞群体抑制成纤维细胞(Fb)的增殖,进而定向启动适应性再生修复的作用。 【方法】 1、建立人肾小管上皮细胞系(HHHKKC)无血清饥饿法同步化的方法采用血清饥饿的同步化方法,探讨将HKC同步化于G0/G1期时最佳的同步化时间和胎牛血清浓度,并通过流式细胞术及细胞免疫化学方法验证同步化结果。 2、建立低氧条件下HKC发生G1//S期阻滞的方法分别在低氧与正常氧条件下培养同步化于G0/G1期的HKC,采用过流式细胞术、细胞免疫化学、Westernblot及电镜方法探讨低氧对细胞周期进程的干预作用。 3、探讨增殖型G1/S期HKC对WI-38细胞(人胚胎肺成纤维细胞)生长的抑制作用 利用Transwell体外共同培养体系,将低氧干预后停滞于G1/S期的HKC与WI-38细胞共同培养,通过Westernblot检测WI-38细胞系中PCNA及CyclinD1变化,探讨受低氧干预后停滞于G1/S期的增殖型HKC对WI-38细胞生长的抑制作用。 【结果】 1、采用0.1%胎牛血清培养48h为HKC血清饥饿法的最佳同步化条件采用0%和0.1%胎牛血清的DMEM培养液分别培养24h、48h和72h后,经流式细胞术检测显示采用0%和0.1%胎牛血清的DMEM培养液在培养48h时,HKC的G0/G1比例分别为(90.9±0.9)%和(93.6±2.0)%,与对照组比较有显著差异(P0.05)。MTT生长曲线结果显示0.1%胎牛血清比0%胎牛血清同步化后HKC恢复正常培养的生长曲线更接近于正常HKC生长曲线,表明0.1%胎牛血清同步化对HKC生长影响较小。Brdu免疫细胞化学染色结果与流式细胞术结果相同。 2、同步化处理后的HHHKKC在低氧条件下培养可发生GGG111//S期阻滞通过流式细胞术检测低氧和正常氧条件下同步化处理后的HKC细胞周期时相分布率的对比,提示在低氧培养12~16h时,同步化处理后HKC停留在G1/S期。 Westernbolt方法证实,与对照组相比,同步化处理后的HKC在低氧培养12~16h时细胞高表达cdk2和CyclinE,证实其处于G1/S期。PCNA免疫细胞化学方法证实在同步化处理后的HKC在低氧培养12~16h具有较强的增殖性。电镜观察HKC在G1/S期选择时段未见明显凋亡现象。 3、低氧干预后停滞在G1/S期RTEs抑制WI-38细胞生长同步化处理及低氧干预后阻滞于G1/S期的HKC与WI-38细胞共培养后,Westernblot检测结果表明WI-38蛋白提取物中PCNA和CyclinD1表达与对照组相比有所下调,而非同步化及低氧处理的HKC与WI-38细胞共培养后,PCNA和CyclinD1表达无显著变化。因此提示低氧干预后停滞在G1/S期的RTEs有抑制Fb的作用。 【结论】 经过血清饥饿同步化方法处理,在低氧干预后处于G1/S期的增殖型RTEs具有抑制Fb生长的作用。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R692.5

免费申请
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 邹艳,董文斌,翟雪松,唐章华,陈书琴,陈红英;新生鼠窒息后肾组织中钙离子的变化及意义[J];中国当代儿科杂志;2002年05期
2 董文斌,杭永伦,陈红英,唐章华,陈书琴,王兴勇,邹艳;窒息新生儿尿中尿酸/肌酐比值的变化及意义[J];中国当代儿科杂志;2002年05期
3 沈青,姚裕家,熊英,王峥,杨欣伟,曹玉红,张国成,潘凯丽;低氧对新生猪G_1/S期肾小管上皮细胞增殖周期的影响[J];中国当代儿科杂志;2004年04期
4 沈青,杨存明,张国成,姚裕家,付雪梅;过量胸苷对细胞周期素表达的影响[J];第四军医大学学报;2003年06期
5 田少江;肾小管上皮细胞在肾间质纤维化中的作用[J];国外医学.泌尿系统分册;2002年04期
6 沈青,杨欣伟,汪清,陈威,王汉民,孙世仁,刘宏宝;肾小管上皮细胞S期细胞凋亡过度与G_1/S细胞低氧暴露的关系[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2005年05期
7 李彪;肾小管上皮细胞在肾间质纤维化中的作用[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2004年01期
8 刘志春,李六金,杨贵忠,朱德生,张生勇,张华平;同步化处理对熊成纤维细胞周期影响的流式细胞仪分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2003年03期
9 宋春娇,吕冰洁,张小玲,史忠诚,傅松滨,李璞,李钰;血清饥饿法用于细胞周期同步化的方法学研究[J];中国地方病学杂志;2003年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王启新,何玲,江英,陈丽萍;三七皂甙治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床研究[J];中国当代儿科杂志;2003年02期
2 沈青,姚裕家,熊英,王峥,杨欣伟,曹玉红,张国成,潘凯丽;低氧对新生猪G_1/S期肾小管上皮细胞增殖周期的影响[J];中国当代儿科杂志;2004年04期
3 沈青,姚裕家,李如英,丁翠玲,侯立朝,孙绪德;斑蝥素对G_1/S期肾小管上皮细胞ATP的调节[J];第一军医大学学报;2004年10期
4 张瑶;于力;张蕾;张建青;;TGF-β1和CTGF在大鼠肾小球硬化模型中的表达及意义[J];广东医学;2010年06期
5 陈韬,苏建明,章怀云,文祝友,何燕林,戴振炎;基因组步行法扩增Artemin基因上游调控序列[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2003年03期
6 陈韬;Artemin在大肠杆菌中的表达及寡聚体的电镜观察[J];湖南农业大学学报(自然科学版);2005年03期
7 岳美娥;牛翔;;高效液相色谱法测定卤虫卵中海藻糖和甘油的含量[J];化学试剂;2009年05期
8 简维雄,毛以林,刘新祥,梁谋,毕学凤;肾安汤对原发性肾病综合征肾小管的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2005年06期
9 张继波;彭亚军;何泽云;李扬;李松庭;崔晓艳;刘芳杰;陈燕华;;六味地黄汤对UUO大鼠肾组织Fas和FasL表达的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2011年02期
10 吴明松;罗素元;王大忠;李晓东;汤贤春;凌锌;;复方瑞康欣对吗啡依赖人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞[Ca~(2+)]_i的影响[J];北京中医药大学学报;2006年12期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 孔宁;高继明;马玉萍;赵钦;王承宝;肖一红;周恩民;;高致病性PRRSV感染处于不同细胞周期Marc-145细胞的比较分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 金光;海洋拮抗菌JG1的分离鉴定、应用及热激蛋白DnaK的保护机制初探[D];中国海洋大学;2010年
2 陈韬;卤虫EST数据库的建立以及artemin和铁蛋白的分子特性[D];湖南农业大学;2002年
3 焦传珍;编码中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)和凡钠对虾(Litopenaeus vannamei)一种HSP70的cDNA研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2003年
4 甘卫华;AP-1 decoy寡核苷酸对肾小管上皮细胞生物学行为及其病理炎性效应影响的体外研究[D];南京医科大学;2004年
5 王兵;中国对虾免疫相关基因和性别相关核酸片段研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2003年
6 杨艳娟;结缔组织生长因子在低氧性肺动脉高压中的作用[D];四川大学;2007年
7 王素凤;不同种群卤虫卵耐热性比较及其内在机制的探讨[D];中国海洋大学;2007年
8 严兴荣;小鼠卵母细胞父系遗传背景对核移植和孤雌胚胎发育的影响[D];西北农林科技大学;2008年
9 朱晓静;AMP激活的蛋白激酶在卤虫发育过程和应激条件下的分子特征和功能研究[D];浙江大学;2008年
10 陈平洋;人巨细胞病毒感染对人胚肺成纤维细胞周期及复制前复合物的影响[D];中南大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 贺巍;慢性缺血性肾损伤中肾小管—间质细胞表型转化规律及意义的实验研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
2 孟洁;背向散射积分技术在检测慢性肾脏疾病中的应用价值[D];吉林大学;2004年
3 刘峰;乙型肝炎病毒感染与肾小球肾炎[D];山西医科大学;2004年
4 王峻松;背向散射积分技术在检测移植肾慢性排异反应中的应用价值[D];吉林大学;2007年
5 邱梅冰;HCMV感染对HEL细胞细胞周期相关因子Cdt1与Geminin表达的影响[D];中南大学;2007年
6 宫玉;百草枯中毒大鼠肾组织中ICAM-1与TGF-β_1的表达及褪黑素的治疗干预研究[D];河北医科大学;2007年
7 何斌;Gremlin对百草枯诱导肺成纤维细胞胶原合成的影响[D];四川大学;2007年
8 周怡;柄海鞘(Styela clava)活性物质的提取分离、纯化及活性研究[D];山东师范大学;2008年
9 李鑫;地塞米松对TNF-α和TRAIL双向诱导猪肾成纤维细胞增殖与凋亡作用的影响[D];西北农林科技大学;2008年
10 林喜秀;低氧训练对大鼠肾组织细胞凋亡相关因子的影响[D];湖南师范大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邹艳,董文斌,翟雪松,唐章华,陈书琴,陈红英;新生鼠窒息后肾组织中钙离子的变化及意义[J];中国当代儿科杂志;2002年05期
2 董文斌,杭永伦,陈红英,唐章华,陈书琴,王兴勇,邹艳;窒息新生儿尿中尿酸/肌酐比值的变化及意义[J];中国当代儿科杂志;2002年05期
3 沈青,姚裕家,熊英,王峥,杨欣伟,曹玉红,张国成,潘凯丽;低氧对新生猪G_1/S期肾小管上皮细胞增殖周期的影响[J];中国当代儿科杂志;2004年04期
4 沈青,杨存明,张国成,姚裕家,付雪梅;过量胸苷对细胞周期素表达的影响[J];第四军医大学学报;2003年06期
5 沈青,姚裕家,熊英,王峥;新生猪肾近曲小管上皮细胞的体外培养与鉴定[J];华西医科大学学报;2002年03期
6 沙继宏,叶煦亭,郑尊,于秉学,窦宏,魏尧梅;大鼠肾缺血与再灌时近曲小管上皮细胞内钙含量变化[J];基础医学与临床;1997年01期
7 盘强文,冉兵,张春来,李莉华,黄珀;内皮素、降钙素基因相关肽及钙离子在缺血再灌流肾损伤中的作用研究[J];泸州医学院学报;1998年03期
8 杨树龙,冯志强,邬丽莎,李莉华;急性缺血再灌流肾损伤的机理研究[J];泸州医学院学报;1999年02期
9 王伟铭,陈楠,董德长;Lazaroid对低氧致肾小管上皮细胞凋亡的保护作用[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2001年04期
10 刘晓城,唐望先,汪琼玲;三磷酸肌醇在兔急性肾缺血及再灌流损伤中的作用[J];同济医科大学学报;1996年05期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜宏举;刘秉慈;汤宁;史香林;黄传书;高艾;沈福海;叶萌;尤宝荣;;Cyclin D1和CDK4正性调节苯并(a)芘所致人胚肺成纤维细胞周期改变[J];卫生研究;2008年04期
2 田雪飞;范学工;黄燕;张艳;朱才;;感染幽门螺杆菌小鼠肝组织Cyclin D1和PCNA的表达[J];世界华人消化杂志;2006年14期
3 梁卫江;张万岱;陈村龙;姚永莉;罗荣城;;TGFα对胃癌细胞cyclin E和cyclin D1表达的影响[J];南方医科大学学报;2006年08期
4 朱丽霞;席青松;王晶;陈华先;王芳;张琼;王伟;;大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元和星形胶质细胞的动态变化及Cyclin D1表达的差异[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2008年04期
5 邱勇;;星形细胞瘤复发前后Cyclin D1、Cyclin E的表达研究[J];中国现代医生;2010年31期
6 沈鸿彬;穆芳;郑发著;张利;王雷;;食管鳞状细胞癌中PCNA及突变型P53蛋白的表达及其意义[J];河北医药;2011年10期
7 田蕾;孙洞箫;;p21和PCNA在大鼠肾缺血再灌注损伤中的表达及氟伐他汀对其表达的调节[J];中国老年学杂志;2011年13期
8 沈青,杨欣伟,汪清,陈威,王汉民,孙世仁,刘宏宝;肾小管上皮细胞S期细胞凋亡过度与G_1/S细胞低氧暴露的关系[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2005年05期
9 何丽洁;王汉民;杨桂涛;陈光磊;陈威;杨东;刘宏宝;白淑蓉;沈青;;人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年03期
10 张爱群;孙富国;徐忠华;滑树红;;Cyclin D1在子宫腺肌病中的表达及临床意义[J];军医进修学院学报;2011年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 谭玉莉;黄妍;杨亦彬;;鱼胆汁毒素致肾小管上皮细胞死亡方式及实施干预的试验研究[A];贵州省医学会肾脏病学分会2008年学术年会论文汇编[C];2008年
2 齐新永;孙泉云;刘佩红;王建;沈莉萍;李凯航;薛霞;;磺胺类药物对猪肾脏损害的病理学观察[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(上册)[C];2006年
3 王建;马丽;张洪菊;金薇娜;蔺亚妮;常国强;王立洪;李华文;庞天翔;;细胞酸碱内环境对低氧诱导的白血病细胞分化的影响及相关机制研究[A];第13届全国实验血液学会议论文摘要[C];2011年
4 樊均明;甘华山;杨宁;王宏天;李文斌;王燕翔;;阿魏酸钠对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年
5 周建华;张瑜;;MHBs~(t167)对肾小管上皮细胞膜结合型补体调节蛋白表达的影响及意义[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年
6 杜继曾;陈学群;张颖沙;刘健翔;许宁一;张家兴;;低氧下生长发育抑制与认知功能促进的调节机制[A];中国生理学会第五届比较生理学学术会议论文汇编[C];2004年
7 卢红;林丽;严晓红;王媛;任安经;;内皮素-1参与心肌细胞凋亡的研究[A];提高全民科学素质、建设创新型国家——2006中国科协年会论文集[C];2006年
8 唐嘉茵;刘东华;罗晓禾;赵丹;刘慧雯;;HIF-1α对小鼠耳缘成纤维细胞组蛋白乙酰化的影响[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
9 张大鹏;崔志刚;孔棣;;PCNA与大肠癌的相关性研究[A];第七届全国中西医结合普通外科临床及基础研究学术会议论文汇编[C];2001年
10 何敬全;赵娟娟;董其平;柴真;;低氧后HIF-1α和VEGF在皮层和海马星形胶质细胞中具有不同的表达水平[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 姚昭仪;日常护肾五要点[N];保健时报;2005年
2 ;老年人须重视保护肾脏[N];医药养生保健报;2006年
3 刘丽;肾功能检查详解[N];医药养生保健报;2008年
4 秦晓新;痛风可引起哪些肾脏损害[N];家庭医生报;2006年
5 王加祥;护肾五注意[N];民族医药报;2007年
6 向雪;老人护肾五注意[N];医药养生保健报;2008年
7 北京朝阳医院泌尿外科主任医师 张小东;活体肾移植供者多是父母[N];健康报;2008年
8 陈金伟;(二)告知患者NSAID可导致肾脏损害[N];医药经济报;2007年
9 北京体育大学科研中心教授 胡扬;低氧运动也很棒[N];健康报;2010年
10 王跃娟 孙伟;系统性红斑狼疮与肾脏损害[N];中国中医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李丽;PAX2基因沉默在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转分化中作用机制的研究[D];中国医科大学;2010年
2 何春梅;血管内皮生长因子(VEGF)对肾小管上皮—间充质细胞转化的作用及机制探讨[D];中国协和医科大学;2007年
3 王光兰;IL-1β诱导肾小管上皮细胞转分化及其与细胞骨架的关系[D];吉林大学;2010年
4 谢恺庆;C-反应蛋白在慢性肾脏病进展中的作用及机制的研究[D];南方医科大学;2010年
5 何玉华;肾康注射液对白蛋白诱导活化的肾小管上皮细胞表型转化的实验研究[D];成都中医药大学;2005年
6 汤珣;siRNA抑制CTGF表达对高糖诱导肾小管上皮细胞肥大和转分化的影响及机制[D];南方医科大学;2009年
7 聂静;衔接蛋白p66Shc对糖尿病肾病肾小管上皮细胞氧化损伤及凋亡的影响与机制研究[D];中南大学;2009年
8 裴秀丛;镉对肾小管上皮细胞E-cadherin影响及氯丙嗪和异搏定对镉毒性影响的研究[D];中国医科大学;2005年
9 宁建平;肾小管上皮细胞转分化在DN发病中的作用及大黄酸对其影响的研究[D];中南大学;2007年
10 陈书尚;肾脏局部病理改变和肾小管上皮细胞受损在肾结石形成中的作用及其机制研究[D];第二军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 何丽洁;低氧干预后G1/S期增殖型HKC抑制成纤维细胞生长的研究[D];第四军医大学;2007年
2 马少林;低剂量辐射对小鼠S180肉瘤组织Cyclin E和PCNA表达的影响[D];青岛大学;2010年
3 郝淑玲;肾上腺髓质素对低氧和转化生长因子β1促成纤维细胞增殖、胶原合成的影响及机制[D];第三军医大学;2004年
4 戴剑;CyclinA、PCNA和P27在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义[D];广西医科大学;2008年
5 李晓娜;FHL-1在低氧肺血管平滑肌细胞中的表达[D];华中科技大学;2009年
6 侯振海;单纯低氧及低氧复合运动对骨骼肌影响的实验研究[D];第一军医大学;2004年
7 刘媛;肾小球肾炎中足细胞UCH-L1的表达及其相关因素初步研究[D];复旦大学;2008年
8 李津娜;慢性阻塞性肺疾病患者睡眠低氧的影响因素的研究[D];天津医科大学;2004年
9 赵璟;IGF-Ⅱ、PCNA在子宫肌瘤中的表达及意义[D];中南大学;2010年
10 苗龙;P53、MUC2、Ki67、PCNA在胃癌及癌前病变中的表达及辅助诊断价值[D];兰州大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026