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《第四军医大学》 2008年
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肿瘤新靶点HAb18G/CD147与癌—基质的交互作用

徐静  
【摘要】: 癌症依然是威胁人类健康的重大疾病,以往对癌发生发展的研究主要以癌基因与抑癌基因为中心的思路展开,但近年来,越来越多的证据表明,癌—基质交互作用影响着癌发生发展的多个关键步骤。因此,对癌—基质交互作用的研究是目前恶性肿瘤研究领域的前沿和热点,不仅对深入理解癌发生发展的机制具有重要的理论意义,而且可为新型癌标志物及治疗性药靶分子的发现提供现实依据。 HAb18G/CD147是我室鉴定的新型肿瘤药靶分子,是CD147家族成员,属于免疫球蛋白超家族类粘附分子。在多种癌中高表达,而在正常组织不表达或极低表达。其表达可作为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者手术治疗后预后的独立预测因子;靶向该分子的放射免疫治疗剂,我室研制的国家一类新药LICARTIN,可显著抑制HCC临床进展、抑制晚期HCC患者肝移植术后的肿瘤复发转移率,并显著延长患者生存期。初步研究表明,肝癌细胞HAb18G/CD147分子可诱导成纤维细胞分泌基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs),促进肿瘤侵袭。但其抗体对该靶点的封闭作用尚不清楚,该靶点在癌—基质交互作用中的功能机制亦不明确。本研究旨在阐明HAb18G/CD147分子药靶特异性单抗HAb18抑制肿瘤侵袭的功能作用,及该靶点在促进成纤维细胞向癌—基质交互作用中主要的基质细胞类型——癌相关成纤维细胞转化中的作用,并初步探讨该药靶分子在参与癌—基质交互作用,促进肿瘤细胞迁移运动中的功能意义。实验分为三部分: 第一部分HAb18单抗靶向封闭肝癌细胞HAb18G/CD147分子的功能作用 抗体竞争结合实验显示,HAb18单抗可以有效结合HCC细胞上的HAb18G/CD147分子,以该单抗处理HCC细胞可得到与采用小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默HAb18G/CD147在HCC细胞中的表达类似的抑制效果。明胶酶谱法及人工重组基底膜侵袭小室实验显示,采用两种处理下调两株HCC细胞(FHCC-98及MHCC97-H细胞)中HAb18G/CD147分子的表达,可显著抑制HCC细胞MMPs的分泌及细胞的侵袭潜能(P 0.01);在HCC细胞与成纤维细胞的共培养体系中,细胞侵袭力较HCC细胞单培养明显增强;而下调HCC细胞中HAb18G/CD147分子的表达可显著抑制共培养体系中MMPs的分泌及细胞的侵袭潜能(P 0.01);进一步采用RNA干涉共沉默HCC细胞和/或成纤维细胞中两种主要的明胶酶MMP-2和MMP-9,发现无论是沉默HCC细胞中还是成纤维细胞中的MMPs,均会显著抑制HCC细胞与成纤维细胞共培养体系中细胞的侵袭潜能(P 0.01),但抑制成纤维细胞的MMPs较仅沉默HCC细胞中的MMPs对细胞侵袭力的影响更为显著(P 0.01);而沉默HCC细胞中HAb18G/CD147分子与共沉默HCC细胞及成纤维细胞中MMPs表达对共培养体系中细胞侵袭力的影响作用相当;以上结果提示HCC细胞相关HAb18G/CD147分子可以通过调节HCC细胞自身及其周围成纤维细胞MMPs的分泌,影响HCC细胞侵袭潜能,而其对成纤维细胞MMPs分泌的调节作用在HCC侵袭中发挥更为重要的作用,HAb18单抗可有效结合HCC细胞上的HAb18G/CD147分子并有效封闭该分子在肝癌侵袭转移中的功能。 第二部分HAb18G/CD147分子“活化”基质成纤维细胞的实验研究 α-SMA是目前较为认可的癌相关成纤维细胞的标志,明胶酶谱实验及Western-blot实验显示,HCC细胞与成纤维细胞共培养可增强共培养体系中MMPs的分泌及α-SMA的表达;而采用RNA干涉沉默HCC细胞中的HAb18G/CD147分子,可明显减少共培养体系中α-SMA的表达,提示HAb18G/CD147分子可能参与HCC细胞与成纤维细胞相互作用中诱导α-SMA表达,“活化”成纤维细胞的作用。采用重组HAb18G/CD147分子胞外全长片段rEP刺激成纤维细胞,明胶酶谱实验及Western-blot实验显示,其可诱导MMPs分泌水平上调,也可诱导成纤维细胞中α-SMA及HAb18G/CD147分子自身的表达;细胞免疫荧光实验结果显示,HCC细胞与成纤维细胞的共培养体系中,成纤维细胞表面HAb18G/CD147分子荧光强度较单培养时明显增强,rEP刺激成纤维细胞也可诱导细胞中HAb18G/CD147分子及α-SMA荧光强度增加,成纤维细胞形态呈收缩变化,提示HAb18G/CD147分子可能参与HCC细胞与成纤维细胞相互作用中诱导成纤维细胞α-SMA表达,促进成纤维细胞向具有肌成纤维细胞特点的癌旁成纤维细胞转化的作用,其在成纤维细胞中的正反馈调节用可能在这一功能中发挥作用。 第三部分HAb18G/CD147分子参与肿瘤细胞迁移运动的初步探讨 细胞迁移实验显示,采用RNA干涉法沉默HAb18G/CD147分子在HCC细胞中的表达或用其特异性单抗HAb18处理HCC细胞均可显著抑制细胞在Matrigel包被平面上的迁移速度(P 0.05);同样的处理也可显著抑制HCC细胞对Matrigel的粘附能力(P 0.05),提示HAb18G/CD147分子可参与HCC细胞与ECM或基底膜的粘附作用并参与细胞迁移运动;细胞免疫荧光实验显示,在伪足形成刺激剂TPA的诱导下,该分子可与F-肌动蛋白共定位于细胞的伪足,在CyD诱导的细胞骨架破坏情况下,该分子依然显示与F-肌动蛋白的共定位;免疫共沉淀实验显示该分子可与肌动蛋白共沉淀,提示该分子可能通过与细胞骨架蛋白的相互作用,参与细胞伪足的形成;细胞免疫荧光实验也显示,HAb18G/CD147分子与细胞迁移运动的关键调节因子膜型基质金属蛋白酶1(membrane type 1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)存在细胞水平的共定位,且免疫共沉淀实验显示两者可能存在着相互作用关系。以上结果提示,HAb18G/CD147分子可能是HCC细胞迁移运动过程中联系ECM与细胞骨架蛋白的粘附分子,其可参与细胞与ECM的粘附及细胞伪足的形成,另外,其与MT1-MMP潜在的相互作用可能在细胞迁移中发挥一定作用。 以上结果提示,HAb18G/CD147分子是参与癌—基质交互作用的重要分子。癌相关HAb18G/CD147分子对基质成纤维细胞分泌MMPs的调节在促进HCC细胞侵袭潜能的功能中发挥较其对HCC细胞自身MMPs分泌的调节更为重要的作用,其特异性单抗HAb18可有效封闭这一功能作用。本研究首次提出癌相关HAb18G/CD147分子可能参与肝癌细胞与基质成纤维细胞相互作用中对成纤维细胞的“活化”作用。并首次提出HCC细胞表面HAb18G/CD147分子参与肝癌细胞对ECM粘附、与肌动蛋白相互作用参与细胞伪足形成及其在HCC细胞迁移运动中的作用。为进一步阐明HAb18G/CD147分子这一肿瘤新靶点在癌—基质交互作用中的功能奠定基础,也为该抗肿瘤药靶分子的进一步应用提出新的思路。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R73-3

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【引证文献】
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1 张巍;AnnexinA2调节肝癌细胞荷-CD147微囊泡释放促进肝癌细胞迁移、侵袭的研究[D];第四军医大学;2010年
2 赵蒲;HAb18G/CD147和annexin Ⅱ相互作用参与调节HCC细胞骨架重排和细胞运动[D];第四军医大学;2010年
【参考文献】
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1 彭亦良;梁后杰;;癌细胞运动与迁移的分子机制[J];中国生物化学与分子生物学报;2006年10期
2 蔡阳,吴志全,樊嘉,封光华,贺斌,刘银坤,叶胜龙,汤钊猷;膜型基质金属蛋白酶-1与肝细胞癌侵袭转移性的关系[J];中华肝脏病杂志;2000年04期
【共引文献】
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1 张丽丽;周家德;邢益祥;;CD147及MMP2在宫颈上皮内瘤变组织中的表达及意义[J];安徽医学;2011年08期
2 韩金利,谢文练,黄健,姚友生;人膀胱癌组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达[J];癌症;2003年11期
3 崔伯康;张昌卿;张颖;元云飞;张亚奇;石明;陈敏山;李升平;李锦清;;骨桥蛋白检测对预测肝细胞癌转移复发的意义[J];癌症;2006年07期
4 王鲁,汤钊猷;肝癌转移复发模型的建立及其在实验性干预中的应用[J];癌症进展;2005年01期
5 叶青海;肝癌术后转移复发的预测[J];癌症进展;2005年01期
6 许传杰,李玉林,李一雷,高洪文;基质金属蛋白酶-2C端片段pex的克隆、测序及真核表达载体的构建[J];吉林大学学报(医学版);2003年05期
7 居红格;;不同病理分级的胶质瘤中CD147 mRNA的检测[J];包头医学院学报;2011年05期
8 黄修燕;黄自丽;汤钊猷;郑起;周俭;叶胜龙;;中药复方“松友饮”对高转移人肝癌裸鼠原位移植瘤的抑制作用[J];中华中医药杂志;2010年02期
9 黄修燕;黄自丽;汤钊猷;郑起;周俭;叶胜龙;;中药复方松友饮抑制姑息性肝切除术后残癌生长和转移的实验研究[J];中华中医药杂志;2010年12期
10 刘鹏飞;任强;李泽福;李建民;李勐;徐文虎;;CD147及MMP-2在胶质细胞瘤中的表达及意义[J];滨州医学院学报;2011年04期
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1 杨雪琴;李雁;;肝癌复发转移细胞与分子生物学研究进展[A];第二届湖北省肿瘤靶向治疗学术会议论文选[C];2007年
2 ;Factors Associated with Disease Survival after Surgical Resection in Chinese Patients with Hepatocellular Carcinoma[A];第四届中国肿瘤学术大会暨第五届海峡两岸肿瘤学术会议教育集[C];2006年
3 谢长生;吴良村;;养阴清热方对615小鼠HCa-F肝癌皮下移植瘤抑制作用的研究[A];浙江省中晚期肿瘤姑息治疗研讨会资料汇编[C];2007年
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1 陈雪红;海生素对肝癌的抑制作用及机制研究[D];中国海洋大学;2010年
2 柳森;中药关白附中新型MMPs抑制剂的发现及其作用的初步研究[D];吉林大学;2011年
3 唐建华;三维肝癌类组织体模型建立及肺侵袭关联蛋白筛查[D];复旦大学;2010年
4 李长煜;肝癌化疗栓塞术前后血清蛋白质组学研究[D];复旦大学;2010年
5 顾方明;IL-17对原发性肝癌生物学特性的影响及临床意义研究[D];复旦大学;2011年
6 朱海涛;乙肝相关肝细胞癌FFPE组织及血清中microRNA表达及其与肝癌预后的研究[D];复旦大学;2011年
7 刘天奇;Glut-1反义寡核苷酸对人肝癌HepG2细胞Glut-1、MMP-2、MT-MMP表达及对HepG2细胞葡萄糖吸收的影响[D];浙江大学;2011年
8 张传海;STAT3活化介导肝细胞癌上皮间质转化机制研究[D];天津医科大学;2011年
9 侯倩;黄连素诱导人肝癌细胞自噬与凋亡及分子机制研究[D];第四军医大学;2011年
10 林帆;骨桥蛋白过量表达和肝细胞癌侵袭潜能的关系及RNA干扰对其影响的基础和临床研究[D];广州医学院;2011年
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1 郭君红;卵巢上皮性癌组织中HGF、IGF-Ⅰ及MMP-2的表达[D];郑州大学;2010年
2 孙轶男;平调饮对原发性肝癌患者AFPmRNA、GPC-3mRNA影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
3 柳忠兴;CD147和Survivin在骨巨细胞瘤中的表达及其临床意义[D];泰山医学院;2010年
4 刘瑞宝;肝癌微波消融联合白介素-2治疗的实验与临床研究[D];泰山医学院;2010年
5 刘君波;留兰香油对脂多糖或猪胰弹性蛋白酶引起的肺气肿样改变及MMP-9的影响[D];浙江大学;2011年
6 王丙国;应用逆转录聚合酶链反应检测肝细胞癌淋巴结微转移的初步研究[D];桂林医学院;2010年
7 陈巧佩;转移、非转移肝癌病人血清糖蛋白聚糖组的研究[D];广西医科大学;2011年
8 胡杰;EMMPRIN在人肝癌细胞SMMC-7721中对多药耐药的调节作用[D];山西医科大学;2011年
9 邹宁;CD147蛋白和MMP-9在子宫腺肌病中的表达和意义[D];山西医科大学;2011年
10 刘燕燕;消癌平对肝癌细胞侵袭转移的体内外实验研究[D];山西医科大学;2011年
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1 萧笑;王元;张思河;;钙依赖性磷脂结合蛋白Annexin Ⅱ的研究进展[J];第四军医大学学报;2007年06期
2 陆秋涯;黄立东;陆佩华;;Annexin A2的结构和功能及其与疾病的关系[J];医学分子生物学杂志;2008年02期
3 朱晓静;张建平;刘悦芳;徐凛峰;张慧林;李玉华;陈汐敏;冯振卿;管晓虹;;钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人肝细胞癌中的表达[J];南京医科大学学报(自然科学版);2006年08期
4 刘亚伟;戴兵;梅长林;;AnnexinⅡ及其与人类疾病研究进展[J];上海医学;2007年06期
5 黄灵芝;王字玲;;CD147的研究进展[J];生物技术通讯;2007年03期
6 陈志南,刘彦仿,杨继震;抗入肝细胞癌单克隆抗体的产生及其相应抗原P60的免疫组化定位研究[J];细胞与分子免疫学杂志;1989年02期
7 陈志南,杨志,米力,蒋建利,郭晓楠;肝癌相关因子HAb18G结构和功能分析[J];细胞与分子免疫学杂志;1999年01期
8 ;第三次全国死因调查主要情况[J];中国肿瘤;2008年05期
9 郭晓楠,陈志南;肝癌膜相关抗原Hab18g为CD147分子的鉴定[J];肿瘤防治研究;2000年01期
10 ;Establishment and characterization of human hepatocellular carcinoma cell line FHCC-98[J];World Journal of Gastroenterology;2004年10期
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1 贾晋伟;AnnexinⅡ基因在肺癌组织中的表达分析及其反义表达载体对肺癌细胞生物学效应的研究[D];第三军医大学;2003年
2 张征;microRNA介导HAb18G/CD147分子转录后调控及其机制[D];第四军医大学;2009年
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1 吴亚妹;体外三维培养条件下肝癌细胞侵袭、转移的实验研究[D];第四军医大学;2008年
【二级引证文献】
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1 刘小花;Annexin A2、CD147、MMP-2在宫颈鳞癌组织中的表达及意义[D];郑州大学;2012年
【二级参考文献】
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1 汤钊猷,刘康达,薛琼,高冬梅,余业勤,周信达,马曾辰;裸小鼠原位移植建立人肝癌高转移模型[J];中华肿瘤杂志;1996年02期
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1 史久成;;环孢霉素引起牙龈增生:亚显徽结构的立体研究[J];国外医学.口腔医学分册;1989年05期
2 李秋明,宋绣雯;增殖性玻璃体视网膜病变的药物防治(一)[J];眼外伤职业眼病杂志(附眼科手术);1993年04期
3 李月娟,王德文,杨瑞彪,姚玉陆,汪宝珍,孙启鸿;射线对小鼠3T3成纤维细胞内Ⅲ型胶原含量的影响[J];中华放射医学与防护杂志;1995年06期
4 蓝平,范忠义,李宝储,刘民培,吴景天;r-干扰素和地塞米松抑制成纤维细胞的实验研究[J];中国实用眼科杂志;1996年06期
5 郑学毅,马圣清,汤秀英,张建中;体外培养硬皮病成纤维细胞的超微结构观察[J];临床皮肤科杂志;1997年03期
6 何威,刘荣卿,钟白玉;瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的实验研究[J];中华皮肤科杂志;1999年06期
7 吕小岩,李明,翁孟武;系统性硬皮病患者成纤维细胞转化生长因子β1与Ⅰ型胶原mRNA表达的研究[J];中华皮肤科杂志;2003年09期
8 刘鹏,金岩,刘源,聂鑫,赵宇,姜明,刘小英;不同种属真皮成纤维细胞在不同血清浓度培养基中生长的比较观察[J];实用口腔医学杂志;2004年01期
9 刘志国,尚影,刘旺,夏照帆,陈玉林,方之扬,岳茂兴;三维培养的人成纤维细胞增殖特性在皮肤组织工程研究中的意义[J];中国临床康复;2004年02期
10 李世荣,杨东运,刘剑毅,陈艳清,李钢,毕胜,戴霞;裸鼠模型增生瘢痕与人增生性瘢痕成纤维细胞的比较[J];中国临床康复;2004年26期
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1 贾赤宇;陈璧;;hTGFβ1基因转染对NIH3T3成纤维细胞体外增殖的影响研究[A];中华医学会第五次全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];1997年
2 沈春花;骆丹;朱洁;明亚玲;;咪喹莫特对成纤维细胞凋亡的影响[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年
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4 徐百耀;宋关斌;罗庆;秦建;石轶松;;机械拉伸诱导骨髓间充质干细胞向肌腱成纤维细胞定向分化的实验研究[A];2008年全国生物流变学与生物力学学术会议论文摘要集[C];2008年
5 吕洛;陈玉林;;hTGFβ3基因转染成纤维细胞的初步实验研究[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
6 陆毅;冯信忠;;微阵列法检测上皮愈合过程中成纤维细胞的基因变化[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
7 毕新岭;顾军;王砚宁;高顺强;;黄芩甙对成纤维细胞iNOS表达的影响[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
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1 胡其峰;世界首例胎兔体细胞克隆实验获成功[N];光明日报;2007年
2 ;烟草对牙周成纤维细胞影响的实验观察[N];中国医药报;2003年
3 张中桥;丹参素对肉芽组织成纤维细胞有抑制作用[N];中国中医药报;2005年
4 徐雯;人造生物皮肤[N];解放日报;2000年
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6 窦光宇;人造生物皮肤[N];山东科技报;2002年
7 ;几丁糖对不同来源成纤维细胞分泌细胞因子的影响[N];中国医药报;2003年
8 胡德荣;“模板缺损学说”揭示瘢痕形成机制[N];健康报;2005年
9 本报记者 李娜;专家提示:化妆品没有祛疤功效[N];北京科技报;2006年
10 陈丹;人类的断肢能“无”中生“有”吗[N];科技日报;2008年
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1 金玉怀;CCK-8对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞增殖及MMPs产生的影响及其可能作用机制的研究[D];河北医科大学;2003年
2 宋秀祖;中波紫外线辐射成纤维细胞在皮肤光老化中的作用机理探讨[D];南京医科大学;2004年
3 宋烨;转神经生长因子基因在增生性瘢痕中的作用[D];四川大学;2006年
4 徐静;肿瘤新靶点HAb18G/CD147与癌—基质的交互作用[D];第四军医大学;2008年
5 梁大宁;小干扰RNA抑制CyclinD1表达诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的研究[D];南方医科大学;2008年
6 赵春明;NGF及其受体trkA、p75在翼状胬肉中的实验研究[D];华中科技大学;2009年
7 刘东昕;体外甲床细胞培养、鉴定及组织工程甲床构建的实验研究[D];吉林大学;2006年
8 周建大;原代成体皮肤角质形成细胞、成纤维细胞的培养和转基因研究[D];中南大学;2004年
9 魏路清;阿托伐他汀对实验性肺纤维化的保护及其MMP-9、TIMP-1表达影响[D];中国医科大学;2007年
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1 赵增明;猪胚胎成纤维细胞的分离、培养与肌生成抑制素基因敲除[D];吉林大学;2006年
2 张楠心;假膜成纤维细胞诱导裸鼠骨溶解动物模型的实验研究[D];上海交通大学;2007年
3 刘露;寡霉素诱导Balb/c3T3成纤维细胞AQP1的表达[D];中国医科大学;2009年
4 刘春霞;马皮肤成纤维细胞体外培养与异质克隆胚构建[D];内蒙古农业大学;2004年
5 武多娇;炎症细胞在自发性高血压大鼠心肌纤维化中的作用及苯那普利的干预研究[D];福建医科大学;2005年
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7 王孟冬;镍钛记忆合金支架治疗兔外耳道狭窄的实验研究[D];东南大学;2005年
8 刘磊;NGF基因修饰的成纤维细胞移植修复急性脊髓损伤的试验研究[D];首都医科大学;2007年
9 李鑫;地塞米松对TNF-α和TRAIL双向诱导猪肾成纤维细胞增殖与凋亡作用的影响[D];西北农林科技大学;2008年
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