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新型自杀基因Linamarase/Linamarin系统对肝癌体外杀伤效应及其旁观者效应的初步观察研究

陈明浩  
【摘要】: 目的: 本研究旨在建立能够稳定表达外缘基因linamarase的HepG2/lis和SMMC/lis肝癌细胞株,进而研究新型自杀基因lis/lin系统对肝癌的体外杀伤效应及旁观者效应。 方法 1通过电穿孔法将重组质粒pEGFP-N1-lis和质粒pEGFP-N1转染入人肝癌细胞株HepG2和SMMC7721中,通过G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,获得HepG2/lis、HepG2/EGFP、SMMC/lis和SMMC/EGFP细胞,通过荧光显微镜进行观察,RT-PCR法进行表达鉴定。 2绘制基因修饰细胞生长曲线,观察细胞生长特性有无改变;MTT法观察高浓度lin对正常肝癌细胞HepG2和SMMC7721的细胞毒性;MTT法观察不同浓度下lin在不同时间点对HepG2/lis、HepG2/EGFP、SMMC/lis和SMMC/EGFP的细胞毒性。 3通过将不同比例的基因修饰细胞和正常细胞相混合,给与lin作用后,观察lis/lin自杀基因系统的旁观者效应。 结果: 1成功获得稳定表达lis基因的HepG2/lis和SMMC/lis细胞,荧光显微镜下观察有明显的lis-EGFP融合蛋白表达,RT-PCR鉴定证明lis基因在mRNA水平有明显表达。 2通过比较基因修饰细胞的生长曲线,证明lis基因对细胞的增殖生长没有影响;高浓度的lin对未进行基因修饰的肝癌细胞没有细胞毒性;低浓度lin对HepG2/lis及SMMC/lis细胞具有明显的细胞毒作用,即lin(100~1000mg/L)处理HepG2/lis和SMMC/lis细胞2~4天,可杀死大部分细胞。 3旁观者效应研究显示仅10%左右的HepG2/lis细胞与HepG2细胞混合培养于lin浓度为500 mg/L的培养基时,即可杀死几乎全部的细胞,显示出强大的旁观者效应。 结论: 1 lis/lin自杀基因系统在体外对肝癌细胞具有明显的杀伤作用。 2 lis/lin自杀基因系统具有强大旁观者效应。


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