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《第四军医大学》 2008年
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电压门控氯离子通道ClC-7在小鼠牙齿发育中的作用研究

苏小营  
【摘要】: 牙齿的发育是一个长期、复杂的生物学过程,包括上皮间充质相互作用、细胞分化、形态发生、组织矿化和萌出,在这一过程中有众多生物因子参与并互相协调构成调控牙齿发育的信号网络。 氯离子通道是生物体内一种重要的阴离子通道,它们在细胞膜和胞内细胞器质膜的跨膜转运中起着特定的生物学功能。最新的实验证据显示,牙齿组织中有氯离子通道存在,某些氯离子通道基因敲除小鼠模型(CFTR和ClC-5)出现了明显的牙齿结构和形态异常。ClC-7是电压门控氯离子通道家族的一个成员,在体内广泛存在。研究表明ClC-7与某些骨遗传性疾病密切相关,人们在研究Clcn7-/-小鼠的过程中发现,Clcn7-/-小鼠表现出严重的视网膜变性和骨硬化症等症状,并伴有牙齿不萌出的现象,同时在婴儿骨硬化患者中也发现了CLCN7基因的突变型。结合氯离子通道特别是ClC-7的生理功能和牙胚发育的自身特点,以及牙齿和骨在组织结构上具有的相似性,我们提出这样的假设:ClC-7可能参与了牙齿的发育过程。 本课题采用免疫组织学、原位杂交、RT-PCR和细胞培养等技术进行了以下三个部分的实验研究: 第一部分ClC-7在小鼠牙胚中的表达研究 本部分首先应用RT-PCR方法证实出生1d的小鼠牙胚中有Clcn7的表达,然后应用免疫荧光技术来确定小鼠牙胚中ClC-7蛋白表达分布模式和原位杂交的方法观察Clcn7 mRNA在小鼠牙胚中的表达。ClC-7蛋白和Clcn7 mRNA在小鼠钟状期牙胚中广泛表达。小鼠磨牙牙胚钟状早期,内釉上皮层细胞、中间层细胞、星网状层细胞、牙乳头细胞都有ClC-7阳性表达,内釉上皮层呈强阳性表达;小鼠磨牙牙胚钟状晚期,ClC-7蛋白和Clcn7 mRNA在成釉细胞、成牙本质细胞中存在阳性表达,同时在牙乳头细胞、星网状层细胞也呈阳性表达。这些实验结果说明电压门控氯离子通道ClC-7可能在牙齿发育过程中具有一定的调控作用,可能参与了成牙本质细胞、成釉细胞的生理过程。 第二部分ClC-7在牙齿相关细胞中的表达研究 本部分实验采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测了Clcn7 mRNA和ClC-7蛋白在体外培养的成釉细胞样细胞LS8、成牙本质细胞样细胞MDPC-23中的表达情况。结果表明,成釉细胞样细胞LS8、成牙本质细胞样细胞MDPC-23中都有Clcn7 mRNA和ClC-7蛋白的表达,两种细胞中Clcn7 mRNA表达水平没有显著差异,但成牙本质细胞样细胞MDPC-23中ClC-7蛋白表达水平要高于成釉细胞样细胞ClC-7蛋白表达水平。本部分结果揭示,成釉细胞样细胞LS8、成牙本质细胞样细胞MDPC-23可以做为进一步研究ClC-7参与牙齿发育调控机制的细胞模型,为今后研究ClC-7在成釉细胞、成牙本质细胞中的生理作用提供了实验基础。 第三部分ClC-7在牙乳头细胞分化中的作用研究 本部分采用原代细胞培养技术,体外培养小鼠牙乳头细胞,分为实验组和对照组,实验组同时加入终浓度为25ng/ml的M-CSF和终浓度为50ng/ml的RANKL诱导48h,对照组不加任何诱导因子,然后采用免疫荧光染色、原位杂交和RT-PCR的方法对实验组和对照组中ClC-7蛋白和Clcn7 mRNA表达进行比较。实验结果表明,加入诱导因子M-CSF和RANKL的牙乳头细胞中ClC-7蛋白和Clcn7 mRNA表达均高于对照组。本部分研究表明,M-CSF和RANKL可以提高ClC-7在牙乳头细胞中的表达水平,可能促进了牙乳头细胞的分化,但M-CSF和RANKL促进牙乳头细胞中ClC-7蛋白和Clcn7 mRNA水平升高的机制和途径有待于进一步研究,提示ClC-7可能参与了牙乳头的分化。 综合以上实验结果,ClC-7在小鼠牙胚中有特异性空间表达,并且在体外培养的成釉细胞样细胞LS8、成牙本质细胞样细胞MDPC-23也有表达,ClC-7可能参与了牙齿的发育过程;经M-CSF和RANKL诱导的牙乳头细胞ClC-7表达水平升高,揭示ClC-7可能与牙乳头细胞的分化相关。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R78

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 赵征;金岩;文玲英;;ADAM28在小鼠牙胚发育中的时空表达[J];实用口腔医学杂志;2006年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 廖圣恺;葛淑芬;承泽农;;涎腺黏液表皮样癌中5-脂氧合酶的表达及临床意义[J];蚌埠医学院学报;2009年08期
2 李静远;刘晓勇;孙涛;祁森荣;王昊;杨大海;王松灵;;牙骨质—骨化纤维瘤的X线表现及其病理学分析[J];北京口腔医学;2006年04期
3 张健;葛久禹;李升;;氢氧化钙对牙本质抗折性的影响[J];北京口腔医学;2007年06期
4 肖浩;周振;侯自斌;;藏族右侧下颌第四磨牙1例[J];北京口腔医学;2010年02期
5 车艺蕾;刘楠;;上颌第一磨牙两根管1例[J];北京口腔医学;2010年03期
6 梁丽;李艳;许多;赵守亮;;Cav1.2在大鼠磨牙牙胚发育中的时空表达[J];北京口腔医学;2010年06期
7 张瑞;黄晓峰;张方明;;核因子C(Nfic)与牙根发育[J];北京口腔医学;2011年06期
8 李长春;孙莲莲;;新生儿急性化脓性腮腺炎一例[J];包头医学;2011年02期
9 尹文新;李传福;殷建宾;;老年患者磨牙合面因过度磨耗治疗观察[J];兵团医学;2010年03期
10 朱建华;仲琳;;涎腺导管癌组织中Cox-2和EZH2的表达及意义[J];包头医学院学报;2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 王丽;陈新明;;口腔病理实验教学中学生临床素质能力培养[A];第八届全国口腔医学教育学术研讨会论文集[C];2012年
2 吴文玉;杨利峰;;犬齿龈肿物报告[A];2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张先增;脉冲激光诱导生物硬组织消融及其医疗新技术[D];福建师范大学;2010年
2 于丽;ClC-3氯离子通道在视网膜神经节细胞RGC-5凋亡中的作用研究[D];吉林大学;2011年
3 王霁雪;氯离子通道在小梁网表达及相关功能的实验研究[D];吉林大学;2010年
4 李谨;牙齿发育的信号调控机制及淫羊藿苷的干预研究[D];南京中医药大学;2010年
5 顾永春;下颌第一恒磨牙远舌根变异的形态学研究[D];第四军医大学;2011年
6 薛洋;破骨细胞功能相关分子CTSK与ClC-7的临床及基础研究[D];第四军医大学;2011年
7 孟勇;陕西出土6000年和1000年前古人牙齿结构、组成及病理特征的对比研究[D];第四军医大学;2011年
8 张蓉;牙本质涎磷蛋白在牙齿发育、矿化及牙髓损伤修复中作用的研究[D];第四军医大学;2001年
9 王旭;涎腺多形性腺瘤基因治疗的实验研究[D];河北医科大学;2005年
10 王泽君;外源性NO和衍生型NO调节血管平滑肌细胞离子通道及胞内Ca~(2+)浓度[D];中国协和医科大学;1998年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡申琳;第三磨牙解剖形态学研究[D];南京医科大学;2010年
2 林良缘;表皮生长因子受体与口腔白斑癌变关系的初步研究[D];南京医科大学;2010年
3 牛方;磷酸酯粘结剂诱导生成羟基磷灰石晶体的实验研究[D];郑州大学;2010年
4 胡淳;益气活血汤治疗口腔粘膜下纤维化的临床疗效观察[D];湖南中医药大学;2010年
5 常凯;慢性应激对Wistar大鼠牙周组织影响的实验研究[D];山西医科大学;2011年
6 李瑞青;不同能量和频率Er:YAG激光切割牙体硬组织对牙髓的生物学效应的实验研究[D];山西医科大学;2011年
7 高哲;HIF-1α和Glut-1在涎腺黏液表皮样癌中的表达和临床意义[D];山西医科大学;2011年
8 段燕;TGF-β1对IL-1β诱导人牙周膜成纤维细胞分泌HGF影响的研究[D];山西医科大学;2011年
9 程永峰;TRAF6在成釉细胞瘤中表达的研究[D];山西医科大学;2010年
10 陈俊良;成骨诱导剂对拔牙创愈合影响的实验研究[D];泸州医学院;2011年
【二级参考文献】
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1 轩昆;先天性牙根发育不良致病相关基因的克隆研究[D];第四军医大学;2004年
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1 吴甘茶;闫福华;吕红兵;;PHEX蛋白在小鼠成牙本质细胞分化过程中的定量表达[J];口腔医学研究;2008年02期
2 王捍国;艾林;侯天礼;李蓓;文军;李齐宏;卢超;;巢蛋白在大鼠牙齿发育过程中表达的免疫组化研究[J];医学理论与实践;2006年05期
3 徐彬,柏树令;TGF对牙齿发育的调节[J];解剖科学进展;2000年03期
4 侯爱兵,毕建础,杨顺生;胎儿牙齿发育的研究[J];安徽医科大学学报;1992年02期
5 ;儿童牙齿发育与补钙[J];父母必读;2001年04期
6 李玉成;金岩;史俊南;;组织工程化牙齿研究展望[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2006年04期
7 薛格艳;;孕期营养对儿童牙齿发育的影响[J];中国民族民间医药;2010年01期
8 尹积荣;杨凯;白玉兴;王邦康;;甲状旁腺素的生物信息学分析[J];口腔医学研究;2011年07期
9 耿华欧,章锦才;二恶英类化合物暴露与牙齿发育[J];国外医学.口腔医学分册;2005年03期
10 于兰;李纾;;结缔组织生长因子在口腔医学中的研究现况[J];国际口腔医学杂志;2006年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张旗;李贤玉;周密;李冉;;HtrA1在小鼠牙齿发育过程中的表达[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
2 汪成林;苏盈盈;解文博;叶玲;;肝细胞生长因子对牙乳头细胞迁移能力的影响及其机制研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
3 张彦定;黄义德;;BMP4在早期牙齿发育中的作用[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
4 金岩;;牙齿发育与牙齿再生研究进展[A];中华口腔医学会第七届全国口腔病理学术会议论文摘要汇编[C];2006年
5 余姗姗;花菲;翁雨来;蒋欣泉;;aFGF、TGFβ1及联合应用对猪牙乳头细胞增殖的影响[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
6 方厂云;曹莹;李辉莉;苏征;;大鼠牙乳头细胞复合纳米羟基磷灰石体外培养的实验研究[A];2007年第七次全国牙体牙髓病学学术会议论文集[C];2007年
7 林燕燕;林凤珠;胡雪峰;黄义德;张彦定;;Sfrp3表达下调对小鼠牙齿发育的影响[A];中国细胞生物学学会第九次会员代表大会暨青年学术大会论文摘要集[C];2007年
8 张彦定;高建民;林玮;;牙齿发育的分子机制[A];第一届《组织工程在口腔医学中的应用》研习班讲义[C];2002年
9 姜明;金岩;聂鑫;张勇杰;郝伟;刘艳;;不同复合方式对上皮参与牙齿发育的影响[A];中华口腔医学会第七届全国口腔病理学术会议论文摘要汇编[C];2006年
10 程敏;孙宏晨;王渝;臧光祥;;人牙齿发育中OSX的表达及意义[A];中华口腔医学会第七届全国口腔病理学术会议论文摘要汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 季玉光;孩子趴着睡觉 牙齿发育不好[N];保健时报;2004年
2 中原;氯离子通道助大肠杆菌抵御胃酸[N];医药经济报;2002年
3 受访专家:武警广东省总队医院耳鼻喉科副主任医师 胡海文 采写:本报记者 郭静 通讯员 王军 肖金;趴着睡觉致孩子呲牙咧嘴[N];广东科技报;2009年
4 李水银;小儿不良习惯影响牙齿发育[N];中国医药报;2001年
5 李水银;儿童牙齿发育的认识误区[N];中国中医药报;2001年
6 邢乐伟;补钙可以强健牙齿?专家提醒儿童牙齿保护误区[N];大众科技报;2006年
7 李启顺;氟斑牙的一些特点[N];家庭医生报;2008年
8 木易;婴幼儿吮手指不影响牙齿发育[N];大众卫生报;2006年
9 朱明太;远离冰毒,让人的牙齿更美观[N];健康报;2006年
10 沈汝发;补钙可以强健牙齿?专家说是误导[N];新华每日电讯;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 余擎;核心结合因子a1在牙齿发育矿化中作用机制的研究[D];第四军医大学;2002年
2 文勇;Hippo信号通路在小鼠牙齿发育中的作用研究[D];山东大学;2012年
3 张晓东;CIC-1氯离子通道亚型的克隆及相关电生理特性的研究[D];第四军医大学;2001年
4 赵征;牙胚发育中ADAM28基因的克隆、表达和功能研究[D];第四军医大学;2006年
5 吴家媛;碱性成纤维细胞因子对根尖牙乳头干细胞生物学作用及机制研究[D];第四军医大学;2011年
6 吴礼安;转录因子USF1在小鼠牙齿发育中的作用研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 白海花;蒙古族两种牙齿发育相关疾病的致病基因研究[D];内蒙古大学;2010年
8 殷丽天;东亚钳蝎氯离子通道毒素的生物活性研究[D];山西大学;2009年
9 林媛;Sonic hedgehog在牙胚发育中的作用[D];第四军医大学;2004年
10 李灿辉;青蒿素衍生物治疗脑神经胶质肿瘤的实验研究[D];广州中医药大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苏小营;电压门控氯离子通道ClC-7在小鼠牙齿发育中的作用研究[D];第四军医大学;2008年
2 倪伟嘉;利用复合有TGF-β1的微孔滤膜诱导大鼠牙乳头细胞生成牙本质的研究[D];第四军医大学;2010年
3 葛玉强;FGF8在人和小鼠牙齿中亚型分析及其对牙齿发育的影响[D];福建师范大学;2011年
4 王也;经典Wnt信号关键基因在人早期牙齿发育中的表达检测[D];福建师范大学;2011年
5 李锋;核心结合因子a1在牙齿发育中功能的研究[D];第四军医大学;2004年
6 孟丽清;利用牙髓干细胞进行牙齿再生的初步研究[D];福建师范大学;2004年
7 张珍丽;LMP-1在年轻恒牙和成熟恒牙的牙髓及牙乳头中的表达[D];中国医科大学;2010年
8 韩萍萍;sFrp2和sFrp3在小鼠磨牙发育中的作用[D];福建师范大学;2010年
9 陈冬磊;FGF通路信号分子在人类牙齿中的表达检测[D];福建师范大学;2012年
10 那思家;利用三维根端牙乳头干细胞聚合体和牙本质基质片段再生复杂牙髓组织的研究[D];佳木斯大学;2011年
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