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《第四军医大学》 2008年
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黄芩苷抑制牙周炎牙槽骨吸收的作用及机理研究

陈悦  
【摘要】: 牙周炎的破坏过程,是菌斑和宿主之间通过复杂的分子机制相互作用的结果。宿主的防御过程分为非特异性的炎症反应和特异性的免疫应答反应(包括体液免疫、细胞免疫和补体系统)。牙周炎可以说是一种由细菌引起的免疫炎症性疾病,它的发生、发展与免疫细胞及其相关因子的参与有关。 牙槽骨吸收是牙周炎的主要病理变化之一。在牙周炎的治疗中,主要为控制或消除炎症并促进组织再生。应用药物控制炎症、阻断牙槽骨吸收和促进骨再生是不可缺少的一种治疗方法。一些中草药的提取物或单体被证实具有抗炎和直接或间接的抑制破骨细胞分化和功能的作用。 黄芩苷(baicalin)是由唇形科植物黄芩(ScutellariabaicalensiGeorgi)的干燥根中提取的一种黄酮类化合物。黄芩苷是黄芩及其制剂的主要质量控制指标成分。据药理学研究报道,黄芩苷具有显著的抗炎作用,可抑制促进破骨细胞活化和功能的各种因子的产生。一系列的研究提示黄芩苷在牙周病的防治方面具有一定的应用前景。但其在药理作用的机理研究方面尚有很多工作要做。 牙周炎时,T细胞数量、活性增高,导致炎症细胞因子分泌增加,加重牙周炎症和骨吸收。TGF-β可以抑制T细胞的活性和增殖。因而设想黄芩苷的抗炎抗骨吸收的作用可能通过TGF-β起作用,而巨噬细胞是分泌TGF-β的主要来源。故此,我们提出黄芩苷抑制牙周炎牙槽骨吸收的机理可能是:通过促进巨噬细胞分泌TGF-β,从而抑制T细胞的活性、增殖和数量,导致T细胞产生的TNF等炎性因子减少,进一步引起RANKL诱导的破骨细胞形成减少,从而使牙槽骨丧失减缓或停止,牙周炎症减轻。 本实验的目的:①通过动物实验,从Micro-CT和组织学的角度研究黄芩苷对实验性牙周炎牙槽骨吸收的影响;②研究黄芩苷对巨噬细胞分泌TGF-β1的影响;③利用基因干涉技术,将TGF-β基因沉默。研究当TGF-β基因沉默后,黄芩苷是否能够使牙周膜成纤维细胞分泌RANKL/OPG的比值降低。从而证实黄芩苷是否通过TGF-β抑制T细胞的活性、增殖和数量,导致T细胞产生的TNF等炎性因子减少,进一步使牙周膜成纤维细胞分泌RANKL/OPG的比值降低。初步揭示黄芩苷的作用机理,为将黄芩苷应用于牙周病的防治提供理论和实验依据。 一.黄芩苷对实验性牙周炎牙槽骨吸收的影响 建立大鼠牙周炎模型,局部注射黄芩苷,利用micro–CT和组织学检查观察黄芩苷对实验性牙周炎牙槽骨吸收的影响。micro–CT构建出大鼠牙槽骨结构的计算机三维图像数据集,得到良好的视觉效果的同时测定骨小梁的三维结构参数,从而获得黄芩苷抑制大鼠牙周炎牙槽骨吸收的更为直观和确切的证据。结果证实黄芩苷可以有效的抑制LPS诱导的大鼠牙周炎牙槽骨的吸收, 1.0μg/ml的黄芩苷较之0.1μg/ml的黄芩苷具有更好的效果。 二.黄芩苷对巨噬细胞分泌TGF-β1的影响 体外分离培养人巨噬细胞,将不同浓度的黄芩苷加入培养液,48h后用RT-PCR、Western blot技术检测各组细胞TGFβ1表达情况。发现巨噬细胞在不同浓度黄芩苷的作用下, TGFβ1mRNA的表达和蛋白表达均随黄芩苷浓度的增加而增加(P 0.05)。其中, 1.0μg/ml浓度黄芩苷作用最为显著。本实验证实了黄芩苷可以促进巨噬细胞产生TGFβ1。 三. TGF-βⅡR特异性siRNA表达载体的构建及鉴定 根据GeneBank中报道的TGFβⅡR核苷酸序列,参考siRNA的设计原则,按照pSilencer3.1H1载体的设计要求,设计2条siRNA序列。合成的单链寡核苷酸链经退火、磷酸化后形成双链DNA,定向插入pSilencer3.1H1载体,转化感受态细胞增菌后提取质粒。DNA测序证实该重组质粒序列与所设计序列完全一致,表明针对TGF-βⅡR基因的siRNA表达载体已构建成功。为下一步研究工作的开展奠定了良好基础。 四. siRNA转染T细胞并鉴定 用成功构建的2种针对HBV基因的siRNA表达载体pSilencer3.1H1-TGF-βⅡR(1-2)转染稳定表达TGF-βⅡR的T细胞,经潮霉素筛选获得稳定的单克隆细胞株。筛选出的单克隆细胞的流式细胞分析结果和细胞生长曲线显示,细胞周期、增殖指数以及细胞生长速度与对照无显著差异,提示导入TGF-βⅡR特异性siRNA表达载体对T细胞的生长无明显影响。RT-PCR结果证实siRNA能降低TGF-βⅡR mRNA的表达。Western blot结果证实siRNA能抑制T细胞内TGF-βⅡR蛋白的合成。 五.黄芩苷对牙周膜细胞OPG-RANKL表达的影响 将正常牙周膜成纤维细胞与转染和未转染siRNA的T细胞置于加有内毒素和黄芩苷的培养液中,分为6组,观察黄芩苷对正常牙周膜成纤维细胞上OPG– RANKL表达的影响。研究结果证实黄芩苷可以降低PDLC表面RANKL/OPG比值,同时表明TGF-β的信号传导在黄芩苷影响PDLC表面的RANKL/OPG比值的过程中起到重要的作用。分析认为黄芩苷可能通过增强TGF-β对T细胞的抑制作用,引起T细胞活性降低、数量减少,导致T细胞在内毒素作用下分泌的TNF-α等炎症因子减少,降低RANKL/OPG比值,进而降低破骨细胞形成,减少骨丢失,降低牙周炎进展的危险因素。本研究还发现黄芩苷除了通过TGFβ途径外,还可能有其他的通路对PDLC表面的RANKL/OPG进行调控。 结论:黄芩苷可以有效的抑制牙周炎牙槽骨的吸收。其作用机制可能为:黄芩苷促进巨噬细胞分泌TGF-β,从而抑制T细胞的活性、增殖和数量,导致T细胞产生的TNF等炎性因子减少,进一步引起RANKL诱导的破骨细胞形成减少,从而使牙槽骨丧失减缓或停止,牙周炎症减轻。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R285.5

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王革,姜明,Seung Wook Lee,刘泓,Eric Hoffman;显微CT的锥束重建技术[J];CT理论与应用研究;2002年03期
2 陈志华,潘琳,李红艳,黎刚,徐波,王自强,朱佩平,赵天德,姜晓明,吴自玉,唐劲天,陈惟昌;X射线相位衬度显微成像的原理与进展[J];CT理论与应用研究;2005年01期
3 陈光福,虞佩兰,金立明,杨于嘉,刘运生,陶永光;黄芩甙、川芎嗪对兔感染性脑水肿与磷脂酶A_2的作用[J];中国当代儿科杂志;1999年03期
4 朱睿,张开立,邹向阳;RNA干扰(RNAi)技术及其在功能基因组学研究中的应用[J];大连医科大学学报;2003年02期
5 赵洪波,张嘉宁;RNA干扰技术的应用[J];大连医科大学学报;2003年04期
6 沈雅,彭彬;显微CT及其在根管预备中的应用[J];国外医学.口腔医学分册;2004年01期
7 黄湘雅;凌均棨;;三维影像重建技术在根管形态研究中的应用[J];国际口腔医学杂志;2006年05期
8 冯力;张国权;张国志;黄盛兴;范海东;徐天民;张锦忠;;X线、螺旋CT及双能X线骨密度测量仪对拔牙窝骨密度测量的评价[J];海南医学;2006年08期
9 俞燕,杨于嘉,陶永光,尹飞;黄芩甙、地塞米松对大鼠感染性脑水肿细胞因子的影响[J];湖南医科大学学报;2000年06期
10 曹正国,李成章,刘小平,吴献群;中药黄芩苷对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响[J];口腔医学研究;2003年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李莉;侯丽霞;施木田;吕鑫;何启伟;;番茄红素环化酶基因片段克隆及反义表达载体构建[J];山东农业科学;2009年01期
2 郜瑞;李灵君;石慧;赵霞霞;;RNA干扰及其在药物靶标识别和确证中的应用[J];安徽农学通报;2008年17期
3 万小荣;莫爱琼;杨妙贤;余土元;;植物基因沉默机制研究进展[J];安徽农业科学;2011年17期
4 张顺花;王震寰;张俊祥;沈龙山;张磊;张艳;刘志军;;大脑中央前沟的三维重建与可视化研究[J];蚌埠医学院学报;2010年09期
5 刘新敏;;李光荣教授治疗免疫性不孕症经验[J];中华中医药杂志;2012年05期
6 杨宁;王春艳;;肿瘤坏死因子α与牙周炎的关系[J];承德医学院学报;2009年02期
7 姜彤伟;金东明;;药对芩连在代谢综合征中的运用[J];长春中医药大学学报;2008年04期
8 高立宏;路云侠;柴娜;刘宝;刘立侠;;水稻转座子Pong RNAi载体的构建和农杆菌介导的遗传转化[J];东北师大学报(自然科学版);2011年02期
9 陶永光,岳少杰,俞燕,杨于嘉;清开灵对大鼠谷氨酸神经毒性脑水肿时突触体游离钙的影响[J];中国当代儿科杂志;2000年05期
10 刘杰波;炎症因子诱导星形胶质细胞凋亡及机制探讨[J];中国当代儿科杂志;2003年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 许林;王知衍;章拓;;医学数据可视化平台的研究与实现[A];第三届中国智能计算大会论文集[C];2009年
2 任慧霞;王厚全;张建国;;黄芩苷的临床与质量[A];山东省药学会第一届学术年会论文集(下)[C];2005年
3 张喜平;李宗芳;刘效恭;吴勇涛;王军宪;王康敏;周益峰;;联合应用大黄素、黄芩素对重症急性胰腺炎大鼠的疗效[A];第九届全国中西医结合普通外科学术交流大会暨胆道胰腺疾病新进展学习班论文汇编[C];2005年
4 史国富;候文明;张璐;王爱蓉;;黄金二白散的药效学研究及评价[A];现代化中药制剂发展与中药药理学研究交流会论文集[C];2009年
5 闻平;俞晓丽;陈蕾;王文凯;;黄芩素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性研究[A];现代化中药制剂发展与中药药理学研究交流会论文集[C];2009年
6 张喜平;程琪辉;沈培红;严伟;李晴宇;王飞;何勤;;黄芩苷类注射剂安全性与急性毒性实验研究[A];全国中药注射剂安全性及产业发展交流研讨会论文集[C];2009年
7 王坤;吴光;肖艳芬;余晓玲;黄燕;;绿素酊对小鼠吞噬细胞免疫功能影响的实验研究[A];全国中医药创新与发展研讨会专辑[C];2005年
8 倪竹南;华波;;黄芩现代药理研究概况[A];浙江省2005年中药学术年会论文集[C];2005年
9 刘建明;;浅谈黄芩药理作用[A];2009浙江省中药学术年会论文集[C];2009年
10 孙先枝;程建波;卜登攀;潘龙;周凌云;;黄芩苷的生物学功能和黄芩及其提取物在畜禽生产中的应用研究进展[A];第四届中国奶业大会论文集[C];2013年
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1 张金平;αv和β_1整合素通过FAK信号通路介导了Aβ对海马神经元的神经毒性作用[D];华中科技大学;2011年
2 黄永建;黄芩苷对小鼠巨细胞病毒肝炎的治疗作用及其机制研究[D];华中科技大学;2011年
3 赵冰洁;加味达原饮对急性肝损伤湿邪内蕴证模型大鼠的治疗作用研究[D];成都中医药大学;2011年
4 马志刚;RNAi沉默血管平滑肌细胞Rab5a蛋白抑制血管内膜增生的实验研究[D];复旦大学;2010年
5 申培红;siRNA对乳腺癌特异性基因表达影响及与S100A4、ETS1、VEGF、CD105基因表达关系的研究[D];郑州大学;2011年
6 何萍;黄金方治疗外感病的研究[D];中国中医科学院;2011年
7 张金平;αν和β1整合素通过FAK信号通路介导了Aβ对海马神经元的神经毒性作用[D];华中科技大学;2011年
8 杨艳;中药对大鼠炎症牙周骨组织的影响[D];湖北中医药大学;2011年
9 王泽荣;SiRNA下调Smad3基因后对大鼠HSC及大鼠四氯化碳肝纤维化模型的纤维化相关影响[D];苏州大学;2011年
10 杨江萍;柴胡—黄芩药对退热有效部位及其配伍作用机制的研究[D];北京中医药大学;2012年
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1 魏红珍;痔特佳栓剂的制备及质量控制研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 张丹;除湿饮治疗湿热型湿疹的临床观察及对血清CD4~+/CD8~+的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
3 刘晓东;通腑汤对急性肺损伤大鼠肺、肠组织TGF-β1的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
4 苏淑娟;中药灌肠联合美沙拉嗪治疗溃疡性结肠炎临床疗效及对IL-6、IL-8的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
5 杨宁;野黄芩苷对人牙周膜细胞保护作用的实验研究[D];承德医学院;2010年
6 王伟;胃康舒胶囊治疗幽门螺杆菌相关性胃溃疡的临床研究[D];山东中医药大学;2010年
7 崔璐;我国黄芩种质资源的鉴别与质量评价[D];山东中医药大学;2010年
8 何晓燕;XE泡腾片的药学部分研究[D];成都中医药大学;2010年
9 龙志晶;干扰Hes1基因对骨髓基质细胞向胆碱能神经元分化前期的影响[D];山西医科大学;2011年
10 刘彩玉;脊髓源神经干细胞诱导分化为胆碱能神经元过程中干扰Hes1的表达对关键基因的影响[D];山西医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈惟昌,张朝宗,王自强,关东旭,邱红霞;显微CT(μ-CT)-医学CT未来的发展方向[J];CT理论与应用研究;1998年03期
2 毛定安,杨于嘉,俞燕,虞佩兰,陶永光,黄榕;核因子-κB活性在大鼠脑水肿的变化及热休克反应对其影响的研究[J];中国当代儿科杂志;1999年05期
3 陈思锋,吴中立;体液和组织磷脂酶A_2简便快速测定法[J];第二军医大学学报;1989年03期
4 徐正谷,虞佩兰,李颖艳,曾庆善,沈安乡,蔡长美;百日咳菌液制作兔脑水肿模型[J];湖南医学院学报;1987年01期
5 周晓红,甄彦君,冯敬坤;黄芩研究进展[J];河北中医药学报;2000年03期
6 姜晓明,黎刚,陈志华,唐劲天;X射线衍射增强成像中的折射衬度[J];高能物理与核物理;2004年12期
7 章锦才;吉庆勇;肖卓然;张举之;;白细胞介素1对牙龈成纤维细胞增殖和前列腺素E_2产生的影响[J];口腔医学纵横;1992年04期
8 李纾,汪说之,樊明文,王燕;人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究——细胞形态、生长曲线及碱性磷酸酶活性测定[J];口腔医学纵横;2001年02期
9 王燕,汪说之,樊明文,李纾;牙周韧带细胞体外矿化的研究——骨唾蛋白与骨桥素在矿化过程中的表达[J];口腔医学纵横;2002年01期
10 曹正国,李成章,刘小平,吴献群;中药黄芩苷对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响[J];口腔医学研究;2003年01期
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1 李连珠;颌面部放线菌病1例[J];山东医药;1992年12期
2 王尤,陈东;中医辨证施治在牙周病治疗中辅助作用的研究[J];哈尔滨医药;2002年04期
3 张志勇;魏玲格;张莉;郑文选;;糖尿病大鼠牙周组织改变的实验观察[J];现代口腔医学杂志;2008年06期
4 聂莹;张志宏;;糖尿病对种植体周围骨组织的影响[J];国际口腔医学杂志;2010年04期
5 刘建平;冯晓刚;王乐;;固定桥基牙牙槽骨三侧吸收对基牙应力分布的影响[J];中国医学物理学杂志;2010年05期
6 陈艳;吴娴;张一岭;张翼;;固定桥基牙牙槽骨吸收三维有限元模型的建立[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2011年04期
7 孙鹏;贺永春;;咖啡因对大鼠正畸牙移动过程中牙槽骨改建的影响[J];同济大学学报(医学版);2011年03期
8 陶勇;;用非激素类抗炎药——氟比洛芬改变人牙槽骨吸收的进程[J];国外医学.口腔医学分册;1990年04期
9 王磊;白细胞介素6与牙周炎的关系[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2003年01期
10 刘爱莲;王国芳;张杰;王守儒;;牙周康泰胶囊对实验性牙周炎牙槽骨的影响[J];中国新药杂志;2004年S1期
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1 胡胜;倪连松;李安乐;;糖尿病大鼠牙槽骨骨密度变化相关性研究[A];创新创业与科学发展——瑞安市第十届自然科学优秀论文集[C];2011年
2 薛丽丽;杜莉;王虎;;愈合期埋植型和非埋植型种植体周围牙槽骨吸收情况观察[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
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4 杨谛;仇丽鸿;李任;贾舸;;MAPKs抑制剂对牙髓卟啉单胞菌内毒素诱导成骨细胞表达IL-1β mRNA和IL-6 mRNA的影响[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
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9 吴淑仪;李彦;乔永刚;;咬合垂直距离升高对大鼠牙周组织的影响[A];第六次全国口腔修复学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
10 常婷;丁玉梅;张汉东;;按扣式精密附着体修复牙列单侧远端缺失——附11例报告[A];中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第一次学术年会会议论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李华;科学刷牙你会吗?[N];中国劳动保障报;2003年
2 李俊山;牙周病早预防[N];保健时报;2003年
3 宋伟 康文远;第四军医大口腔医院建立牙齿保存治疗新技术[N];解放军报;2002年
4 于长环;警惕新型牙周病[N];上海中医药报;2001年
5 江锦琦;洁牙有助防治牙周病[N];中国中医药报;2001年
6 程树元;拔牙后何时镶牙最合适[N];中国中医药报;2004年
7 ;牙周病殃及心脑肺[N];大众科技报;2003年
8 北京大学人民医院口腔科 吴鹏;种植牙不能“一种了之”[N];健康报;2009年
9 ;缺牙就要镶[N];中国医药报;2004年
10 朱本浩;月经不调者易患牙周病[N];中国中医药报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 许杰;穿心莲内酯对牙周炎骨吸收的影响及其机理的实验研究[D];第四军医大学;2012年
2 马守治;人白细胞介素-10基因治疗对去卵巢大鼠实验性牙周炎发生的影响[D];福建医科大学;2011年
3 杨艳;中药对大鼠炎症牙周骨组织的影响[D];湖北中医药大学;2011年
4 张祎;牙龈卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞—破骨细胞间EphB4-ephrinB2双向传导信号的影响[D];吉林大学;2013年
5 申玉芹;寡核苷酸(ODN)促骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化作用及机制研究[D];吉林大学;2010年
6 原工杰;孕激素受体在人牙周膜细胞中的表达及孕酮对细胞增殖和成骨分化影响的研究[D];第四军医大学;2010年
7 冯元;二甲双胍对高糖环境下人牙周膜细胞及糖尿病大鼠拔牙窝愈合过程中RANKL表达的作用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
8 刘燕;雌激素对大鼠骨髓间充质干细胞炎性因子表达及骨分化能力的调控作用研究[D];第四军医大学;2010年
9 刘颍凤;α7nAChR在尼古丁相关性牙周炎中的作用及其信号转导机制研究[D];第四军医大学;2011年
10 孙静华;胃癌前病变患者口腔中龋病和牙周病相关细菌以及口腔细菌多样性的研究[D];武汉大学;2011年
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1 雷利红;1、EphrinB2/EphB4参与牙槽骨吸收过程的作用初探 2、牙周正畸联合治疗重度牙周炎病例报告[D];浙江大学;2011年
2 叶金晶;1、OPG/RANKL/RANK轴系统在牙槽骨吸收重建中的意义 2、牙周牙髓联合治疗重度牙周炎病例报告[D];浙江大学;2011年
3 兰晓敏;AutoCAD软件在牙槽骨评估中的应用研究[D];山西医科大学;2013年
4 宇空;局部注射阿仑膦酸钠抑制鼠拔牙后牙槽骨吸收的实验研究[D];吉林大学;2006年
5 谭泓;局部缓冲对磁性附着体义齿固位改善的实验研究[D];中国医科大学;2007年
6 刘大勇;VEGF在卵巢切除大鼠实验性牙周炎牙周组织表达的实验研究[D];天津医科大学;2005年
7 吴陈炫;糖尿病大鼠牙槽骨RANKL、OPG基因表达的实验研究[D];天津医科大学;2007年
8 栾明亮;内源性甲状旁腺激素在小鼠牙周炎骨吸收及颌骨缺损愈合中的作用研究[D];南京医科大学;2009年
9 王立刚;糖尿病牙周炎大鼠牙槽骨丧失的实验研究[D];新疆医科大学;2013年
10 陈艳;双基牙侧牙槽骨吸收对下颌第一第二磨牙缺失双端固定桥应力的影响[D];福建医科大学;2011年
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