收藏本站
《第四军医大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

诱导MSP58基因高表达对人脑胶质瘤细胞系生物学特性的影响

王江  
【摘要】: 脑胶质细胞瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,其发生率约占全部颅内肿瘤的30%~50%。尽管近年来在手术﹑化疗与放疗方面取得很大进步,但对胶质瘤的治疗效果并没有得到显著提高。脑胶质细胞瘤治疗困难的根本原因在于其所具有的恶性生物学特性,如胶质细胞瘤具有典型的过度增殖、极强的侵袭性等等。因此,深入揭示脑胶质细胞瘤发生与发展的分子生物学机制,阐明决定脑胶质瘤恶性生物学行为的关键基因,对于人类战胜这一顽疾具有重要的科学意义。 核微球蛋白58 (58-kDa microspherule protein,MSP58)是我们以抑癌候选基因NDRG2(N-myc down-stream regulated gene 2)为诱饵、利用酵母双杂交的方法筛选到的一个可以与NDRG2相互作用的分子。MSP58全长462个氨基酸。该分子结构中包括:核仁定位信号;一个coiled-coil domain和一个forkheadassociated domain (FHA)。目前国际上对MSP58的研究表明:MSP58的表达与细胞的增殖能力呈正相关,这个分子在细胞中表达具有明显的细胞周期相关的特点,它在细胞中过表达可以引起细胞的克隆形成能力增强及非锚着依赖生长的恶性表型,MSP58系与多种肿瘤发生过程及细胞增殖中具有相互作用的一种癌基因。 我们前期的研究发现,MSP58 mRNA和蛋白在脑胶质瘤组织中存在表达。MSP58表达在良性和恶性脑胶质瘤之间,以及脑胶质瘤Ⅰ~Ⅳ级病理级别间比较均有非常显著的差异性(p 0.01),提示MSP58在脑胶质瘤的形成和恶性演进中具有重要作用。然而对于MSP58在胶质瘤细胞系中的生物学功能和作用机制仍有待于进一步研究。 本研究探讨了MSP58分子诱导高表达对于人脑胶质瘤细胞系体外增殖、侵袭和凋亡等生物学特性的影响,为揭示MSP58分子在人脑胶质细胞瘤恶性进展中的作用提供了实验基础。本课题研究主要包括以下两个方面: 1. MSP58真核表达载体转染人脑胶质母细胞瘤细胞系U251的研究 我们在前期的研究中,针对四种最高级别恶性度的神经胶质瘤的细胞系:U215,U87,BT325,SHG44,运用RT-PCR和Western blot的实验方法,检测了MSP58 mRNA和蛋白在这四种胶质瘤细胞系中的表达情况。结果发现,MSP58在胶质瘤细胞系均有表达,并且表达量基本一致。根据这四种胶质瘤细胞系的生物学特性及转染效率等特点,我们选取了胶质瘤细胞系U251作为研究对象,根据MSP58分子的cDNA序列,运用PCR得到MSP58全长,并克隆入pCI-neo载体,构建了MSP58真核表达载体pCI-neo-MSP58,经酶切鉴定证实克隆正确。通过脂质体介导、将pCI-neo-MSP58载体和空载体pCI-neo分别转染入人脑胶质母细胞瘤细胞U251,经G418筛选,建立了稳定转染的细胞系U251-P msp58(MSP58过表达组)和U251-P neo(空载体组),经RT-PCR和Western blot检测证实U251-P msp58细胞MSP58mRNA和蛋白的表达明显上调。本部分结果提示:首次成功获得了能够稳定过表达MSP58的胶质瘤细胞系U251-P msp58,这为进一步研究MSP58表达对于胶质瘤细胞生物学特性的影响提供了良好的细胞模型。 2.诱导MSP58高表达对人脑胶质瘤细胞体外增殖及侵袭的影响 本研究观察了MSP58基因对胶质瘤细胞增殖和细胞周期的影响。实验分为U251-P msp58组(MSP58过表达组)、U251组(未转染组)和U251-P neo组(空载体组),运用流式细胞术检测细胞周期,MTT实验绘制细胞生长曲线,平板克隆形成实验和软琼脂集落形成实验测定细胞克隆形成数量。结果发现,U251-P msp58组与其他各对照组相比,G1期细胞明显减少(p0.01),S期细胞显著增多(p0.01);U251-P msp58组细胞增殖数和克隆形成数均明显高于其他各对照组(p0.01)。表明MSP58基因对胶质瘤细胞周期有重要影响,MSP58基因表达上调对细胞增殖有较为明显的促进作用。 为了探明MSP58基因与胶质瘤的侵袭和迁移能力的关系,运用经典的细胞划痕实验和Transwell侵袭小室法、就MSP58分子对细胞的迁移和侵袭能力的影响进行了研究。结果发现,U251-P msp58组的胶质瘤细胞的迁移能力明显高于其他对照组(p0.01),并且在Transwell实验中,U251-P msp58组的胶质瘤细胞能够穿过Matrigel的细胞数也明显高于其他对照组(p0.01)。从而证明上调MSP58基因的表达能够促进胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力。 本部分研究结果提示,MSP58的高表达可能与人脑胶质瘤细胞的体外增殖和侵袭等恶性生物学行为密切相关。 综上所述,本研究首次建立了具有稳定上调MSP58基因mRNA和蛋白表达的胶质瘤细胞系;阐明了MSP58基因在神经胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。作为与NDRG2相互作用的分子,本研究结果为NDRG2功能的研究开辟了新的领域,对于揭示脑胶质瘤发生与发展的分子生物学机制,阐明决定脑胶质瘤恶性生物学行为的关键基因,具有重要的科学意义;也为发展临床神经胶质瘤的治疗提供了新的靶点。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R739.4

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 沈光建,唐文渊,许民辉;脑胶质瘤的侵袭特点和治疗策略[J];中华神经医学杂志;2005年06期
2 邓艳春,药立波,刘新平,聂晓燕,王吉村,张晓光,苏成芝;人脑内一含有ACP样结构域新基因的发现[J];生物化学与生物物理进展;2001年01期
3 李剑,刘新平,林树新,邓艳春,孟庆军,张文红,李树钧,聂晓燕,药立波;一种新的抑癌候选基因——NDR2在人类正常组织及相应肿瘤中的表达[J];生物化学与生物物理进展;2002年02期
4 刘新平,邓艳春,韩炯,李剑,王吉村,李莹,药立波;Ndrg2基因表达对胃癌细胞增殖调控及其机理的研究[J];生物化学与生物物理进展;2003年01期
5 杜固宏,周良辅,毛颖;神经导航辅助胶质瘤手术[J];中华神经外科疾病研究杂志;2003年02期
6 章翔,张曦;联合基因治疗胶质瘤研究新进展[J];中华神经外科疾病研究杂志;2005年04期
7 林伟;章翔;张璟;张健;刘军叶;王西玲;;稳定整合靶向性MSP58基因RNA干涉载体的胶质瘤细胞系建立[J];中华神经外科疾病研究杂志;2007年04期
8 王江;林伟;章翔;张璟;张健;吴琳;刘新平;药立波;;MSP58基因小干扰RNA对胶质瘤细胞系U251增殖的影响[J];中华神经外科疾病研究杂志;2009年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 毛以成,陈新生;脑胶质瘤的手术治疗[J];安徽卫生职业技术学院学报;2004年01期
2 金晶;王龙胜;;病案点评[J];安徽医学;2009年12期
3 邓艳春,王吉村,刘新平,季少平,药立波;基于PCR的消减杂交法克隆脑胶质瘤肿瘤相关基因和抑癌基因[J];癌症;2005年06期
4 ;Platelet-derived growth factor receptor alpha in glioma:a bad seed[J];癌症;2011年09期
5 李蕴潜,谭岩,韩雪梅,李才;人胶质瘤MMP-2及TIMP-2 mRNA表达和酶活性的改变及其意义[J];吉林大学学报(医学版);2005年03期
6 刘鹏飞;任强;李泽福;李建民;李勐;徐文虎;;CD147及MMP-2在胶质细胞瘤中的表达及意义[J];滨州医学院学报;2011年04期
7 谢云鹏;田甜;申兴斌;王维兴;钱涛;;星形细胞瘤组织TGF-β1、Smad7与VEGF的表达及意义[J];承德医学院学报;2011年01期
8 钱银锋;殷敏敏;余永强;;扩散加权成像在低级别胶质瘤的鉴别诊断价值[J];磁共振成像;2010年01期
9 刘新新;韩晓雨;李智勇;苗延巍;;侧脑室内未成熟畸胎瘤1例MRI分析[J];磁共振成像;2010年06期
10 王斐斐;程敬亮;赵艺蕾;张勇;闫晨宇;白洁;张会霞;崔晓琳;;动态磁敏感对比MR灌注成像对脑膜瘤分级的临床价值[J];磁共振成像;2011年01期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 姜新义;陈亮岑;王霄;沙先谊;方晓玲;;基于整合素受体介导的长循环碳酸酯纳米粒对恶性脑胶质瘤靶向递药研究[A];2011年中国药学大会暨第11届中国药师周论文集[C];2011年
2 陈忠平M.D.Ph.D;;胶质瘤诊断治疗现状和努力方向[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年
3 Yuya Yoshida;Mitsutoshi Nakada;Naotoshi Sugimoto;Tomoya Harada;Yasuhiko Hayashi;Daisuke Kita;Naoyuki Uchiyama;Yutaka Hayashi;Akihiro Yachie;Yoh Takuwa;Jun-ichiro Hamada;;Sphingosine-1-phosphate receptor type 1 regulates glioma cell proliferation and correlates with patient survival[A];中国抗癌协会神经肿瘤专业委员会第八届学术会议论文集[C];2011年
4 ;Histologic research of microcirculation patterns in human and xengraft model glioblastoma[A];中国抗癌协会神经肿瘤专业委员会第八届学术会议论文集[C];2011年
5 Yuya Yoshida;Mitsutoshi Nakada;Tomoya Harada;Shingo Tanaka;Takuya Furuta;Yasuhiko Hayashi;Daisuke Kita;Naoyuki Uchiyama;Yutaka Hayashi;Jun-ichiro Hamada;;The expression level of sphingosine-1-phosphate receptor type 1 is related to MIB-1 labeling index and predicts survival of glioblastoma patients[A];中国抗癌协会神经肿瘤专业委员会第八届学术会议论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋震;神经系统肿瘤及瘤周血管的磁共振成像研究[D];苏州大学;2010年
2 别黎;跨平台整合微阵列数据筛选与胶质瘤级别相关基因的实验研究[D];吉林大学;2011年
3 王春琳;MDM4在人脑胶质母细胞瘤中的表达与功能研究[D];第二军医大学;2011年
4 陶帮宝;Stathmin在胶质细胞瘤表达及其化疗药物敏感性研究[D];第二军医大学;2011年
5 李维卿;Med19在星形细胞瘤中的表达及对其恶性生物学行为调控的实验研究[D];第二军医大学;2011年
6 赵世斗;OCT4假基因在胶质瘤和乳腺癌中的表达及其意义的研究[D];山东大学;2011年
7 彭雍;RIP3对胶质母细胞瘤细胞增殖、死亡和化疗敏感性的作用及其作用机制的研究[D];中南大学;2011年
8 陈若琨;RAS超家族基因RRP22在星形胶质瘤中的表达及对其生物学行为影响[D];中南大学;2011年
9 沈明;负性共刺激分子B7-H1在A2B5阳性人脑胶质瘤干细胞样细胞中的负性调控作用探讨[D];复旦大学;2011年
10 范薇薇;中国汉族人群脑胶质瘤遗传易感性研究[D];复旦大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨磊;鞘内注射Roscovitine缓解CCD大鼠疼痛及对脊髓背角NR2A蛋白表达的影响[D];南京医科大学;2009年
2 颜伟;人胶质瘤中骨桥蛋白功能的初步研究[D];南京医科大学;2010年
3 高庆;MMP-2、MMP-9、TIMP-2在人脑胶质瘤中的表达及意义[D];郑州大学;2010年
4 李丹;扩散张量成像对脑恶性胶质瘤和转移瘤的鉴别诊断价值研究[D];郑州大学;2010年
5 李彦辉;氯化钾诱导硫氧还蛋白和CDK5表达的分子机制[D];昆明理工大学;2009年
6 苏国军;人脑星形细胞瘤细胞体外化疗药物敏感性实验研究[D];桂林医学院;2010年
7 陈玉升;胶质瘤患者血清OY-TES-1截短蛋白抗体的检测及临床意义分析[D];广西医科大学;2011年
8 陈有林;脑源性神经营养因子与Neuritin基因在胶质瘤中的表达与意义[D];泸州医学院;2011年
9 赵玮;CCNG2在脑胶质瘤中的表达及与化疗关系的实验研究[D];第二军医大学;2011年
10 张胜平;脑胶质瘤肿瘤干细胞和肿瘤细胞基因差异分析[D];昆明医学院;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 李维方 ,张光霁,朱诚,金由辛,卢亦成;VEGF反义寡核苷酸抑制荷瘤大鼠胶质瘤血管生成的作用和效果[J];解放军医学杂志;2003年02期
2 邓艳春,药立波,刘新平,聂晓燕,王吉村,张晓光,苏成芝;人脑内一含有ACP样结构域新基因的发现[J];生物化学与生物物理进展;2001年01期
3 李剑,刘新平,林树新,邓艳春,孟庆军,张文红,李树钧,聂晓燕,药立波;一种新的抑癌候选基因——NDR2在人类正常组织及相应肿瘤中的表达[J];生物化学与生物物理进展;2002年02期
4 杜固宏,周良辅,毛颖,吴劲松;神经导航手术252例临床应用[J];中华神经外科疾病研究杂志;2002年04期
5 甄海宁;章翔;杨彤涛;吴元明;白文涛;付洛安;章薇;高大宽;胡世颉;王西玲;;短发卡RNA特异性抑制Survivin基因在U251细胞中的表达[J];中华神经外科疾病研究杂志;2005年06期
6 林伟;章翔;张璟;张健;刘军叶;王西玲;;稳定整合靶向性MSP58基因RNA干涉载体的胶质瘤细胞系建立[J];中华神经外科疾病研究杂志;2007年04期
7 邓艳春,药立波,苏成芝;PH结构域研究进展[J];生命科学;2000年03期
8 高之宪,王忠诚,张懋植,王彩云;应用神经导航系统对成人幕上胶质瘤手术切除的临床研究[J];中华神经外科杂志;2003年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王江;林伟;章翔;张璟;张健;吴琳;刘新平;药立波;;MSP58基因小干扰RNA对胶质瘤细胞系U251增殖的影响[J];中华神经外科疾病研究杂志;2009年01期
2 张丽英;李青;陈广生;叶菁;张丰;李繁烦;林圣彩;;Axin基因的表达对神经胶质瘤细胞系C6生物学特性的影响[J];现代肿瘤医学;2006年05期
3 刘玉梅;欧阳五庆;张自强;马淑燕;杨宝平;;长春碱纳米粒对神经胶质瘤细胞BT325生长的抑制作用[J];中国中药杂志;2008年20期
4 王振华;薛一雪;刘丽波;王萍;;缓激肽诱导胶质瘤细胞内cAMP反应元件结合蛋白磷酸化的实验研究[J];中国药理学通报;2006年12期
5 陈儇;范茹军;毕晓颖;李志超;;氯化甲基汞抗大鼠C6胶质瘤细胞的体外研究[J];吉林大学学报(医学版);2007年02期
6 李光辉;王东林;陈正堂;尹昌林;纪华;吕胜青;;人恶性胶质瘤干细胞的分离与鉴定[J];中华肿瘤防治杂志;2007年13期
7 王振华;薛一雪;;缓激肽对C6胶质瘤细胞分泌白细胞介素-6的影响[J];中国肿瘤临床;2007年13期
8 赵澎;胡微;张亚卓;孙梅珍;何乐;;RNA干扰技术逆转神经胶质瘤细胞多药耐药性[J];中华肿瘤杂志;2006年03期
9 崔俐;林卫红;杨弋;徐丹;王绍;张淑琴;;抑胶素对大鼠C6胶质瘤细胞血管内皮生长因子的抑制作用[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期
10 柳影;陈儇;郭杰;毕晓颖;李志超;袁长吉;;氯化甲基汞对人SHG44胶质瘤细胞抗肿瘤活性的体外实验研究[J];中国实验诊断学;2010年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈香丽;王连才;张王刚;刘苏虎;马肖容;陈银霞;曹星梅;何爱丽;周芙玲;;IFN-γ对FBL-3细胞生物学行为的影响[A];第七届全国血液免疫学学术大会暨2008年浙江省血液病学术年会论文汇编[C];2008年
2 邓涤;熊杰;周福祥;谢丛华;张阿丽;邱惠;刘诗权;周云峰;;人喉鳞癌放射抗拒细胞株与其亲本细胞增殖、运动侵袭能力的比较[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年
3 仲建新;王迪;曹新平;丁润生;江枫;张弘;姜胜化;姚微;王华;史锦云;王琴;;MPA对人卵巢癌耐药细胞系CoC_1/DDP体外侵袭的抑制作用[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年
4 李国平;杨恬;严军;;环氧合酶-2促进肿瘤细胞体外促血管生成能力和侵袭能力[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
5 jiangjuxiang;;MT1-MMP瞬时转染HL-60细胞及对其生物学行为的影响[A];第十一届全国血栓与止血学术会议暨血栓栓塞性疾病(血栓与止血)基础与临床研究进展学习班论文摘要汇编及学习班讲义[C];2007年
6 鲍炜;付海京;孟艳玲;杨安钢;;针对HER2的RNA干涉抑制人胃癌细胞的生长和侵袭[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
7 郑大利;黄清玲;蒋雪梅;彭碧文;林建银;;67kD层粘连蛋白受体的克隆、表达及其对肝癌细胞侵袭能力的影响[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
8 董慧敏;魏蕾;范彪;韩国鸽;张懿敏;王永平;周璇;苏可;;小干扰RNA沉默Rac1表达及其对胃癌细胞SGC-7901迁移和侵袭能力的影响[A];中国病理生理学会微循环专业委员会第十二届学术大会会议指南及论文摘要集[C];2007年
9 马勇杰;谷峰;郭华;李文良;张宝刚;;PKCζ作为抑制胶质瘤侵袭的药物靶点的实验研究[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
10 张婷婷;范晋海;贺大林;;三种不同转移潜能的膀胱肿瘤细胞侵袭能力的研究[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;为党不惜一切的模范军医吕士才[N];博尔塔拉报;2006年
2 本报记者 李国 通讯员 熊学莉;如果可能,就走在时代的前面[N];工人日报;2006年
3 田洪涛、记者 乔林生;以战场需求牵引军事医学科研创新[N];解放军报;2006年
4 特约通讯员 姚家文钱文艺 杨瑜 本报记者 唐先武;嘉陵江畔架“心桥”[N];科技日报;2007年
5 本版编辑陈晓霞 徐国斌 李春梅 杨瑜 曾理;群星灿烂靓新桥[N];科技日报;2008年
6 本报记者 胡航宇通讯员 刘胜江 王中委;把课堂作为提高教育质量主战场[N];中国教育报;2008年
7 谭嘉熊学莉 黎斌 葛云峰 通讯员 肖莉丽 王昌文 刘胜江 张玲玲 魏纹 罗莉琼;转运:让伤员像回家一样[N];健康报;2008年
8 刘东邹争春 冯竞;请让我来帮助你[N];科技日报;2008年
9 赵宏姚向阳;推动我国口腔种植医学迅速发展[N];中国医药报;2008年
10 记者 周奔、特约记者王坤;找准内在联系 科学统筹安排[N];解放军报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 林伟;MSP58基因在人脑神经胶质瘤增殖和侵袭中的作用及其机制研究[D];第四军医大学;2008年
2 王春辉;格尔德霉素治疗脑胶质瘤及其与肝细胞生长因子相关性研究[D];吉林大学;2009年
3 宋剑;应用siRNA敲低MMP-9基因表达后对人U251胶质瘤细胞增殖和侵袭作用的体内外研究[D];河北医科大学;2008年
4 刘宝斌;双靶点沉默癌基因PTTG与Survivin对人胶质瘤细胞U251生物学行为的影响及其机制的研究[D];吉林大学;2009年
5 于天浩;蛋白酶体抑制剂MG-132治疗胶质瘤的实验研究[D];吉林大学;2008年
6 栾世海;MiRNA-126和miRNA-34a在胶质瘤细胞中功能的实验研究[D];复旦大学;2010年
7 郭云宝;三氧化二砷抗人脑SHG-44胶质瘤细胞作用的体内外实验研究[D];吉林大学;2008年
8 赵能江;notch-1基因在胶质瘤中的作用及对Akt-mTOR通路的调控[D];福建医科大学;2010年
9 吴小军;Nogo-B在人胶质瘤组织和微血管内皮细胞中差异表达的研究[D];第二军医大学;2008年
10 王海峰;抑制蛋白酶体功能对脑胶质瘤作用的实验研究[D];吉林大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王江;诱导MSP58基因高表达对人脑胶质瘤细胞系生物学特性的影响[D];第四军医大学;2009年
2 徐海芳;神经胶质瘤Wnt信号通路抑制基因甲基化调控研究[D];河南大学;2010年
3 单小松;蜈蚣提取物对胶质瘤细胞的体外抑制作用实验研究[D];河北医科大学;2005年
4 薛景;SHG44细胞辐射抗性与Akt相关性的研究[D];苏州大学;2006年
5 薛进展;Rho/ROCK通路对人U87胶质瘤细胞侵润转移能力调节作用的体外实验研究[D];河南科技大学;2011年
6 吕继博;端粒酶抑制剂AZT对C6胶质瘤干细胞作用的体外实验研究[D];昆明医学院;2010年
7 杨鹏宇;雷帕霉素联合尼莫司汀抑制U87-MG胶质瘤细胞的研究[D];兰州大学;2010年
8 孟葳;3.0TMRI弥散张量成像在脑肿瘤诊断及胶质瘤分级诊断的价值研究[D];广西医科大学;2010年
9 陈宝敏;胶质瘤干细胞生物学特性比较及放射耐受机制的初步研究[D];苏州大学;2010年
10 杨生军;~(11)C-蛋氨酸PET/CT及整合素β1表达与胶质瘤生物学行为的相关性研究[D];昆明医学院;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026