人胎盘来源干细胞的生物学性状检测及用于构建组织工程软骨的实验研究
【摘要】：
目的:
软骨组织的缺损修复是常见的临床问题,目前对软骨缺损的修复主要依靠自/异体软骨以及软骨替代物移植修复等手段,由于存在种种不足而难以达到理想的修复效果。随着干细胞和组织工程学研究的深入,通过构建组织工程软骨组织并移植入患者体内发挥功能为软骨缺损临床修复治疗提供了新的策略。本课题对人胎盘来源干细胞生物学性状进行全面分析,并将其与胶原海绵复合构建组织工程软骨,观察人胎盘来源干细胞作为种子细胞构建组织工程软骨组织的的可行性,为软骨缺损的修复治疗奠定理论依据。
方法:
1人胎盘来源干细胞的生物学性状检测
通过酶消化法从人胎盘组织中获取人胎盘来源干细胞(human placenta- derived mesenchymal stem cells, hPDSCs),分离纯化扩增培养,通过形态学观察、细胞周期、表面标志、染色体核型分析、致瘤实验等手段对其生物学性状进行系统分析;观察在一定的诱导条件下,人胎盘来源干细胞向软骨细胞分化的情况。
2以人胎盘来源干细胞为种子细胞构建组织工程软骨组织
建立牛源性胶原海绵的制备流程,将人胎盘来源干细胞按一定密度接种于胶原海绵上,观察在软骨细胞诱导培养基培养条件下,人胎盘来源干细胞与胶原海绵体外构建组织工程软骨组织的可行性;之后将体外构建的组织工程软组织植入裸鼠体内,观察其在动物体内的软骨形成情况。
结果:
1.通过酶消化法可以从人胎盘组织中分离得到人胎盘来源干细胞,呈贴壁生长方式,传代30代以上生物学性状保持稳定和未分化状态;人胎盘来源干细胞具有良好的增殖能力,倍增时间为34小时,90%以上的细胞处于静止期,表达间质来源的成体干细胞的表面标志而不表达造血干细胞表面标志;人胎盘来源干细胞具有正常的染色体核型,致瘤实验阴性,说明其遗传性状稳定、安全;
2.在体外特定的培养条件下,人胎盘来源干细胞可以向软骨细胞分化,说明人胎盘来源干细胞用于组织工程软骨构建具有可行性;
3.牛源性胶原海绵具有良好的生物学功能和相容性,与人胎盘来源干细胞以一定密度复合并在特定培养条件下可以体外构建成功软骨样组织结构,移植入实验动物体内后,可以形成正常的软骨组织。
结论:
1.人胎盘来源的干细胞具有良好的自我更新能力和向软骨细胞分化能力,可以作为组织工程软骨构建的良好种子细胞来源;
2.胶原海绵具有良好的生物学功能和组织相容性,与人胎盘来源干细胞复合后在特定的培养条件下可以在体内外形成软骨组织;为软骨缺损修复建立了实验基础。
【关键词】：人胎盘来源干细胞 软骨 组织工程 【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R318.0
【目录】：
- 缩略语表5-7
- 中文摘要7-9
- ABSTRACT9-12
- 前言12-13
- 文献回顾13-26
- 正文26-57
- 实验一 人胎盘来源干细胞的生物学性状观察26-43
- 1 材料27
- 2 方法27-33
- 3 结果33-38
- 4 讨论38-43
- 实验二 人胎盘来源干细胞复合胶原海绵制备组织工程软骨的实验观察43-57
- 1 材料43-45
- 2 方法45-47
- 3 结果47-52
- 4 讨论52-57
- 全文总结57-58
- 参考文献58-65
- 个人简历和研究成果65-67
- 致谢67-68
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