收藏本站
《第四军医大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠骨代谢的影响

敖建华  
【摘要】: 骨结构在人的一生中不停的改建并接受各种系统性和局部性因子的调节。最近的组织化学和药理学研究发现神经系统参与骨代谢的调控,其调控由成骨细胞和破骨细胞来媒介的,同时发现人成骨细胞和破骨细胞胞膜上有多种肾上腺素受体和神经肽受体,表明外周交感神经和感觉神经元通过与成骨细胞和破骨细胞的突触接触来动态的局部调控骨的代谢。目前大量的离体和活体实验已经证实交感神经系统参与骨代谢的调控,交感神经系统可以通过对成骨细胞及破骨细胞的调节而间接影响到骨组织代谢。近期的研究表明交感神经及外周感觉神经轴突向成骨细胞及破骨细胞延伸是受到局部骨代谢的动态神经调节。骨膜受到有髓鞘与无髓鞘的感觉神经纤维支配。这两种神经纤维均能释放出降钙素基因相关肽(CGRP)与P物质(SP)。而降钙素基因相关肽(CGRP)与P物质(SP)已经被证实直接和/或间接调节成骨细胞与破骨细胞[1-7]。而交感神经对骨代谢影响的机制尚未完全阐明。 6-羟多巴胺是一种常被用来选择性地杀死多巴胺和去甲肾上腺素神经元的一种神经毒素。作为一种神经毒剂,6-羟多巴胺可以选择性破坏交感神经末梢。同时,在外周应用时不经过血脑屏障,并破坏外周交感神经轴索纤维,是目前一种公认的交感神经化学切除剂[8-9]。 在本研究中,我们采用了三种不同剂量的6-羟多巴胺来选择性的破坏成年大鼠的交感神经纤维,通过μCT扫描观察骨量和结构的变化,采用RT-PCR技术检测mRNA表达水平,采用生物材料力学指标检测骨强度的变化,血浆生化学ELISA分析骨细胞代谢活性标记物含量的变化以及组织学检查来观6-羟多巴胺诱导的交感神经切除对骨代谢的影响。 材料方法 32只8周龄雄性Wistar大鼠被随机分成4组,对照组和三种不同剂量6 -羟多巴胺治疗组(100mg/kg,200mg/kg和300mg/kg),每组8只,6 -羟多巴胺和溶剂(对照组)连续5天在大鼠腹腔内注射,4周后所有动物经腹动脉放血处死,处死前13天和3天前分别腹腔注射四环素和钙黄素。胫骨、股骨、第6腰椎和血浆标本取材。 右侧胫骨的近中骨骺端行μCT扫描,在图形工作站上去除皮质骨的影像,进行海绵状骨三维结构重建,计算出相对海绵状骨骨体积分数(BV/TV),骨小梁数量(Tb.N),骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁分离度(Tb.Sp)。右侧胫骨的近中骨骺端标本μCT扫描后脱水,树脂包埋,制作不脱钙组织切片,在荧光显微镜下观察,测量四环素和钙黄素荧光带的间距,计算骨矿化沉积率[mineral appositional rate,MAR(μm /d)]。 左侧股骨和第6腰椎椎体分别进行三点弯曲和压缩实验,计算骨的生物材料力学参数。左侧股骨和第6腰椎取材后-20℃生理盐水保存,解冻后,分离第6腰椎椎体并磨除两端骨质形成柱状体结构,使用电脑控制的材料力学分析仪进行第6腰椎椎体压缩实验,椎体置于载物台上,连接传感器的压缩杆以1mm/分的速度压迫椎体直至变形;股骨至于间距20mm的两金属杆顶端,进行三点弯曲实验,压缩杆以10mm/分压迫股骨中段部直至折断。计算机自动记录压力-挠度曲线,得出骨的四个生物材料力学参数:强度、延展性、韧性和弹性模量。 从右侧股骨近中骨骺端提取mRNA,并使用RT-PCR技术检测细胞核因子κB受体活化因子配基(Ligand of receptor activator of NFκB,RANKL)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的表达,进行定量分析。RANKL、OPG是成骨细胞正常的分泌分子,RANKL主要作用是刺激破骨细胞的分化,增强成熟破骨细胞的活性并且抑制其凋亡,OPG作为RANKL的诱骗受体竞争性抑制RANKL的作用,从而抑制破骨细胞的形成和功能。RANKL/OPG的相对水平是决定破骨细胞形成及其活性大小的关键因素。 应用ELISA检测血浆中的成骨细胞活性标记物骨钙素(Osteocalcin)和破骨细胞活性标记物抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP 5b)的含量。大鼠腹动脉血置于干燥管离心取血浆保存于-80℃冰箱,解冻后,按照大鼠骨钙素(Rat Osteocalcin)ELISA试剂盒和大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b(Rat TRAP 5b) ELISA试剂盒说明书实验步骤检测血浆中骨钙素和抗酒石酸酸性磷酸酶5b的含量。骨钙素是由成骨细胞分泌的一种活性多肽,在调节骨钙代谢中起着重要作用,是研究骨代谢的一项新的生化标志物。TRAP是破骨细胞骨吸收中表达并被释放进入血循环,TRAP被认为是有效测定骨吸收速率的潜在标记物。 左侧胫骨的近中骨骺端标本甲醛固定48h,20% EDTA脱钙三周,脱水,石蜡包埋,制作石蜡切片,行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,光镜观察,组织形态测定法来测定破骨细胞数目(Oc.N/BS)和骨吸收表面积(Oc.S/BS)。 结果 μCT扫描结果显示大剂量6-羟多巴胺(300mg/kg)组胫骨近心骨骺端海绵骨体积分数(BV/TV)明显增加,骨小梁分离度(Tb.Sp)明显缩小,BV/TV较对照组增加18.9%(P0.05),Tb.Sp减少13% (P0.05)。 第6腰椎椎体压缩实验显示大剂量6-羟多巴胺(300mg/kg)组骨生物材料力学参数如强度、延展性和韧性分别较对照组增加19.7%(P0.01), 28.7%(P0.05)和40.4%(P0.05)。股骨三点弯曲实验结果显示各项生物材料力学参数在实验组和对照组之间无显著差异(P0.05)。 RT-PCR检测显示各剂量组与对照组比较骨保护素(OPG)的表达无显著差异(P0.05),而大剂量6-羟多巴胺(300mg/kg)组中细胞核因子κB受体活化因子配基(RANKL)的表达较对照组显著减少27%(P0.05)。 血浆中骨钙素(Osteocalcin)的含量各剂量组与对照组之间无显著差异(P0.05),在大剂量6-羟多巴胺(300mg/kg)组中抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP 5b)的含量与对照组比较显著减少50.3%(P0.05)。 组织形态测定法测定中等剂量组(200mg/kg)和大剂量6-羟多巴胺(300mg/kg)组破骨细胞数目(Oc.N/BS)较对照组分别显著减少45%(P0.01)和70%(P0.01);骨吸收表面积(Oc.S/BS)分别显著减少25%(P0.01)和37%(P0.01)。 结论 本实验结果显示6-羟多巴胺诱导的交感神经切除可以抑制骨吸收,但对骨生成没有影响,证实交感神经支配参与骨代谢的调节。6-羟多巴胺抑制骨吸收的作用主要发生在大剂量组,小剂量组对骨的代谢无影响,中等剂量组破骨细胞数量和骨吸收表面积显著减少但骨量没有显著变化。6-羟多巴胺抑制骨吸收可能是通过调节破骨细胞数量及活性完成的,对成骨细胞没有影响。
【学位授予单位】:第四军医大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R68

手机知网App
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 林海;失交感神经支配对骨形成与改建及其血管再生的影响[D];福建医科大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 雷德林;王磊;曹健;杜兆杰;杨镟凝;;感觉神经缺失对兔下颌骨牵张成骨影响的生物力学观察[J];创伤外科杂志;2009年03期
2 黄建敏 ,刘晓梅 ,潘丽萍 ,李会春 ,李冬雪;骨折患者血清骨钙素RIA的临床意义[J];放射免疫学杂志;2001年05期
3 徐琳;谭颖徽;葛永玲;裘松波;张萍;周艳;;离断下齿槽神经对兔下颌骨骨折愈合影响的实验研究[J];口腔颌面外科杂志;2006年01期
4 陈孟诗,赖胜祥,李良,陈槐卿,郑虎;大鼠的骨生物力学指标选取及测试[J];生物医学工程学杂志;2001年04期
5 邱明才;孙贵连;王觉英;李松岭;;正常人骨动力学的初步研究[J];天津医药;1987年05期
6 崔伟,刘成林;基础骨生物力学(一)[J];中国骨质疏松杂志;1997年04期
7 苏楠,向青,刘忠厚;放射吸收技术(RA)在骨质疏松诊断中的应用[J];中国骨质疏松杂志;2002年02期
8 严雪铭;福田俊;;大鼠坐骨神经切断对后肢骨密度的影响[J];中国骨质疏松杂志;2007年09期
9 薛延,张海文,杨立红,王芊,郭三巧;血清骨特异性酸性磷酸酶的临床意义[J];中华内分泌代谢杂志;2003年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马小涵;张词;曾剑玉;;神经生长因子在骨创伤愈合中的作用[J];北京口腔医学;2011年04期
2 罗民;孟广伟;马洪顺;;骨质疏松动物模型治疗的黏弹性实验研究[J];北京生物医学工程;2007年04期
3 陈鹏;唐广志;马洪顺;罗民;;几种治疗方法治疗骨质疏松动物骨力学实验研究[J];北京生物医学工程;2008年02期
4 张健;卜淑敏;魏兆松;;运动结合药物对大鼠骨骼密度影响的研究[J];首都体育学院学报;2012年03期
5 崔猛;牛银波;刘广兴;王婷梅;黄勇;梅其炳;;氯化锂对尾吊大鼠骨丢失的防护作用[J];第三军医大学学报;2010年14期
6 曾绍凡;吴艳;朱晓荣;喻荷淋;刘阳;;老年2型糖尿病骨密度、血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b水平的变化及相关性[J];第四军医大学学报;2009年06期
7 黄文秀;陈江;杜志斌;简小冲;;辛伐他汀对去势大鼠骨代谢和股骨生物力学影响[J];福建医科大学学报;2009年06期
8 卢丽;何敬韬;陈珺;陆幸妍;程晴;高建林;蔡惠宁;李青南;;钠离子对幼年期雌性大鼠骨骼生长的影响[J];广东医学;2011年15期
9 朱亦堃;李丽婷;史书红;郗光霞;李兴;赵宝珍;;白三烯B4对骨髓细胞及成骨细胞骨代谢相关基因mRNA表达的影响[J];中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志;2010年03期
10 陈艺;白波;顾冬云;;加载速率对大鼠股骨3点弯曲实验的影响[J];广州医学院学报;2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 陈天华;陈孟诗;姚晓琳;龙维富;陈槐卿;何学令;李良;;一种新的测试胫骨骨生物力学特性的三点弯曲方法[A];2008年全国生物流变学与生物力学学术会议论文摘要集[C];2008年
2 刘迎曦;赵文志;张军;李守巨;李靖年;孙晓江;;在不同应力环境下生长的大鼠股骨的生物力学试验研究[A];大连理工大学生物医学工程学术论文集(第2卷)[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王燕;2型糖尿病骨质疏松症的基础与临床研究[D];河北医科大学;2011年
2 齐尚锋;EDTA-Na_2脱钙模拟椎体骨质疏松体外模型的建立及其临床意义[D];山东大学;2011年
3 胡娅;补肾化痰方对绝经后骨质疏松症模型大鼠骨吸收的影响[D];湖北中医药大学;2011年
4 李昂;健骨二仙丸防治骨质疏松机理及一氧化氮调控机制研究[D];广州中医药大学;2001年
5 朱海;健骨二仙丸防治骨质疏松症机理及蛋白质组研究[D];广州中医药大学;2002年
6 张月红;染料木黄酮预防大鼠骨质疏松的作用及其机制的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
7 丁晓颖;成骨生长肽羧基端5肽OGP_(10-14)及其类似物G48A对大鼠骨代谢的影响[D];天津医科大学;2003年
8 李良;力学刺激对绝经后骨质疏松大鼠成骨细胞作用的细胞分子基础[D];四川大学;2004年
9 崔燎;丹参水提取物(DS)和丹参素(DSU)对实验性糖皮质激素性骨质疏松的作用及机制研究[D];四川大学;2004年
10 赵文志;活骨组织应力与重建适应实验及其生物模型研究[D];大连理工大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙涛;基于DR骨密度分析系统的研究[D];南京医科大学;2010年
2 张恒;复元活血汤对大鼠骨折转化生长因子β_1、血清Ⅰ型胶原、骨钙素表达的影响[D];山东中医药大学;2010年
3 李丽婷;PPARγ2内源性配体对成骨细胞及骨髓细胞骨代谢相关基因表达的影响[D];山西医科大学;2011年
4 张建国;内源性大麻素系统对去势大鼠骨质疏松影响的研究[D];山西医科大学;2011年
5 王峰;不同负荷运动对老年大鼠IGF-I表达及骨骼生物力学性能的影响[D];河北师范大学;2011年
6 谢建丽;二膦酸盐以及维生素D在强直性脊柱炎骨代谢中的作用研究[D];河北医科大学;2011年
7 刘扬;组织工程化构建骨支架材料—无机活性元素支架材料的机械强度的研究[D];安徽医科大学;2011年
8 李家华;不同途径给予外源性神经生长因子NGF对骨折愈合影响的实验研究[D];安徽医科大学;2011年
9 张鹤;梅花鹿胶原蛋白制备及治疗骨质疏松症作用研究[D];长春中医药大学;2011年
10 杨雪平;中药护骨胶囊对糖皮质激素性骨质疏松的预防作用及机理研究[D];广东药学院;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 陈伟辉;应力作用下生长因子对成骨细胞增殖和分化的调节[J];国外医学.口腔医学分册;1999年06期
2 徐琳;谭颖徽;葛永玲;裘松波;张萍;周艳;;离断下齿槽神经对兔下颌骨骨折愈合影响的实验研究[J];口腔颌面外科杂志;2006年01期
3 邱俊;陈海斌;初同伟;张良;;局部血管生成因子的表达与骨折愈合过程中不同压应力的变化[J];中国临床康复;2006年05期
4 王承勇;陈伟辉;林海;曲延征;;神经支配与种植体骨结合和骨感知的相关性[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年04期
5 林海;王承勇;王锦;卢萌;陈伟辉;;神经支配与拔牙窝的骨愈合[J];中国组织工程研究;2012年07期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘建国;骨折愈合过程中用骨钙素免疫细胞化学方法进行骨形成细胞定位[J];国外医学(创伤与外科基本问题分册);1995年01期
2 崔玉明,冯守诚,王冰峰;兔桡骨骨折和骨缺损修复过程中血清骨钙素含量变化的动态观察[J];兰州医学院学报;1996年02期
3 刘彦普,周树,夏斯,方杰,曹建广,雷德林;下颌骨骨折加压固定与钢丝固定的骨愈合组织学研究[J];实用口腔医学杂志;1996年04期
4 刘忠厚,潘子昂,王石麟;原发性骨质疏松症诊断标准的探讨[J];中国骨质疏松杂志;1997年01期
5 陈如山,阎德文,吴清平;测定中指骨骨密度的临床价值[J];中国骨质疏松杂志;1999年04期
6 张戈,秦岭,VWY Hong,郑昱新,Betty Au,石印玉,梁秉中;成年卵巢切除大鼠模型股骨近端pQCT与DEXA的相关分析[J];中国骨质疏松杂志;2002年02期
7 严雪铭,张振德;小鼠不同周龄与骨密度的关系[J];中国骨质疏松杂志;2004年03期
8 戴寿荣,高润;大鼠失神经支配后外源性NGF对骨质疏松的影响[J];中国骨质疏松杂志;2004年04期
9 薛延,贾维维,张海文,陈文利,赵丹慧,褚为靖,何玉香;骨代谢生化指标随年龄的变化及其临床意义[J];中国骨质疏松杂志;1995年02期
10 胡静;颌骨牵张成骨的临床及基础研究[J];中华口腔医学杂志;2005年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 贾刚田;;控制血糖对糖尿病患者骨代谢的影响[J];国外医学(内分泌学分册);1992年04期
2 金慰芳,王洪复,张海军,黄辉;大鼠卵巢局部照射对骨代谢与淋巴细胞免疫功能的影响[J];辐射研究与辐射工艺学报;1996年04期
3 姚吉龙,郑怀美,王洪复,石振安,李桂莲;E_3醚防止老年妇女骨量丢失作用的探讨[J];中国骨质疏松杂志;1997年03期
4 邹邦新;卵巢功能减退对细胞因子合成及骨代谢影响的研究进展[J];细胞与分子免疫学杂志;1999年03期
5 钟文乐,饶桂兰;女性一生中骨代谢趋势及保健[J];井冈山医专学报;1999年03期
6 谢海连,许冰;甲状腺机能亢进患者骨代谢指标的变化[J];河北医药;2001年12期
7 吴丹红,李承晏;抗癫痫药对癫痫患者骨代谢的影响[J];武汉大学学报(医学版);2004年03期
8 赵伟明;赵经川;刘贺荣;刘学英;张宏亮;;吴忠市回汉族孕妇骨代谢相关生化指标测定比较及临床意义[J];宁夏医学杂志;2006年11期
9 顾丰颖;文生萍;曹振辉;谷大海;王志存;王金浩;葛长荣;贾俊静;;维生素D受体基因与骨代谢关系的研究[J];中国畜牧兽医;2008年11期
10 杨丽娜;吕宏伟;王轶婷;;产后早期骨密度及骨代谢的变化[J];现代预防医学;2010年20期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周容;杨延林;熊庆;方芳;邱东生;陈德才;东云华;;绝经后肿瘤患者骨代谢的变化[A];全国老年骨质疏松专题学术研讨会论文汇编[C];2000年
2 马尊良;邢学农;陈超;陈若平;祝捷;任安;叶山东;;胰岛素应用对2型糖尿病患者骨代谢的影响[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年
3 朱欢丽;;骨代谢生化指标测定在中老年人骨质疏松症诊断中的价值[A];中华医学会第三次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨骨质疏松诊断技术继续教育学习班论文汇编[C];2004年
4 陈行;段定红;黄敏丽;张珏华;;不同年龄妇女胫骨超声检测与骨代谢生化指标的关系[A];中华医学会第三次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨骨质疏松诊断技术继续教育学习班论文汇编[C];2004年
5 桂继琮;刘兴党;龚广予;;牛奶和钙强化豆浆对上海市绝经后妇女骨代谢相关指标的影响[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年
6 余凌英;胡昌江;陈杰;黄勤挽;周弋芠;熊磊;;补骨脂盐炙前后对去势大鼠骨代谢的影响研究[A];中华中医药学会中药炮制分会2008年学术研讨会论文集[C];2008年
7 赵淑惠;董洁英;薛延;李谨;;氟化物加钙对骨量和骨代谢的影响[A];全国老年骨质疏松专题学术研讨会论文汇编[C];2000年
8 李卫;苗懿德;;老年男性慢性阻塞性肺疾病患者骨代谢的研究[A];中华医学会第三次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议暨骨质疏松诊断技术继续教育学习班论文汇编[C];2004年
9 杨斌;;添加VitD防治丙戊酸致癫痫儿童骨代谢异常的研究[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
10 侯志梅;;绝经后妇女骨质疏松合并骨质增生患者骨密度及骨代谢改变[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 邹婕;小量激素增强糖尿病女性患者骨代谢[N];医药经济报;2002年
2 记者 周颖;蛇床子素调控骨代谢作用靶点揭示[N];中国中医药报;2010年
3 香港麦迪信医学出版有限公司供稿;多因素影响骨代谢平衡[N];医药经济报;2003年
4 本报记者何佳颐本报特约记者 张献怀;防疏松重在储蓄骨量[N];健康时报;2003年
5 林一;骨质疏松患者静养能防骨折吗[N];中国医药报;2004年
6 余志平;美国ENDO第78届年会召开[N];中国医药报;2005年
7 林琳 寒冰;吸入性类固醇持续治疗可损害骨代谢[N];中国医药报;2006年
8 徐文端;诊断骨质疏松有哪些方法[N];卫生与生活报;2007年
9 辽宁省人民医院 主任医师 郭庆升;骨质疏松症人群范围在扩大[N];卫生与生活报;2008年
10 本报记者 李振辉 通讯员 崔艳玲;警惕老年骨质疏松症“手尾”很长![N];广东科技报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 敖建华;6-羟多巴胺诱导的去交感神经支配对大鼠骨代谢的影响[D];第四军医大学;2010年
2 谢辉;雌激素受体-α36、假想蛋白LOC147710和网膜素-1调控骨代谢的机制研究[D];中南大学;2011年
3 朱飞鹏;肾辐射损伤的骨代谢效应与补肾中药的防治作用及机制研究[D];复旦大学;2003年
4 邵红;地方性氟中毒患者骨骼损害及淋巴细胞基因表达的研究[D];新疆医科大学;2005年
5 马中书;糖皮质激素对维生素D和骨代谢影响的临床和基础研究[D];天津医科大学;2005年
6 王平;运动性骨疲劳大鼠骨代谢与骨调因子的研究[D];苏州大学;2009年
7 周振雷;骨疏康防治笼养蛋鸡骨质疏松症的效果及其机理研究[D];南京农业大学;2007年
8 陈焕芝;吸入糖皮质激素对哮喘患儿骨代谢、骨密度和肾上腺皮质功能的影响[D];山东大学;2005年
9 董荣菂;预防绝经后骨质疏松科学健身指导系统的研究与应用[D];北京体育大学;2005年
10 沈海明;航空辐射环境对民航飞行人员骨代谢的影响及~(137)Csγ射线对体外培养成骨细胞作用的研究[D];天津医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 金绪忠;体育运动对男大学生骨密度和骨代谢的影响[D];江西师范大学;2003年
2 莫凤媚;女性骨质疏松影响因素的探讨[D];广西医科大学;2005年
3 郑崇武;产后妇女骨量和骨代谢生化指标变化的研究[D];暨南大学;2000年
4 蔡锡顶;性早熟女童骨代谢特点的研究[D];浙江大学;2005年
5 王怡;大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨丢失的实验研究[D];山西医科大学;2005年
6 邓益锋;维生素D_3对青年蛋鸡骨代谢的影响及中药对笼养蛋鸡骨质疏松症的防治[D];南京农业大学;2001年
7 赵丽娜;抗癫痫药物对儿童骨代谢的影响[D];河北医科大学;2005年
8 刘娟;人甲状旁腺激素在大肠杆菌中的表达[D];昆明理工大学;2005年
9 张维嘉;激素性ANFH股骨头内有机物骨胶原、蛋白聚糖、脂肪含量的测定及意义[D];佳木斯大学;2007年
10 杨妤欣;2型糖尿病大鼠早期骨微结构改变及BMP-2的基因表达[D];重庆医科大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026