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成束蛋白Fascin-1在非小细胞肺癌迁移、侵袭和增殖中作用的研研究究

赵晋波  
【摘要】: 目的肺癌是目前世界范围内发病率和死亡率第一位的恶性肿瘤。转移是肺癌病人死亡的主要原因。成束蛋白Fascin-1在多种肿瘤组织中异常的表达增高,并且同肿瘤的转移密切相关。但是,其在肺癌中的作用尚不明确。本课题旨在研究Fascin-1在非小细胞肺癌迁移、侵袭和增殖中的作用,为肺癌转移的防治提供新靶点,开辟新的途径。 方法 (1)收集98例临床非小细胞肺癌(NSCLC)病人的癌组织标本、配对正常肺组织,以及临床病理信息。采用免疫组化的方法检测成束蛋白Fascin-1以及Ki-67在肺癌组织以及正常肺组织中的表达。分析肺癌组织与正常肺组织间Fascin-1表达的差异;按年龄、性别、病理类型、临床TNM分期、区域淋巴结转移情况以及增殖状态分别进行分组,分析Fascin-1的表达与上述临床病理特征的相关性。 (2)体外克隆Fascin-1基因,并构建pcDNA3.1(+)-fascin-1真核表达载体;采用脂质体转染法转染肺癌A549细胞系;通过筛选后建立稳定的Fascin-1过表达克隆(pcDNA3.1(+)-fascin-1-2,pcDNA3.1(+)-fascin-1-5)。分别采用扫描电镜以及激光共聚焦显微镜观察Fascin-1对A549肺癌细胞形态结果的影响。 (3)为了进一步研究Fascin-1对A549细胞迁移、侵袭和增殖的影响:①采用划痕实验以及Transwell迁移体外实验检测Fascin-1对A549细胞迁移能力的影响;②采用Matrigel侵袭实验体外检测Fascin-1对A549细胞侵袭能力的影响;③采用裸鼠肺转移实验体内检测Fascin-1对A549细胞转移能力的影响;④采用MTT实验以及流式细胞技术体外检测Fascin-1对A549细胞增殖能力的影响;⑤采用裸鼠皮下成瘤实验以及免疫组化的方法检测Fascin-1对A549细胞体内增殖能力的影响。 结果 (1)免疫组化检测结果显示:Fascin-1在肺癌组织中主要定位与阳性细胞胞浆和胞膜上,呈局灶性或弥漫性表达,其表达率为83.67%(82/98);在肺癌组织,毛细血管内皮细胞及树突状细胞中呈阳性表达,而支气管肺泡上皮细胞及肺大血管内皮细胞中呈阴性表达;Fascin-1表达在不同性别、年龄以及病理类型之间无明显统计学差异(P>0.05),但是同TNM分期以及区域淋巴结转移密切相关(P<0.05)。在TNM分期中,I期患者Fascin-1的表达率为50.00%(7/14),IIa/b期病人中的表达率为82.05%(32/39),IIIa/b期病人中的表达率为95.56%(43/45)。Fascin-1在N0病人中的表达率为68.97%(20/29),在N1的病人中的表达率为87.50%(35/40),在N2的病人中的表达率为93.10%(27/29)。以Ki-67阳性指数将病人分为低增殖组(Ki-67labelling index≤10%)和高增殖组(Ki-67 labelling index10%),低增殖组中,Fascin-1表达的阳性率为85.71%(18/21),高增值组为83.12%(64/77),各组之间无明显统计学差异。实验结果提示:Fascin-1在非小细胞肺癌中的表达与性别、年龄、病理类型以及增殖状况无关,但是与临床TNM分期以及区域淋巴结转移密切相关。 (2)以Hela细胞mRNA为模板,克隆Fascin-1基因,将其插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建pcDNA3.1(+)-fascin-1重组质粒。采用脂质体转染法将其转染肺癌A549细胞,通过筛选后,建立了一系列稳定表达Fascin-1的克隆。采用RT-PCR以及Western blot检测显示:克隆A549-fascin-1-2和A549-fascin-1-5分别在mRNA及蛋白水平中等量及高表达Fascin-1。为了保证后续实验的严谨性以及可重复性,我们选择这两个克隆进行后续实验。采用扫面电镜观察Fascin-1过表达对细胞形态的影响,结果显示:A549-fascin-1-2及A549-fascin-1-5表面丝状伪足的数目明显增多,并且变细、变长。表明:在肺癌A549细胞中,Fascin-1能够促进细胞表面丝状伪足的形成。为了观察Fascin-1过表达对肺癌A549细胞F-actin的影响,我们采用FITC标记的鬼笔环肽标记A549细胞。采用激光共聚焦显微镜观察,结果显示:在A549-fascin-1-2和A549-fascin-1-5细胞中,细胞呈多角形,且细胞周围大量细长的包含F-actin的丝状突出形成。结果提示:Fascin-1在肺癌A549细胞中通过调节F-actin从而促进细胞丝状伪足的形成。 (3)分别采用划痕实验、Transwell迁移实验以及Matrigel侵袭实验体外检测Fascin-1对A549细胞迁移和侵袭能力的影响,结果显示:同A549和A549-control相比,A549-fascin-1-2和A549-fascin-1-5迁移和侵袭能力显示增强,各组之间具有显著的统计学差异(P<0.05)。裸鼠肺转移实验显示:同A549-control对照组相比,A549-fascin-1-5能够在裸鼠肺部形成大量转移结节,两组之间具有明显同继续差异(P<0.05)。表明:Fascin-1在体内、外均能够促进肺癌细胞的迁移和侵袭。体外采用MTT法检测不同细胞的生长曲线,采用流式细胞检测其S期细胞比例,结果各组之间均无明显统计学差异(P>0.05)。进一步采用小鼠皮下成瘤实验体内检测Fascin-1对A549细胞增殖的影响。结果无论肿瘤细胞生长曲线还是Ki-67指数,各组之间依然没有明显统计学差异(P>0.05)。 结论 (1)Fascin-1在非小细胞肺癌中高表达;Fascin-1的表达同临床TNM分期以及区域淋巴结转移密切相关,而同年龄、性别、病理类型以及细胞增殖之间无明显相关性。 (2)成功克隆了Fascin-1基因,并构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-fascin-1。构建Fascin-1稳定过表达的肺癌A549细胞系。采用扫描电镜及激光共聚焦技术证实:Fascin-1能够促进肺癌细胞A549丝状伪足的形成。 (3)在肺癌A549细胞中过表达Fascin-1,能够在体内、外均促进肺癌细胞的迁移和侵袭,但是对于肺癌细胞的增殖无明显的影响。Fascin-1可能是专职促进肺癌转移的一个重要基因。 本研究系统地研究了成束蛋白Fascin-1在非小细胞肺癌中的表达以及在肺癌A549细胞迁移、侵袭和增殖中的作用,证明Fascin1能够通过促进丝状伪足形成从而促进肺癌细胞迁移和侵袭。为肺癌转移的防治提供了新的靶点,开辟了新的途径。


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12 ;气管、肺[J];中国医学文摘(肿瘤学);1997年03期
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15 王春波!150040,王瑞芝!150040,乔文波!150040;非小细胞肺癌放化综合治疗的前瞻性随机研究[J];中国肺癌杂志;2000年05期
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19 李国生,张道荣,刘冬,王恩华,邱雪杉,张丽红;p34~(cdc2)在非小细胞肺癌中的表达及意义[J];中国医科大学学报;2002年02期
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