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空肠弯曲菌PEB1介导的肠粘膜高亲和力rBCG的制备及鉴定

邵成  
【摘要】:背景 卡介苗(Bacillus Calmette Guerin,BCG)在长期的临床应用和实验研究中被发现可以诱导机体的Th1免疫优势应答[1],不仅如此,BCG的许多成分也可以单独诱导Th1免疫优势。因此,我们设想将过敏原Der p2基因转入BCG中表达,经过免疫,机体将过敏原当作BCG的成分进行抗原提呈,选择适当的途径接种,就可能诱导出所需要的免疫状态。本课题组前期的工作已经证实:Der p2可以在原核表达系统中表达,且表达量可达总蛋白量的20% [2,3]。为了提高重组BCG与肠道黏膜的亲和力,我们选择空肠弯曲菌膜外蛋白PEB1为媒介,利用重组BCG技术,再次克隆入Der p2-rBCG中,并进行鉴定,以进一步提高疫苗的免疫效能。 目的 利用重组BCG技术,构建能以胞壁形式表达屋尘螨Der p2和PEB1抗原的重组BCG口服哮喘疫苗pCW-Der p2-PEB1-rBCG。 实验方法和结果 以pCW-Der p2质粒和pUC-PEB1质粒DNA为模板扩增基因,构建出重组质粒pCW-Der p2-PEB1。将重组质粒电穿孔转入BCG感受态细胞,潮霉素抗性筛选rBCG阳性克隆。阳性rBCG经PCR特异性扩增目的基因片段,证实其中含有目的基因。用抗Der p2单克隆抗体和制备的小鼠PEB1抗血清对rBCG进行间接免疫荧光鉴定,证实其成功。 结论 成功地构建了胞壁表达Der p2-PEB1融合蛋白重组BCG。为基因工程疫苗的研制奠定了基础。


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