Mitosin与ATF4的功能性相互作用及其对细胞和病毒cAMP效应元件的调控
【摘要】：
着丝点在有丝分裂染色体忠实地传递给子代细胞的过程中起重要作
用，对于遗传物质的稳定性及生物的正常发育有重要影响。Mitosin为一分
子量350kDa的着丝点蛋白，它在有丝分裂期短暂定位于着丝点动粒的外层
和纺缍体极。本研究利用已经鉴定的mitosin两个动粒定位功能域
ATK（mitosin氨基酸序列2094～2487+2792～2887）和TG（mitosin氨基酸序列
2488～3113）作为诱饵，通过酵母双杂交系统从胎盘库中筛选出mitosin结合蛋
白ATF4/CREB2 N端缺失的两个部分编码区，分别位于ATF4氨基酸序列
56～351和185～351。缺失实验表明，ATF4/CREB2的bZip功能域和mitosin
的中心区（mitosin氨基酸序列2792～2887位置）以及2864位置的半胱氨酸是
二者相互作用所必需的。利用GST融合蛋白的体外结合实验同样证实了二
者的相互作用。从而表明mitosin和ATF4的结合与mitosin和动粒的相互作
用存在类似的机制。凝胶延迟实验证实，体外表达的ATF4能特异结合于通
用CRE位点（TGACGTCA），而mitosin氨基酸序列2488～2644功能区干扰
ATF4与CRE形成复合物；相反，mitosin 2645～3113功能区则能够与ATF4
以及CRE形成一个稳定的三元复合物，提示两个蛋白可能存在二聚化。与
ATF4抑制内啡肽启动子下的报告基因类似的是，本研究通过CHO细胞中
的短暂转染实验发现，ATF4和mitosin协同抑制E-selectin启动子下游的荧
光素酶报告基因，而ATF4虽然同样能抑制Ⅰ型T细胞的白血病病毒末端重
复序列下的报告基因，但mitosin 2488～3113功能域却具有激活病毒LTR下
游报告基因的功能，这表明mitosin通过与ATF4的相互作用，可能调节细
胞基因的表达并可能在部分病毒感染所引起的细胞转化过程中起一定作用。
【关键词】：着丝点 mitosin ATF4 CREB2 酵母双杂交系统 细胞周 期 相互作用
【学位授予单位】：中国人民解放军军需大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：S852.3
【DOI】：CNKI:CDMD:1.2001.010293
【目录】：
【学位授予单位】：中国人民解放军军需大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：S852.3
【DOI】：CNKI:CDMD:1.2001.010293
【目录】：
- 缩略词对照表5-7
- 论文摘要7-8
- 前言8-9
- 真核生物着丝点的结构和功能研究进展9-29
- 真核生物着丝点的结构特征9-11
- 着丝点的结构蛋白及其功能11-12
- 动粒与微管运动12-14
- 动粒参与有丝分裂检查点控制14-17
- MITOSIN的结构和功能17-19
- 参考文献19-29
- 效应cAMP的信号传导和基因调控29-40
- cAMP效应元件及其结合蛋白29-31
- CREB蛋白的功能及调控31-33
- CREB与病毒原癌蛋白结合调节病毒基因33-34
- ATF4的结构和功能研究进展34-37
- 参考文献37-40
- 第一部分 应用酵母双杂交系统筛选mitosin结合蛋白40-50
- 1 材料与方法40-45
- 2 结果45-48
- 3 讨论48-50
- 第二部分 Mitosin与ATF4结合功能域的鉴定及体外结合实验50-58
- 1 材料与方法50-53
- 2 结果53-56
- 3 讨论56-58
- 第三部分 Mitosin对ATF4 DNA结合活性的影响58-65
- 1 材料与方法58-61
- 2 结果61-63
- 3 讨论63-65
- 第四部分 ATF4和mitosin对E-selectin和HTLV-1调控序列的调节作用65-76
- 1 材料与方法65-67
- 2 结果67-68
- 3 讨论68-72
- 参考文献72-76
- 结 论76-78
- 英文摘要78-80
- CURRICULUM VITAE80
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