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《中国人民解放军军需大学》 2001年
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鹅细小病毒和番鸭细小病毒部分基因组克隆、序列分析及VP2-VP3基因的表达

李雪梅  
【摘要】: 根据国外己发表的GPV B株和MPV FM株基因组核苷酸序列设计了 四对引物,分别对国内四株鹅细小病毒分离株和两株番鸭细小病毒分离株 的非结构蛋白(NS)基因和主要结构蛋白(VP2- VP3)基因进行PCR扩增, 并进行几种内切酶的酶切分析比较,证实两种病毒NS基因和VP2-VP3 基因具有较高同源性,但酶切位点有较大差异:GPV NS基因缺乏Sac I 位点,存在Pst I位点;而MPV的NS基因则含有Sac I位点,却无Pst I 位点。另外发现,与国外毒株和GPV CC株不同,GPV FS、GPV JL 株均含有EcoR I位点。GPV VP2-VP3基因含有B_gⅠⅡ、Dra Ⅰ位点,而 无Xba Ⅰ位点;MPV VP2-VP3基因则与之相反。因此可以通过对两段基 因内切酶酶切分析结果的差异,将两种病毒进行鉴别区分。 将GPV CC株、GPV FS株和MPV YZ株和MPV FS株的ns基因和VP2-VP3 基因分别克隆到pCR3.1 T载体,并进行核苷酸序列分析比较。结果表明: GPV CC株、GPV FS株、MPV YZ株和MPV FS株的NS基因均含有1884个 核苷酸,编码628个氨基酸。GPV和MPV同一种病毒不同毒株之间NS基 因核苷酸和氨基酸序列同源性在92.7%~99.3%和96.5%~99.4%之间;而 GPV和 MPV两种病毒之间的核苷酸和氨基酸序列同源性则为79.6%~83.0% 和86.9%~90.7%;其中GPV FS株的变异较大,变异主要区域在460~480 位氨基酸。 GPV CC株、GPV FS株、MPV YZ株和MPV FS株的VP2-VP3基因核苷 酸数为1764,编码528个氨基酸。同一病毒的不同毒株之间VP甚-VP3基 因核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为93%~99.5%和96.3%~98.6%, 但GPV FS弱毒株与GPV CC株和国外参考毒株GPV B株之间核苷酸序列 以及氨基酸序列差异较大:GPV和MPV两种病毒之间核苷酸和氨基酸序 列同源性则分别为78.3%~80.6%和84.8%~87.6%,并且两种病毒之间在 氨基酸序列一些区域存在较大差异。GPV和MPV VP2-VP3基因核苷酸和 氨基酸序列的差异可能与这两种病毒毒力、抗原性可能有一定的关系。 为进一步探讨GPV和MPV主要结构蛋白的特性与功能。分别将GPV 和MPV VP2-VP3基因插入到原核表达质粒pET-28a的多克隆位点上,构 建了表达两种病毒VP2-VP3基因的原核表达载体pEGVP1和pPEMVP。将它 们分别转化到宿主表达菌BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳可见表 且 且 中文须县 一 达产物的分子量均约为 75kDa和 60kDa;Western blot检测表达产物与 相应抗体具有一定的反应原性。另将这两种病毒的W-VP3基因分别克 隆到核酸疫苗质粒PIRESI neo载体上,构建了核酸疫苗重组质粒PIGVPI 和PIMVP,重组质粒转染到鹅胚成纤维细胞和番鸭胚成纤维细胞上,经 Western blot检测证明,GPV和 MPV VPZ-VP3均获得表达并具有良好的 反应原性。
【学位授予单位】:中国人民解放军军需大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S852.65

【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 毕玉海;鹅副粘病毒F基因与鹅细小病毒VP3基因遗传变异及其表达研究[D];吉林大学;2006年
2 王欣;番鸭细小病毒的分离鉴定、VP基因的克隆及其原核表达[D];西南大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【共引文献】
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3 蒋再学;陈征兵;林文;余邵华;竺薇;张晓明;罗满林;;仔猪伪狂犬PCR鉴定及病毒分离[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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9 程由铨;雏番鸭细小病毒病(MUSCOVY DUCKLING PARVOVIROSIS)[J];福建畜牧兽医;1995年04期
10 娄高明,杜伟贤,陈建红;雏番鸭细小病毒病研究进展[J];广东畜牧兽医科技;1999年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【二级参考文献】
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【相似文献】
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国重要报纸全文数据库 前8条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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10 杜鑫;小鹅瘟病毒延边分离株VP3基因克隆及单管巢式PCR诊断方法的建立[D];延边大学;2008年
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