醛固酮对胎儿心脏成纤维细胞增殖、胶原表达及相关基因的影响

【摘要】：目的探讨人胎儿心脏成纤维细胞(HFCFS)经不同浓度的醛固酮(ALD)干预后增殖的变化以及对细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响,寻找和探讨醛固酮致心肌纤维化的相关信号分子。 方法采用胶原酶Ⅱ消化法、差速贴壁法、差速脱壁法获取并纯化HFCFS,在不同浓度醛固酮作用下,应用CCK-8活细胞计数试剂盒检测细胞的增殖率。应用RT-PCR方法检测细胞中Ⅰ型胶原前胶原A1(COL1A1)和Ⅲ型胶原前胶原A1(COL3A1) mRNA的变化,应用Westem blot检测CoL1A1. COL3A1蛋白表达的变化,人基因组表达谱芯片检测表达差异基因。 结果ALD可浓度依赖性促进HFCFS增殖；在一定浓度范围内(10-9、10-8、10-7mol/L),ALD可明显促进HFCFS中COL1A1.COL3A1表达,而10-6mol/L的ALD没有明显作用,10mol/L的ALD甚至起到抑制作用；芯片筛选获得CCL2、DAAM1、POLR2A、SDC1、HSPA1A、CLDN14等差异表达基因。 结论ALD可促进HFCFS的细胞增殖,其增殖程度随浓度升高而升高；ALD在一定浓度范围内可以促进COL1A1和COL3A1表达,高浓度ALD对两种分子表达具有抑制作用。醛固酮干预后,HFCFS在细胞增殖,COL1A1、COL3A1的mRNA和蛋白表达并不完全呈线性对应关系。醛固酮促心肌纤维化其信号转导通路复杂,CCL2、MAKP、Wnt等信号分子可能起重要作用。